平菇优良菌株的筛选*

许月明

(芜湖职业技术学院生物工程系，安徽 芜湖 241003)

平菇 (Pleurotus ostreatus)又称侧耳、北风菌、青蘑、冻菌，在分类学上属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、侧耳属，是世界上种植面积最大的食用菌之一［1，2］。平菇肉质肥嫩，味道鲜美，营养丰富，含有大量的蛋白质、维生素和丰富的矿物质，同时兼有药用功能，因此，平菇与一般蔬菜相比，深受人们喜爱［3，4］。随着社会经济的快速发展，人们生活水平的日益提高，人们对食品安全和食品保健功能的逐步认知，平菇的消费市场将会不断扩大，对平菇需求量也将逐年增加。此外，平菇具有适应性广、栽培技术简单、经济效益显著等特点［5］。因此，平菇发展的前景可观。

我国作为平菇栽培大国，近年来开展了平菇的育种研究工作，并取得一定进展。王敬荣等［6］比较了48株平菇菌株的产量、品质、抗逆性等栽培性状，筛选出适合山东省生产应用的品种。姜新良等［7］对引进的10个平菇菌株进行比较试验，筛选出3个菌株作为下一步杂交育种出发菌株。但在平菇产业发展过程中，适宜品种的选择仍是目前平菇生产中存在的主要问题，每年因平菇品种的选择不当等问题，给平菇生产带来巨大的经济损失［8］。为解决平菇产业发展中存在的问题，推进产业的可持续发展，筛选高产、优质适合本地的平菇新菌株显得尤为重要。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株

试验用的平菇菌株收集自安徽省各菌种厂，均由芜湖职业技术学院生物实验室保存，分别标号为Ps1～Ps12。

1.1.2 培养基

固体培养基 (PDA):马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%，馏水定容;液体培养基:黄豆粉2%、葡萄糖2%、酵母1%、KH2PO40.05%、MgSO4·7H2O 0.05%;栽培袋培养料配方:棉籽壳83%、麦麸10%、过磷酸钙2%、石膏粉2%、石灰3%，含水量65%［9］。

1.2 试验方法

1.2.1 菌株的准备

将冰箱保存的斜面菌株分别进行活化，转接到新鲜固体斜面PDA培养基上，25℃培养7 d后作为菌种备用，并将活化的斜面菌种接种至黄豆粉液体培养基中，25℃温度下130 r·min－1培养7 d后作为液体菌种备用。

1.2.2 菌株生长速度测定

将12个菌株的菌丝在平皿上相互接种后，均产生明显的拮抗线，表明12个菌株为不同的菌株。将活化好的12个平菇菌株接种到PDA平板培养基上，设置5个重复，25℃培养7 d，每天观测菌丝生长并记录菌落直径，菌丝生长均匀、浓密、粗壮且洁白的为优，用“+++”表示;菌丝较浓密、较粗壮且洁白度逊色于优的定为良，用“++”表示;菌丝稀疏，灰白色为一般，用“+”表示［10］。

1.2.3 菌球密度、直径及干重的测定

将液体菌种以10%的接种量接种到黄豆粉液体培养基中，设置5个重复，250 mL三角瓶装液量100 mL，置25℃温度下130 r·min－1培养5 d。将培养好的摇瓶用微量移液器吸取l mL培养液摊匀于培养皿中，在暗背景下用放大镜直观计数菌球密度。培养结束后，随机选取15个菌球，在培养皿中排成1排，皿下衬坐标纸测量样本中全部菌球直径。菌球清洗、3 000 r·min－1离心10 min，于80℃恒温烘干至恒重，测量菌球样品的干重。每菌株5个重复，取平均值［11］。

1.2.4 平菇菌株栽培子实体的比较

选择性状测定结果良好的3个菌株 (Ps5、Ps7、Ps10)用于进一步的子实体产量试验。装入30 cm×15 cm的聚丙烯袋中，每袋约装干料0.4 kg，在栽培料拌料时，每个供试菌株接40袋，两端用绳扎紧，常压灭菌，保温8 h，冷却至30℃后室内开放式接种。当菌球覆盖整个栽培袋开始现蕾后，转移到菇架，解开封口绳，保持25℃，85%空气湿度，适量光照，进行出菇。待平菇子实体菌褶出现开裂时视为成熟，开始采摘。同时观察出菇情况，采收并称重。子实体采摘后，于80℃烘箱烘干至恒重，称量干重，记录生物量数据［12］。

1.3 数据处理

试验数据应用SPSS(2001)数据处理系统进行统计分析，经方差分析后进行Duncan's多重比较，检验各处理间的差异显著性 (p=0.05)。

2 结果与分析

2.1 菌丝生长性状的测定

菌株的生长性状见表1。

由表1可以看出，不同菌种在PDA培养基中长势差异较大，菌株Ps5、Ps7和Ps10菌落的日生长量最大，分别为1.28 cm、1.32 cm和1.29 cm，经统计分析，其与其它9种菌种相比差异达到极显著水平;而Ps1的生长速度最慢，日生长量仅为0.44 cm。同时，菌株Ps5、Ps7、Ps9和Ps10的菌丝生长均匀、浓密、粗壮且洁白。

