沉淀消解法测定植物性饲料中植酸磷含量

2013-08-16李培培王建华张宝珣青岛市畜牧兽医研究所山东青岛266100

山东畜牧兽医 2013年11期

李培培王建华张宝珣（青岛市畜牧兽医研究所山东青岛 266100）

植物性饲料中的磷通常是以植酸磷的形式存在，是一个含六个磷酸基团的环状化合物。通常将植酸磷列入抗营养因子，不仅与植物中大多数磷结合(40%～70%)，还与金属离子、蛋白质、氨基酸、淀粉等营养物质结合成为不溶性的络合物，使矿物质、营养物质的消化、吸收受到影响，降低了饲料的营养价值。另一方面，磷是动物所必需的营养物质，由于植物性饲料中总磷的消化利用率很低，在畜禽饲料中不得不补充大量的磷元素，势必造成磷源的浪费，导致磷的过量排放。因此，测定饲料中的植酸磷含量，对于评价饲料、研究动物营养、减少有害物质的排放、促进畜牧业发展具有重要意义。

测定植物性饲料中植酸磷含量的方法主要有：TCA法(三氯乙酸法，Trichloroacetic acid method)，离子交换法(Ion exchange process)，高效液相色谱法，极谱法(Polarography)，近红外光谱法(Near-infraredspectrometry;NIR)等，后几种方法因需要大型精密仪器难以普及，TCA法分析步骤繁琐，本文改进了铁离子沉淀法，使之成为一种简单、快速、重复性好的测定植酸磷的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器

分析天平(日本岛津，精确到0.0001g)，恒温振荡摇床(上海智诚)；数显恒温水浴锅(上海金坛)；自动平衡离心机(湖南赛特湘仪)；调温电热套(博大精科)；723A型可见光光度计(上海分析仪器总厂)。

1.2 试剂

1.2.1 浓硫酸 98%，ρ=1.84g/ml。

1.2.2 浓硝酸 ρ=1.40g/ml。

1.2.3 1.2%盐酸溶液量取26.8ml盐酸，100g无水硫酸钠，加水溶解后稀释至1L。

1.2.4 1.0%三氯化铁溶液称取10gFeCl3.6H2O，加入500ml1.2%的盐酸溶液，溶解后用水稀释至1L；

1.2.5 0.80mol/L硫酸溶液量取42ml硫酸慢慢倒入水中，稀释至1L；

1.2.6 10%钼酸铵溶液 10g钼酸铵加入约60℃的水溶解，冷却后定容至100ml；

1.2.7 2.0%抗坏血酸 2g抗坏血酸溶于水中，定容至100ml，现用现配；

1.2.8 磷标准溶液配制磷标准溶液：将磷酸二氢钾105℃烘干2h，冷却30min，称取0.8780g用水溶解后，加入3ml浓硝酸，用水稀释至1L，此溶液磷浓度为200mg/L；

1.2.9 磷标准工作溶液将磷标准溶液用水准确稀释10倍后使用，此溶液浓度为20mg/L。

2 试验方法

2.1 标准曲线绘制

移取已配好的磷标准工作溶液0、2、4、6、8、10ml于50ml容量瓶中，分别加入0.80mol/L硫酸溶液4ml，10%钼酸铵0.4ml，2.0%抗坏血酸0.5ml，加水稀释至刻度，立即摇匀；显色20min，在723A型分光光度计660nm下测定溶液吸光度，并绘出标准曲线。

图1 磷标准曲线

2.2 分析方法

（1）称取饲料样品1g(精确到0.0001g)，放入150ml带盖锥形瓶中，准确加入1.2%盐酸溶液100ml(植酸含量低于0.5%的样品加50ml)，150rpm振荡1h，用定性滤纸过滤。（2）准确移取滤液10ml于20ml离心管中，加1.0%三氯化铁溶液4ml(植酸磷含量低于0.5%的样品加2ml)，置于沸水浴中30min，取出后迅速冷却至常温，2000rpm离心25min。（3）弃去上清液，向沉淀物中加入5ml浓硝酸和2ml浓硫酸，将沉淀物搅起，用水冲洗，全部转入50ml凯氏瓶中，并加入2粒玻璃珠，防止暴沸；将凯氏瓶置于调温电热套上消解至冒白烟，加10ml蒸馏水煮沸至沉淀全部溶解，冷却到常温后将液体全部转移至100ml容量瓶中，定容，摇匀，静置10min。（4）准确移取消解液10ml于50ml容量瓶中，加入0.80mol/L硫酸溶液4ml，10%钼酸铵0.4ml，去离子水30ml，摇匀，加2.0%抗坏血酸0.5ml，加水稀释至刻度，立即摇匀；准确显色20min，在723A型分光光度计660nm下测定溶液吸光度；

2.3 植酸磷含量计算公式

3 结果与讨论

3.1 各种植物性饲料中植酸磷含量

植酸磷/总磷的比值变动范围在0%～93 %之间(Viveros等，2000)，不同植物性饲料其植酸磷的含量差异很大。对5种饲料样品的植酸磷含量进行了分析(表1)，含量差异较大，麸皮植酸磷含量为0.555%，玉米含量最低，为0.140%。Maga(1982)指出植酸磷含量受土壤、环境条件的影响，实验中的玉米样品均产自胶东半岛，受土壤环境影响较小，因此变异系数和标准差最小；其它样品产地分散，所以标准差和变异系数较大。

表1 各种植物性饲料植酸磷含量

3.2 精密度和准确度试验

用本方法对5个样品重复测定6次，其变异系数都小于5%(见表2)，说明实验精密度较高。准确度实验：选5个植酸磷含量已知的样品，称取1g(准确到0.0001g)，准确加入0.05g(准确到0.0001g)植酸钠标样，按文中方法对其进行分析，重复6次，所得结果减去饲料样品中含量，即得植酸钠中植酸含量，结果见表3。5个样品平均回收率变化范围为97.5～100.1，表明本方法有较好的准确度。