抗痨胶囊与抗痨丸中有效成分岩白菜素的测定

温俊霞， 任艳平， 朱 红， 张兰桐*

(1.河北省胸科医院药学部 河北 石家庄050041;2.河北医科大学药学院药物分析教研室 河北 石家庄050017)

抗痨胶囊与抗痨丸主要功能为散瘀止血，祛痰止咳，是用于治疗浸润性肺结核、肺虚久咳，痰中带血的中成药。这两种药物的主要成分均为矮地茶、百部、穿破石、五指毛桃、白及、桑白皮，其药材组方比例也相同。但其质量控制标准均沿用部颁标准 (抗痨胶囊为中药成方制剂第三册WS3-B-0555-91，抗痨丸为中药成方制剂第七册WS3-B-1336-93)，仅用化学鉴别法来做主要成分鉴别，质量控制标准较为单一。

岩白菜素 (Bergenin)是抗痨胶囊与抗痨丸的主药矮地茶的主要有效成分，属于异香豆素类化合物，具有良好的镇咳、祛痰、抗炎、护肝、抗病毒和神经保护作用，现已广泛应用于临床。矮地茶Japanese Ardisia Herb为紫金牛科植物的干燥全草，为抗痨胶囊与抗痨丸组方中的主药。《中国药典》(2010年版)对矮地茶中岩白菜素进行定量测定，因此通过对抗痨胶囊及抗痨丸中有效成分岩白菜素进行定性、定量测定，可在一定程度上探讨这两种制剂的质量控制标准，从而为提高其质量控制标准提供依据。

1 仪器与材料

美国Agilent-1200高效液相色谱仪 (四元泵，自动进样器，在线脱气机，柱温箱);Agilent chem office色谱工作站;二极管阵列检测器 (DAD);色谱柱为DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);KQ-100A型超声清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);LG16-W型离心机 (北京医用离心机厂);BP211D型十万分之一天平 (德国Sartorius公司)。

岩白菜素对照品 (100315124-10473563)由上海同田生物技术有限公司提供;不同批次抗痨胶囊1(制药有限公司1)与抗痨丸 (制药有限公司2)均购于河北省胸科医院，抗痨胶囊2(制药有限公司3)购于石家庄康泰大药房，详见表1。甲醇、乙腈均为色谱纯 (美国Tedia试剂公司)，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯。

表1 样品批次及来源

2 方法与结果

2.1 色谱条件［1-13］DiamonsilTMC18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);检测波长为275 nm;柱温为30℃;以甲醇-水 (20∶80)为流动相进行等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;进样体积10μL。

2.2 溶液的制备［1-13］

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照品适量，用甲醇配制成质量浓度为0.6 mg/mL的对照品溶液，即得对照品溶液。

2.2.2 样品溶液的制备 分别取抗痨胶囊、抗痨丸内容物粉碎，过60筛，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，摇匀，精密称定，超声提取40 min，取出，放冷，再精密称定，缺失的质量用75%甲醇补足，摇匀，离心10 min(10 000 r/min)取上清液，即得。

2.3 标准曲线的制备 精密吸取对照品贮备液0.625、1.25、2.5、5、10 mL，分别置50 mL量瓶中，进样并记录峰面积，以各成分的峰面积对应质量浓度来进行线性回归分析，以岩白菜素质量浓度为横坐标 (X)，相应峰面积为纵坐标 (Y)，绘制标准曲线，经回归处理得回归方程为Y=14 378X+33.702(r=0.999 9)，结果表明，岩白菜素质量浓度在7.823×10－3～0.625 8 mg/mL呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 按照2.1项下方法，在同一天内对同一份样品连续测定6次，所得数据经分析后为日内精密度;在连续3 d内对同一份样品进行测定，所得数据经分析后为日间精密度。结果表明岩白菜素的日内、日间精密度RSD分别为0.42%和1.56%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h取供试品溶液进样并测定峰面积。结果表明岩白菜素含有量的RSD均小于0.8%，表明该方法于24 h内基本稳定。

2.6 加样回收率试验 分别取已测定的抗痨胶囊1与抗痨丸3批，各取3份，按照标准加入法的要求，分别精密加入低、中、高3种不同质量浓度的对照品溶液，按第2.2.2项下制备供试品溶液的方法来制备样品溶液，注入HPLC分析，测定样品溶液中岩白菜素的量，并计算平均回收率。结果表明:抗痨胶囊中岩白菜素的低、中、高3种不同质量浓度的回收率范围均在98.4% ～102.2%之间，RSD小于2%，结果见表2。

表2 加样回收率实验结果

2.7 样品测定 取1～7号样品按照第2.2.2项下的方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积并计算质量分数。样品及岩白菜素对照品色谱图见图1。测得岩白菜素的平均质量分数结果见表3。

图1 岩白菜素对照品 (A)、抗痨胶囊1(B)、抗痨丸 (C)、抗痨胶囊2(D)HPLC色谱图

表3 样品中岩白菜素测定结果

3 讨论

3.1 分别比较了甲醇-水、乙腈-水等不同的流动相系统进行梯度、等度洗脱试验，选择分离系数好，时间尽可能短的最佳流动相条件，最终确定甲醇-水 (20∶80)等度洗脱作为定量测定条件。

3.2 通过DAD检测器，对主要色谱峰在200～400 nm之间进行全波长扫描，选择出峰数较多，各组分都有较好吸收的波长275 nm作为检测波长。

3.3 比较了不同温度20℃、25℃、30℃、35℃对分离效果的影响，最终选择30℃作为合适的柱温。

3.4 分别考察了提取方式 (超声和加热回流)，提取时间(20 min、30 min、40 min、50 min和60 min)，提取溶剂(水、25%、50%、75%及100%甲醇)对不同色谱图的影响，最终确定以75%甲醇超声提取40 min作为最佳提取条件。

3.5 由结果看出，3种样品中岩白菜素平均质量分数有较大差别。抗痨胶囊2中岩白菜素质量分数最高，平均达到5.99 mg/g，而抗痨胶囊1与抗痨丸中岩白菜素的平均质量分数分别为0.56 mg/g与1.72 mg/g，差异明显，因而得知，在所测样品中，抗痨胶囊2主要成分的质量分数均较其他两批制剂高。其可能的原因为不同厂家生产的制剂由于其制备工艺不同，所用原药材产地、添加辅料及赋形剂不同，均有可能造成所生产的药品在某一成分量上存在差别。

4 结论

通过HPLC法对不同厂家生产的抗痨胶囊与抗痨丸中的有效成分岩白菜素进行了定量测定，并对所测数据结果进行了分析比较。表明所测样品中抗痨胶囊2的岩白菜素量，远远高于其他两批样品。

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