长沙市13 542例妇女HPV感染情况及基因型分布

石亮程，贺 骏，何 玲，王 伟 (湖南省长沙市妇幼保健院，湖南 长沙 410007)

子宫颈癌是常见的妇科生殖系统肿瘤之一，其病死率仅次于乳腺癌。而子宫颈癌是目前癌症中唯一病因明确的癌症，HPV确认为引发子宫颈癌的根本性致病因子。笔者于2008年11月～2012年11月对13 542例妇女进行HPV感染的检测，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:选择2008年11月～2012年11月在我院门诊或住院的女性患者共计13 542例，年龄最小15岁，最大85 岁，平均(32.5 ±9.25)岁。

1.2 仪器与试剂:仪器选择博日PCR扩增仪和德国Biometra PCR扩增仪，HPV检测系统(潮州凯普，含HPV－DNA提取试剂盒、HPV－DNA扩增试剂盒、医用快速杂交仪、HPV检测试剂盒)

1.3 采集和处理:由临床专科医师进行采取:暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口多余分泌物，用取样刷置于宫颈口顺时针方向旋转5～6周以获取足量的宫颈脱落上皮细胞。将取样后的宫颈刷放入含有细胞脱洗保存液专用采集管中，于3 d内进行检测。DNA的提取:将宫颈细胞保存液充分震荡混匀，取500 μl保存液于高温灭菌处理1.5 ml离心管中以14 000 r/min离心5 min，弃上清液;加入Ⅰ液400 μl，充分混匀，100℃金属浴15 min后，加入提取液Ⅱ400 μl，充分混匀，14 000 r/min 离心 5 min，去上清;再14 000 r/min离心2 min，完全除去残余的上清液，打开盖子5～10 min，以让Ⅱ液充分挥发，加入 Ⅲ液60 μl充分混匀.加上清1 μl于已分装扩增试剂的扩增管中(扩增管内为22.75 mix液加 0.75 Taqman)。

DNA的扩增:95℃预变性9 min;95℃20 s→55℃30 s→72℃30 s共40个循环，72℃延伸5 min。

DNA的杂交:将杂交膜封好后调节杂交仪温度到45℃，加入已45℃预温杂交液 800 μl预杂交2 min，排尽，加入已45℃温浴杂交液500 μl，将扩增产物100℃金属浴5 min后于冰水浴中2 min，将其全部加入对应的杂交液中杂交10 min，排尽杂交液，调温至25℃加入500 μl封阻液预封阻，排尽，加入 500 μl封阻液封阻 5 min，排尽，加入酶标 500 μl 4 min，排尽，用A液洗涤膜4次，调温至36℃，加入显色液显色5 min，加入B液洗涤膜条，判读结果。

1.4 结果判断:肉眼观察检测结果，当两个质控点出现时若相应位置出现斑点即为对应的阳性，多个斑点的出现则为多重感染。

1.5 统计学分析:采用SPSS 11.0统计软件进行统计，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV分型:13 542例检测者中共4 365例感染HPV，总感染率为32.23%，其中高危型感染率为24.20%，低危为8.03%，其中高危感染者中多重感染所占比例为22.31%，数据详见表1。

表1 HPV感染

2.2 HPV亚型分布:各种基因型均有检测，感染率最高的型别为52(16.3%)其他常基因型分布:16(14.9%)，58(11.3%)，6(8.4%)，11(7.4%)，33(5.5%)，CP8304(6.00%)，68(5.2%)，53(5.1%)数据见表2。

表2 HPV亚型分布

2.3 HPV年龄分布:按检测者的年龄不同，共分为4个组，年龄不明不列入统计数据，HPV感染数据见表3。

表3 HPV感染年龄分布

2.4 HPV不同年份的感染分析:数据见表4。

表4 各年HPV感染数据

2.5 高危亚型多重感染情况:3 277例高危感染中单一感染为2 546例，占77.7%;多重感染731例，占22.3%，主要以双重感染为主，以高危型和混合型多见，结果见表5。

表5 HPV高危型单一感染与多重感染

3 讨论

笔者利用导流杂交技术检测13 542例患者中HPV感染4 365例，总感染率为32.23%，其中高危型感染率为24.20%，低危型感染率8.03%。总感染率低于浙江台州的35.08%和北京的57.1%，但高于重庆北部地区的21.3%和呼和浩特地区 13.04%［1］。

各种基因型均有检测，其中感染率最高的型为52，占阳性标本中的16.67%，这与多数亚洲国家研究结果基本一致。其他常见的高危型16、18、33、58。与其他地区如:成都农村常见型为 52、16、58、33、53、18，68，53，而北京常见型则为 16、58、52、53、33，重庆北部则以 16、43、52、33 为常见型别。这表明HPV感染其基因型有明显的人群及地域区别［2］。不同亚型HPV感染对宫颈细胞恶性病变的发生、发展有不同的影响，故对亚型的统计是必要的［1］。

在年龄分组数据中高危型感染率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，本数据与山西对子宫颈癌高发区30～50岁女性HPV感染调查结论一致。而＜30岁组低危型感染率明显高于其他各组，这与年轻女性性生活活跃、性观念开放有一定的关联。

在年度分组中，后2年的感染率比前2年感染率差异无统计学意义(P＞0.05)，但其检测量有明显的上升，这与科学技术发展、网络应用、科普知识的广泛宣传、人的保健意识觉醒、自我卫生意识加强等存在密切关系。在因其他原因就诊妇科时，往往主动要求检测HPV。

本研究发现，HPV感染以单一为主，占77.69%，多重感染率为22.34%，低于陶萍萍的44.35%［3］。多重感染中以二重感染为主，＜30岁组和＞50岁组主危阳性中多重感染率与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，数据见表3。这可能与30岁以下人群性观念有关。而＞50岁组人群则是因为宫颈病变就医，其以阳性人群为主，进行HPV检测。多重感染应引起临床医师的重视，加强对其的治疗和随访。

综上所述，长沙地区 HPV高危感染基因52、16、18、33、58、68、53最为常见，而低危型则以6、11及CP8304为主，基本符合亚洲人群分布，但有其一定的地域性特点。这为长沙地区宫颈癌的防治、HPV疫苗的使用提供了科学的参考依据。

［1］杨晓华，秦晓红，夏凤英，等.成都农村地区女性宫颈HPV感染基因型别分布状况［J］.中国医疗前沿，2012，7(3):82.

［2］乌兰娜，吴瑞芳，周艳秋，等.人乳头瘤病毒基因亚型与宫颈病变的关系［J］.中国妇产科临床杂志，2005，6(5):346.

［3］陶萍萍，张国荣，卞美璐，等.妇科门诊21种人乳头瘤病毒感染状况分析［J］.中日友好医院学报，2008，22(2):208.