利培酮和消幻汤合并使用对谷氨酸功能低下致小鼠高活动性与偏好行为的影响

2013-09-13杨春娟刘飞虎

中国医药导报 2013年28期

张燕杨春娟刘飞虎肖凡袁方

1.西安市精神卫生中心，陕西西安 710061；2.西安医学院，陕西西安 710068；3.陕西中医学院，陕西咸阳 712000

研究报道谷氨酸功能障碍可能参与了精神分裂症的发病机制，许多学者证明谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（N-me thy-l D-aspartate，NMDA）受体的拮抗剂地卓西平马来酸（MK-801）能引起拟精神分裂症的症状和认知功能损害[1-2]。因而MK-801已成为许多研究者建立精神分裂症动物模型的工具药[3-4]。精神分裂症是临床最常见的社会危害性大，治愈率低的精神疾病[5]。虽然非典型抗精神病药如利培酮可以明显改变精神分裂症精神症状，但其不良反应较多较常见，使患者服药的依从性下降，故降低了疗效[6]。随着研究的深入，中西药物合并使用治疗精神分裂症已显示出明显的优势及前景[7]。西安市精神卫生中心将消幻汤（又名：清幻灵）主要用于肝胆湿热引起的幻听，情绪不稳，脉玄舌尖红，苔薄黄的患者，临床应用已四十余年。而且经过文献查阅和前期研究表明，消幻汤中主要组成成分的龙胆草、磁石、酸枣仁、柴胡等对中枢神经系统均有明显的调节作用[8-10]。所以本实验研究利培酮和消幻汤合并使用对于MK-801诱导谷氨酸低下精神分裂症小鼠模型的作用，为中西药物合并使用治疗精神分裂症提供更多基础研究资料。

1 材料与方法

1.1 实验动物

70只健康昆明种小鼠雌雄各半，体质量为（20±2）g，清洁级，购自西安交通大学医学院实验动物中心。标准啮齿类饲料饲养且自由饮食，维持室温（22±1）℃。适应3 d后开始实验。

1.2 药物与试剂

MK-801（购自美国Sigma公司）溶于生理盐水。利培酮（购自西安市杨森制药有限公司，批号：H2001 0309）研成粉末以蒸馏水溶解。消幻汤方剂药材（购自陕西省老百姓大药房），将磁石加入水中煮沸10 min，后加其余药物煮沸40 min，过滤取汁，二煎30 min，两次滤液合并浓缩成每毫升含生药0.799 g的药液。

1.3 主要仪器

BA-200避暗仪、DT-200跳台仪、ZZ-6自主活动仪均购自成都泰盟科技有限公司。

1.4 分组与造模

昆明种小鼠70只随机分为五组，每组14只，适应3 d，其中一组作为空白组腹腔注射给予生理盐水，其余四组连续腹腔注射 MK-801[（0.072 mg/mL，5 mL/（kg·d）]2 周。

1.5 给药情况

造模后给药，随机编为模型组、利培酮组、消幻汤组、利培酮和消幻汤合并使用组（简称合并组）。其中空白组、模型组灌胃给予蒸馏水，利培酮组、消幻汤组、合并组，分别给与利培酮[0.121 mg/mL，10 mL/（kg·d）]、消幻汤[（0.799 g/mL，10 mL/（kg·d）]、利培酮[（0.242 mg/kg，5 mL/（kg·d）]和消幻汤[（1.598 g/mL，5 mL/（kg·d）]。

1.6 方法

1.6.1 自主活动实验自主活动仪由可分离反应箱和微电脑控制器组成，同时对6只小鼠进行自主测试实验。实验前，各组小鼠均为健康活泼的小鼠，轻捉拿小鼠，放入活动箱内先适应3 min后开始测定5 min小鼠站立和活动次数。每次实验均在 8∶00～10∶00 和 16∶00～18∶00进行测验，记录每组小鼠站立和活动次数。

1.6.2 避暗法实验[11]被动回避条件反射箱大小为36 cm×12 cm×12 cm。分明暗两间，明间顶盖上方置有小台灯，暗间底部安铜栅，通以33 V、50 Hz伏电流，明暗两室之间有一直径为3 cm的洞口，反射连接一记时器，记录动物从明间通过洞口进入暗间的潜伏期。实验前将避暗潜伏期大于180 s的小鼠弃去不用。实验时将小白鼠头部背着洞口放入明间，小鼠一进入暗间立即受到电击，而记时器则同时停止记时，取出小鼠，记录每组小鼠进入暗间的平均潜伏期。

1.6.3 跳台法实验[11]实验装置为（10 cm×10 cm×60 cm）被动回避条件反射箱，用不透明黑色塑料板分隔成6间，箱底有铜栅，通以32 V电流，每间置一橡皮垫（高和直径均为4.5 cm）作为动物回避电击，动物的正常反应是跳回橡皮垫上，为此训练10 min并纪录2 min的潜伏时间。

1.7 统计学方法

采用软件SPSS 10.0进行统计学分处理。计量资料以均数±标准差（±s）表示，两独立样本的计量资料采用t检验；多组间的比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 预筛及造模结果

通过避暗法训练实验之后，空白组、模型组、利培酮组、消幻汤组和合并组筛选后只数分别为10、11、10、10、11只。造模结束后，以上各组的平均体重分别为 24.54、24.10、24.01、24.27、24.42 g，组间小鼠只数和体重差异无统计学意义（P＞0.05）。

