不同部位和颗粒大小对灵芝茶药用成分的影响*

袁学军，陈忠荫，陈光宙，陈永敢，范平杰

(琼州学院生物科学与技术学院，海南 三亚 572000)

灵芝素有“仙草”之誉。灵芝的药理成分非常丰富，其中有效成分主要包括灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、16种氨基酸、蛋白质、甘露酣、香豆精苷、生物碱、有机酸微量元素等。现代药理与临床实践进一步证实灵芝多糖是灵芝扶正固本，滋补强壮，延年益寿的主要成分，对人体具有双向调节作用，所治病种，涉及心脑血管、神经、内分泌等各个系统，尤其对肿瘤、肝脏病变、失眠以及衰老防治作用十分显著，且无毒副作用［1－4］。目前，国内外学者已经对药用灵芝中活性成分进行不同的研究，包括灵芝活性蛋白［5－8］、灵芝多糖［9－11］、灵芝三萜［12－14］和灵芝酸［15－17］等，栽培条件对灵芝活性成分的影响也有部分报道［18－21］。到目前为止灵芝的不同部位和破碎后不同颗粒大小对灵芝活性成分的影响鲜有报道。

1 材料与方法

1.1 材料和药品

1.1.1 材料准备

7号灵芝采收后及时将污物清理干净，60℃条件下，在干燥箱内干燥24 h，选择15个完整的子实体，粉碎，用筛孔直径分别为0.075 mm、0.1 mm、0.25 mm、0.5 mm、1.0 mm、2.0 mm过筛，均取3 g，最后用带拉链的塑料带密封备用。

1.1.2 药品

葡萄糖由广州化学试剂厂提供;熊果酸和香草醛由上海晶纯试剂有限公司提供;牛白蛋白和考马斯亮蓝G250由国药集团化学试剂有限公司提供;活性炭、蒽酮、三氯甲烷、磷酸、冰乙酸、氯化钠、硫酸铵、碳酸氢钠、盐酸、氢氧化钠、无水乙醇、硫酸和高氯酸均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 测定方法

灵芝多糖的测定参考蒽酮－硫酸法［22］，用葡萄糖做的标准曲线为:y=0.7622x+0.0122，R2=0.998。

灵芝蛋白的测定参考考马斯亮蓝G－250法［22］，用牛血清白蛋白做的标准曲线为:y=0.6643x+0.0009，R2=0.999。

灵芝三萜的测定参考直接光度法测定法［23］，用熊果酸做的标准曲线为:y=0.4144x－0.01，R2=0.9934。

1.2.2 统计分析

用南京农业大学王韶华教授发明的Stst软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同部位对灵芝茶活性成分的影响

灵芝不同部位对灵芝药用活性成分的影响见表1。

表1 不同部位对灵芝活性成分的影响

结果显示，多糖的含量3个处理相比差异极显著，菌柄多糖含量显著高于菌盖;蛋白质的含量3个处理相比差异极显著，菌柄蛋白质含量也显著高于菌盖;完整的子实体中三萜含量与菌盖中相比无差异，但与菌柄相比有显著性差异，但菌盖中三萜含量高于菌柄。总之，多糖和蛋白质的含量柄中均高于菌盖，但三萜的含量菌盖高于菌柄。

2.2 不同颗粒大小对灵芝茶活性成分的影响

不同颗粒大小对灵芝茶活性成分的影响见表2。

表2 不同颗粒大小对灵芝茶药用成分的影响

结果显示，多糖的含量6个处理相比差异极显著，其中0.075 mm～0.1 mm处理对多糖含量最大，其次是0.1 mm～0.25 mm处理，但1 mm～2 mm处理对多糖含量影响最小，随着颗粒的增大，多糖含量基本呈逐渐降低的趋势;蛋白质含量不同处理之间有的无差异，有的差异极显著，其中0.075 mm～0.1 mm处理的蛋白质含量最高，随着颗粒的增大，蛋白质含量呈明显的降低趋势;三萜含量6个处理相比差异极显著，呈明显的降低趋势。总之，随着颗粒的增大，灵芝多糖、蛋白、三萜的含量基本呈逐渐降低的趋势。

