海南野生灵芝培养基配方优化

陈 友 ，胡佳娟 ，陈忠荫，陈勇敢

(1 琼州学院生物科学与技术学院，海南 三亚 572022;2 三亚市第二中学，海南 三亚 572000)

海南是我国野生灵芝资源最非富的分布地［3］，在野生灵芝资源的利用中占据着举足轻重的地位，而野生灵芝的驯化研究是资源利用中不可或缺的一环.因此，选择两种尖峰岭野生灵芝，黄边灵芝(Ganoderma luteomarhinatum)和咖啡网孢芝(Humphreya coffeatum)作为材料，以琼州学院栽培灵芝培养基为基础，对其一级、二级、三级种的培养基配方进行优化.

1 材料与方法

1.1 实验材料 供试材料是两株生长于海南省尖峰岭地区不同原生境的野生灵芝.实验将黄边灵芝(Ganoderma luteomarhinatum)编号4-3，将咖啡网孢芝(Humphreya coffeatum)4-5，文中都将以编号表示.

1.2 实验方法

1.2.1 一级种(又称母种)培养 按照实验要求准备该实验所需材料.具体配方见表1.其中1/2MS、1/4MS 和1/10MS 培养基是分别将标准MS 培养基稀释至2 倍、4 倍和10 倍后加入培养基中.

首先配制培养基:按表1 配方称量PDA 各原料的1/10，加水、溶解、定溶、灭菌、分平板，其次接种:最后对生长速度进行测量计算，通过数据的相关统计分析，确定两种灵芝各自最佳的生长配方.最后以最佳者为一级种接种到二级培养基上进行培养.

1.2.2 二级种的培养 按照实验要求做好前期准备，根据表1 的配方配制好所需培养基(Y1004、Y1005、Y1006、Y1008).装袋、灭菌，待温度降至室温后接种.然后对生长速度进行测量计算:将培养瓶置于25.C 的培养房内培养并适时记录菌丝的生长高度.长满后，分别以时间、高度作为依据计算各灵芝种在不同培养基下的生长速度，分析、比较，取其最佳者选之.最后，以最佳者菌种为二级种接种到三级培养基.

1.2.3 灵芝三级种的制种与培养 三级种的步骤基本同二级种，培养基配方编号分别为Y3101、Y3102，具体培养基配方详见表1，本次采用袋装培养法，三级种接种于育种袋内.

2 结果与分析

2.1 不同培养基对灵芝一级种生长的影响 由表2 可知，菌种编号为4-3 的灵芝其一级种在培养基PDA+1/4MS 上的生长速度最佳，即PDA+1/4MS 为4-3 一级种最优培养基配方，而编号4-5 中培养基PDA+1/2MS 和PDA+1/4MS 上的菌丝生都很好.综合4-3 和4-5 的一级种菌丝生长情况，可以得出配方为PDA+1/4MS 培养基为一级种的最优培养基配方.

表1 灵芝一、二、三的培养基配方

表2 不同培养基对灵芝一级种生长的影响

图1 不同培养基中灵芝一级种菌丝生长状况

2.2 不同二级种培养基对所选灵芝生长的影响 由表3 可知，菌种编号为4-3、4-5 的灵芝其二级种均在培养基Y1005 上具有最佳生长速度，且相对于其他培养基它所产生的菌丝密度大、长势佳.综合比较菌丝密度、长势.Y1005 为该种的二级种最佳培养基配方.所以，均以Y1005 培养基上的菌落作为菌种接种到三级种培养基上.

表3 不同培养基对灵芝二级种生长的影响

图2 不同培养基中灵芝二级种菌丝生长情况

2.3 不同三级种培养基对所选灵芝生长的影响 由表4 可知，菌种编号为4-3、4-5 的灵芝其三级种均在培养基Y3102 上具有最佳生长速度，参照图3，可见其菌丝浓密，长势良好;在培养基Y3101 上前期长势良好，后出现生长停滞现象，黄化现象明显.所以三级种的最优培养基配方为Y3102.

表4 不同培养基对灵芝二级种生长的影响

图3 不同培养基中灵芝二级种菌丝生长情况

2.4 结果分析

2.4.1 根据以上三点结果显示，一级种最优培养基为PDA+1/4MS(具体配方见论文中)，其4-3 的菌丝生长速度为1.7036 mm/d、4-5 的菌丝的生长速度为2.5298mm/d.筛选出二级种的最优培养基为Y1005(具体配方见论文中)，其4-3 的菌丝生长速度为4.3750 mm/d、4-5 的菌丝生长度为4.0000 mm/d.筛选出三级种的最优培养基为Y3102(具体配方见论文中)，其4-3 的菌丝生长4.3478 mm/d、4-5 的菌丝生长速度为4.0293 mm/d，

2.4.2 实验结果表明，菌种编号为4-3 和4-5 的灵芝其一级种在培养基PDA+1/4MS 上的生长速度都很好，此配方既适合不同的野生种，因此，这种配方可以作为其它野生灵芝一级种的首选配方.而根据编号为4-5 灵芝其一级种在培养基PDA +1/2MS 上具有最佳生长速度，这即说明不同种质的野生灵芝一级种的配方可能还不相同，可以在此种配方的基础下再进行优化.

2.4.3 所选两种灵芝均在Y1005 培养基上的具有最佳长势，综合考虑其经济成本，Y1005 在实际生产中可采纳应用.

2.4.4 主料中添加麦麸等含氮量高的辅料会明显提高灵芝产量，且麦麸添加量为20 %时产量最高［7］.4-3、4-5 灵芝均在Y3102 黄豆粒培养基中生长速度快、菌丝浓密，这是由于黄豆粒较松散，菌丝生长速度快，故满瓶时间短、长势佳.

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