由表1可知，在造模结束时，模型组动物活动次数明显增加，第2、6周模型组的小鼠站立次数约比空白组多10次。而在随后的4周安慰剂干预下，模型组随着时间推移，高活动性有所下降，但平均活动次数仍比空白组多5次。造模2周末，模型组避药潜伏时间较空白组延长约30 s，但模型组的跳台潜伏期却缩短了3 s。

表1 空白组与模型组测试项目结果（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05

第2周末第6周末空白组模型组空白组模型组10 11 10 11 48.8±11.9 54.3±14.0 46.5±11.3 56.3±7.6 11.3±14.5 36.8±16.2*11.6±11.3 17.4±7.6 230.0±34.8 260.2±6.9 241.2±7.8 255.9±23.5 98.5±34.3 95.5±45.6 117.0±9.4 104.3±28.5测试时间组别只数站立次数（次）活动次数（次）避暗潜伏期（s）跳台潜伏期（s）

2.2 利培酮和消幻汤合并使用对自主探究活动的影响

给药后，利培酮组、利培酮及消幻汤合并使用组站立次数分别为38.5、36.6次，均低于模型组约20次。给药后，利培酮组、合并组活动次数分别为9.0、8.6次，均低于模型组约9次。结果见表2。

2.3 利培酮和消幻汤合并使用对小鼠偏好行为的影响

用避暗仪测小鼠嗜黑暗偏好行为的变化，给药4周后，模型组潜伏期缩短4.4 s，利培酮组、消幻汤组、合并组分别延长13.9、15.0、34.1 s；与模型组比较，合并组潜伏期延长35.5 s（P＜ 0.05），见表3。

表2 小鼠自主探究活动的结果（次，±s）

模型组利培酮组消幻汤组合并组11 10 10 11 56.3±7.6 38.5±26.4 53.4±6.7 36.6±23.9 17.4±7.6 9.0±26.4 15.3±3.1 8.6±23.9组别只数站立次数活动次数

表3 小鼠嗜黑暗偏好行为的观察结果（s，±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05

模型组利培酮组消幻汤组合并组11 10 10 11 260.2±6.9 257.6±24.5 254.9±40.0 259.6±25.1 255.9±23.5 271.6±4.5 270.0±23.7 293.8±6.4-4.4 13.9 15.0 34.1*组别只数造模潜伏期给药潜伏期潜伏期延长时间

用跳台仪测小鼠嗜角落偏好行为的变化，给药4周后，模型组、利培酮组、消幻汤组、合并组平均潜伏期分别延长 8.8、16.8、18.1、20.2 s。其中，模型组延长时间要比上述3组短近10 s，见表4。

表4 小鼠嗜角落偏好行为的观察结果（s，±s）

造模组利培酮组消幻汤组合并组11 10 10 11 95.5±45.6 96.6±33.9 98.0±40.2 96.3±36.3 104.3±28.5 113.5±19.3 114.4±14.8 118.4±7.7 8.8 16.8 18.1 20.2组别只数造模潜伏期给药潜伏期潜伏期延长时间（s）

3 讨论

精神分裂症在传统医学中属“癫病”和“狂病”范畴，病位在神机，与肝胆心脾有关，主要是由于气滞、痰结、血瘀等因素导致脏气不平、阴阳失调、神机逆乱而出现情志失调[12-13]。根据该病特点，消幻汤主要针对肝胆实热所引起的神志失常、情志失调、虚妄见闻等症状所设，通过疏肝泻热，清心活血，安神定志之功效，而调理气血阴阳，达到治疗疾病的目的。由于大部分精神分裂症患者缺乏自知力，治疗初期需尽快控制症状以减少危险情况的发生，临床上采用中西药结合的治疗方法，可减轻治疗中的不良反应[14-16]。

本实验自主活动仪实验证实，连续腹腔注射MK-801（0.072 mg/mL）两周造模诱导，空白组，模型组，合并组自主活动明显增加，其探究活动较空白组相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。苏允爱等[4]结果也表明，MK-801诱导谷氨酸功能低下精神分裂症模型小鼠的自主性活动增多。给药后，消幻汤组探究活动减少次数不明显，则说明消幻汤单独使用对中枢没有抑制作用，仅起到调节作用，利培酮对中枢有明显抑制作用，而消幻汤和利培酮合并使用对小鼠中枢有一定的温和抑制作用。李光华等[5]结果也表明消幻汤成份中的磁石对小鼠的中枢有调节作用。

避暗仪和跳台仪实验证实，消幻汤组避暗潜伏期和跳台潜伏期延长时间均高于利培酮组，则消幻汤的酸枣仁和柴胡等成份可能对小鼠的并对损害学习记忆有保护作用。侯建平等[6]的结果也表明，消幻汤成份酸枣仁能增强学习记忆能力的作用。季吉等[17]研究适当剂量的柴胡注射液在一定时间内具有提高小鼠学习记忆能力的功效，该作用可能与伴随的脑组织抗氧化能力提高和NO含量改变有关。合并组小鼠的学习记忆能力增强促使小鼠远离黑暗和角落的电击伤害。

本研究提示，利培酮药效虽强，但对中枢系统明显抑制作用，而消幻汤药效温和，仅对中枢系统起调节作用，消幻汤对小鼠学习记忆的保护作用强于利培酮。利培酮和消幻汤两种药物合并使用疗效优于利培酮或消幻汤单独使用疗效。利培酮和消幻汤合并使用充分验证中西药结合治疗可以扬各自之长，避各自之短，中西药合用的临床疗效可能优于单纯中药或单纯西药治疗，这对于应用合适药物治疗精神分裂症有十分重要的意义。

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