3 讨论与结论

灵芝多糖、蛋白、三萜类化合物是灵芝中的主要活性物质，也是衡量灵芝质量的重要指标［24］。灵芝不同部位药用成分含量的比较研究，到目前为止还没有文献报道，无法与其他类似的试验数据比较。本实验研究的结果表明，在菌盖和菌柄中，多糖、蛋白质、三萜3种药用成分的含量差异性均极显著，多糖和蛋白在菌柄中含量高，而三萜在菌盖中含量高。颗粒大小对灵芝茶药用成分影响较大，随着颗粒的增大，灵芝多糖、蛋白质、三萜的含量基本呈逐渐降低的趋势，从药用和经济角度考虑，灵芝茶颗粒大小选择在0.1 mm～0.075 mm较好。本研究为提高灵芝茶的质量提供技术参考依据。

［1］ YUE Qingxi，GUAN Shuhong．Interaction of Ganoderma triterpenes with docetaxel and cisplatin in cytotoxicity against human carcinoma cells［J］．Chinese Journal of Natural Medicines，2008，6(5):367－371．

［2］ Saltarelli R．Food chemistry［J］．Contents Lists Available at Science Direct Food Chemistry，2009(2):143－151．

［3］刘存芳．灵芝营养成分综述［J］．南江科技，2008(5):122－129．

［4］ Russell R，Paterson M．Ganoderma a therapeutic fungal biofactory［J］．Phytochermistry，2006(4):1985－2001．

［5］ Huie CW，Di X．Chromatographic and electrophoretic methods for Lingzhi pharmacologically active components［J］．J Chromatography B，2004，812(4):241－257．

［6］ Ngai PH，Ng TB．A mushroom(Ganoderma capense)lectin with spectacular thermostability，potent mitogenic activity on splenocytes and antiproliferative activity toward tumor cells［J］．Biochem Bioph Res Co，2004，314(4):988－993．

［7］ Tian YP，Zhang KC．Purification and characterization of a novel proteinase a inhibitor from Ganoderma lucidum by submerged fermentation［J］．Enzyme Microb Tech，2005，36(2):357－361．

［8］ Peng YF，Zhang LN．Characterization of a polysaccharide protein complex from Ganoderma tsugae mycelium by size exclusion chromatography combined with laser light scatter［J］．J Biochem Biophys Methods，2003，56(1－3):243－252．

［9］曹琦珍，林树钱，王赛贞．灵芝多糖肽对人肺癌细胞侵袭的影响 ［J］．北京大学学报:医学版，2007，39(6):653－656．

［10］李颖博，李宇华，王瑞．灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响［J］．中国药理学通报，2008，24(2):250－253．

［11］林华型．灵芝多糖抗肿瘤靶向作用机制研究进展［J］．细胞与分子免疫学杂志，2008，24(4):428－430．

［12］付立忠，吴学谦，李明焱，等．灵芝品种子实体多糖和三萜含量分析与评价 ［J］．中国食用菌，2009，28(4):38－40．

［13］林应兴．灵芝子实体不同生长阶段多糖与三萜类物质含量的研究 ［J］．亚热带农业研究，2009，5(3):152－154．

［14］杨小英，竹剑平．破壁与不破壁灵芝孢子粉三萜类化合物含量比较 ［J］．药物分析杂志，2010，30(11):2227－2228．

［15］杨海龙，吴天祥，章克昌．灵芝酸的分子结构与生物活性的关系 ［J］．无锡轻工大学学报，2002，21(3):249－253．

［16］周昌艳，唐庆九，杨焱，等．灵芝中有效成分灵芝酸的抑制肿瘤作用研究 ［J］．菌物学报，2004，23(2):275－279．

［17］刘海良，宋爱荣，黄芳．树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定 ［J］．食用菌学报，2008，15(3):68－71．

［18］袁学军，陈永敢，陈光宙，等．不同栽培方式对灵芝活性成分的影响 ［J］．中国食用菌，2012，31(5):18－19．

［19］林旭东，康孟利，凌建刚，等．灵芝保健袋泡茶的研制 ［J］．农产品加工，2010，(2):30－35．

［20］王富伟，甘炳成，张小平．不同灵芝主要活性成分差异性分析［J］．安徽农业科学，2010，38(6):2916－2918．

［21］林树钱，王赛贞，林志彬，等．草栽与段木栽培的灵芝活性成分的分离与鉴定 ［J］．中草药，2003，34(10):872－874．

［22］李合生．植物生理生化实验原理和技术 ［M］．北京:高等教育出版社，2000．

［23］王江海，袁建平，徐世平，等．薄层色谱－光度法测定灵芝孢子油中的总三萜含量［J］．中国食品学报，2004，4(3):76－78．

［24］黄小琴，郑林用，彭卫红．灵芝多糖与三萜类的提取纯化工艺研究进展 ［J］．食用菌学株报，2005，12(3):56－62．