表1 菌株的生长性状

2.2 摇瓶菌球生长情况的测定

菌株的菌球生长情况见表2。

表2 菌株的菌球生长情况

由表2可知，不同菌种在不同的液体培养基中长势差异较大，菌株Ps5、Ps7和Ps10的菌球干重和平均直径较大，方差分析表明三者间无显著性差异，但与其它9个菌株相比有显著性差异;菌株Ps8和Ps10的菌球密度最大，分别为108.40个和107.20个。综合考虑，Ps5、Ps7和Ps10在摇瓶培养基中长势均好，菌球干重大。试验发现菌株Ps5、Ps7和Ps10菌球浓密且大小均匀，因此选用这3个菌株进行下一步的筛选试验。

2.3 平菇子实体出菇时间及产量测定

菌株子实体干重和生产周期情况见表3。

表3 菌株子实体干重和生产周期

试验菌株在出菇过程中，Ps10菌株的出菇时间仅为38.60 d，子实体产量达0.46 kg，生物学效率为115.00%，该菌株显蕾时间早，子实体朵大肉厚、柄粗长、菇形圆整，生产周期短，平均产量及生物转化率最高，各项指标均优于其他菌株。其次为Ps5菌株，Ps7菌株各项性状最差。

3 小结

平菇菌种质量好坏直接关系到平菇产业能否健康发展。目前平菇市场缺乏统一管理，菌种退化、老化，品种混杂等问题严重。拮抗作用是鉴定不同菌株的传统方法，菌丝间的拮抗反应是菌株之间不同遗传特性的表现［13，14］。本试验通过对12株平菇供试菌株间的拮抗试验，发现供试菌株之间产生了明显的拮抗线，说明各供试菌株之间有较大的遗传差异，属于不同的菌株。

当前，平菇菌种生产仍采用传统的母种、原种、栽培种的固体培养模式，周期长，污染率高，菌龄相差悬殊。而液体菌种周期短、菌龄一致、流动性好、萌发快、污染率低［15］。因此，下一步还需对该菌株液体菌种的发酵条件进行优化。

本试验通过建立标准的培养和观察方法，利用多项指标，采取连续观察，选育出适合本地栽培的商品性能好的平菇优良菌株Ps10。该菌株的出菇时间仅为38.60 d，子实体产量达0.46 kg，生物学效率为115.00%，具有菌丝生长旺盛、致密;菌球的干重和直径大;菇形圆整、浓白色、朵大、丛生;出菇周期短、产量高、生物转化率高的优点，在今后平菇栽培中具有巨大的应用潜力。

［1］王桂芹，李戈．平菇种质资源评价 ［J］．中国食用菌，2006，25(1):14－17．

［2］ Camphell AC，Slee RW．Commercial cultivation of shiitake in Tsiwan and Japan［J］．Mushroom，1987(2):170．

［3］王钊，梁瑞璋．平菇优良菌种筛选及其营养成分研究 ［J］．中国食用菌，1999，18(2):9－11．

［4］ Ahn YJ，Park SJ，Lee SG．Cordycepin:selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp．［J］．Journal of Agricultural and Food Chemistry，2000，48(7):2744－2748．

［5］杜敏华．食用菌栽培学［M］．北京:化学工业出版社，2007．

［6］王敬荣，张玉昆，王德源，等．平菇优良菌种 (株)筛选［J］．山东科学，1994，7(3):52－55．

［7］姜新良，赵占春，李蓁，等．十个平菇菌株比较试验 ［J］．食用菌，2006，28(6):18－19．

［8］范可章，陈灵，蔡健，等．平菇在12种秸秆主料基质中生长情况的初步研究［J］．安徽农业大学学报，2011，38(5):806－811．

［9］赵占春，姜新良，李蓁，等．平菇杂交菌株A34N22、A34F28的选育 ［J］．中国食用菌，2009，28(3):16－17，27．

［10］赵占春，姜新良，李蓁，等．港平l号生物学特性及栽培技术要点 ［J］．食用菌，2009，31(5):27，36．

［11］孟丽君，王芳，张玉萍，等．平菇液体菌种的制备条件及应用研究 ［J］．中国食用菌，2007，26(5):48－50．

［12］黄清荣，姜华，辛晓林，等．白平菇优良菌株选育研究初报［J］．中国食用菌，2004，23(2):18－21．

［13］王晓峰，张海林，崔鸿文．平菇菌丝生长速度的亲子相关及配合力分析 ［J］．食用菌学报，1998，5(4):l－5．

［14］池惠荣，王朝江．平菇菌丝拮抗作用探讨［J］．食用菌，1998(5):17．

［15］张玉林，谭永忠．平菇液体菌种栽培菌株筛选试验 ［J］．中国食用菌，2007，26(5):32－33．