170例重症手足口病患儿病原学检测分析

宋丽丽 管玉洁 毛彦娜 刘炜

手足口病(Hand-foot-mouth disease，HFMD)由肠道病毒感染引起，主要病原为柯萨奇病毒CA16(CoxAl6)、肠道病毒71(Ev71)及其他人肠道病毒［1］，主要发生于学龄前儿童，重症患儿可并发脑炎、心肌炎等，病死率可达10% ～25%。2012年6月至2012年10月我们对郑州市儿童医院170例重症手足口患儿病原学进行检测，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 170例患儿中男112例，女58例，年龄＜12个月15例，1～3岁129例，3岁以上26例，均有发热、皮疹，体温37.9℃ ～40.1℃，皮疹分布于手、足、口腔、臀部等处，合并神经系统受累表现，出现脑膜刺激征、腱反射减弱消失，经临床诊断为重症手足口病，实验室分离出肠道病毒，CoxAl6、EV7l等特异性核酸检测阳性，符合2010卫生部《手足口病诊疗指南》诊断标准。

1.2 检测方法

1.2.1 采集患者5～8 g新鲜粪便置于无菌采便管内，4℃冷藏，24 h内送检，未及时检测者置-20℃以下低温暂存。

1.2.2 取2～3 g粪便加入装有10 ml PBS、1 g细玻璃珠和1 ml氯仿的离心管中，剧烈振荡30 min，6000 rpm/min离心，取上清液接种至RD细胞、HEp-2细胞后行病毒分离。

1.2.3 采用QIAGEN Viral RNA Mini Extraction Kit试剂盒(CAT︰52904，Fermentas，美国)提取RNA，病毒核酸自动提取，按2009卫生部《手足口病预防控制指南》立即进行RTPCR扩增，采用RT-PCR方法检测病毒核酸，肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒，PCR产物采用3%琼脂糖凝胶，成像分析系统进行分析。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0软件统计分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，比较采用t检验;计数资料以率表示，比较采用 χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 170例中病毒核酸检测阳性142例(81.76%)，其中EV71阳性117例(68.8%)，CA16阳性4例(2.35%)，其他肠道病毒阳性21例(12.35%)，无EV71和CA16均呈阳性者(表1)。

2.2 170例中3岁以下患儿144例，约占84.7%;144例中EV71阳性101例(70.1%)，CA16阳性4例(2.8%)，其他肠道病毒阳性16例(11.1%);EV71阳性者为3岁以下患儿病毒核酸阳性总数的83.5%。

表1 170例重症手足口病患儿病原情况(例，%)

表2 不同年龄手足口病患儿病原学检测结果

3 讨论

手足口病是由肠道病毒引起的急性传染病，多见于婴幼儿，与婴幼儿免疫系统发育不完善有关，整个消化道均可为传染部位，病毒在肠道增殖，传染性强、传播快，短时间内可造成较大范围流行，主要表现为发热及手、足、口腔等部位皮疹或疱疹，多数1周内痊愈，少数患儿出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿及心肌炎，重症患儿可致死亡。

CA16、EV71及其他人肠道病毒为手足口病主要病原，目前尚无有效疫苗。EV71与CA16所致手足口病临床表现难以区别，EV71所致手足口病可引发致死性脑病、脑出血，甚至心肌炎猝死［2］，近年我国重症手足口病病原多为EV71，为病死率升高之主因，早期识别十分重要。

本研究中170例患儿中EV71阳性者117例，CA16阳性4例，其他肠道病毒阳性者21例，提示本地区重症患儿病原以EV71为主，与国内其他重症手足口病主要病原报道一致［3，4］。EV71基因型在流行中不断变化，基因突变可影响其致病性，需进一步研究EV7l在手足口病中的动态变化、病毒变异、基因型与基因重组等问题［5］。其他肠道病毒阳性者约占病毒核酸检测阳性总数的12.35%，提示重症手足口病存在EV71、CA16外其他毒株。

同一流行期可存在多种病毒，也可由不同亚型引起，积极开展手足口病病原检测，提高早期病原学检测水平，可提高重症手足口患儿早期诊断率，控制病情发展，降低病死率，同时有助于明确原体不同时期分布特征及流行趋势，预测本区域手足口病疫情暴发流行，针对性预防控制。

［1］ 赵海霞，韩辅华，张文涛.2008年辽源地区手足口病病例实验室结果分析.中华疾病控制杂志，2010，14(5):468．

［2］ 杨智宏，朱启铭，李秀珠，等.2002年上海儿童手足口病病例中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的调查.中华儿科杂志，2005，43(9):648-652．

［3］ 钱素云.手足口病在中国大陆的流行现状及诊治进展.中国小儿急救医学，2011，18(1):1-3．

［4］ 王彦霞，许汴利，陈豪敏，等.河南省2008-2010年手足口病流行趋势及病原学分析.中华预防医学杂志，2012，46(8):761-762．

［5］ 黎念.手足口病研究进展.重庆医学，2011，40(1):93-95．