鱼腥草中黄酮类成分的有效提取

黄小蕾 程晓英

（1河南省漯河医学高等专科学校，漯河462002；2吉林省吉林市食品药品检验所，吉林132001）

鱼腥草中黄酮类成分的有效提取

黄小蕾1程晓英2

（1河南省漯河医学高等专科学校，漯河462002；2吉林省吉林市食品药品检验所，吉林132001）

目的 研究鱼腥草中黄酮类成分的有效提取方法。方法 采用改良流体萃取法提取鱼腥草中黄酮类化合物，优选最佳提取工艺，并进行含量测定。结果 乙醇浓度50%，乙醇溶液流量1.8ml／分钟，温度70℃。萃取时间为27分钟，萃取率为3.15%，总黄酮含量为24.0%，其中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的萃取率分别为0.35%mg／g，1.52%mg／g，1.70%mg／g，0.50mg／g。结论鱼腥草中黄酮类成分的改良流体萃取法效果明显，值得推广。

鱼腥草；黄酮类成分；紫外分光光度法；改良流体萃取法

侧耳根又称鱼腥草，它药食兼优，除了食用之外，还有良好的清热解毒作用，对此人们一定熟知［1］。归纳我国的研究成果，主要体现在两个方面，一是鱼腥草对实验动物辐射损伤后免疫功能、细胞遗传学、外周血象效果的研究以及鱼腥草总黄酮抗辐射效果的研究；二是鱼腥草对肿瘤患者进行放射性治疗后，发生的如放射性肺炎和放射性口腔炎（包括口腔黏膜反应）等放射性损伤治疗的研究［2］。尤其是后者具有很大的临床意义，因为这些放射性损伤不仅来源于肿瘤的放射性治疗，还可见于骨髓移植预处理和核辐射事故、核武器损伤等多种情况［3］。鱼腥草中黄酮类化合物是鱼腥草重要组成部分，包括芦丁、金丝桃苷、槲皮素、槲皮苷等具有药理作用的活性成分［4-5］。本文具体探讨了改良流体萃取法提取鱼腥草中黄酮类化合物的方法与效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 试剂：95%乙醇、无水乙醇、氢氧化钾、亚硝酸铝、硝酸铝等均为分析纯。仪器：5L超临界萃取装置（岛津公司）、电子天平、旋转蒸发器、真空泵（北京精密仪器仪器厂）、清洗器、粉碎机、恒流泵、干燥箱（西门子公司）、分光光度计、色谱泵、紫外检测器（岛津公司）。本实验原料为鱼腥草全草，包括茎、叶和根，呈棕色，有特异腥味，产地四川，由本实验室提供。

1.2 提取方法 称量约900g粉碎的鱼腥草全草于5L萃取柱中，设定萃取温度40℃，压力20MPa。萃取30分钟后，将萃取柱中萃余物取出。定量称取约3g原料，溶剂润湿搅匀后装入萃取柱。柱两端垫上脱脂棉。当达到设定的萃取柱温后，打开CO2进口阀，柱温柱压均稳定后，动态加入溶剂的量为40mL。关闭溶剂泵，用CO2吹扫至无液体滴出，关闭CO2进口阀。卸下萃取柱并清洗，用无水乙醇清洗管道。将萃取液倒入旋转蒸发器的蒸发瓶中，低压蒸发，再放入真空干燥箱干燥后，用70%的乙醇溶解后，紫外分光光度法测定其中的总黄酮含量。

1.3 含量测定 精密吸取标准液0.2，1.0，2.0，4.0ml分别置于25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%NaNO2试液1.0ml，放置6min。加10%AI（NO3）3试液1.0ml。放置6分钟后，加5%KOH试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂做空白。得回归方程A＝12.80667C-0.00108该回归方程r＝0.99988，表明芦丁含量在0.00214mg／ml～0.06426mg／ml范围内呈良好线性关系。

2 结果

2.1 提取条件的优化 本文在正交试验中，得到优化的萃取条件为：乙醇浓度50%，乙醇溶液流量1.8ml／分钟，温度70℃即可。

2.2 含量结果 本文结果显示，改良流体萃取法提取鱼

腥草中黄酮类化合物的萃取时间为27分钟，萃取率为3.15%，总黄酮含量为24.0%，其中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的萃取率分别为0.35%mg／g，1.52% mg／g，1.70%mg／g，0.50mg／g。

3 讨论

鱼腥草为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。能清热解毒，利尿消肿。治肺炎，肺脓疡，热痢，疟疾，水肿，淋病，白带，痈肿，痔疮，脱肛，湿疹，秃疮，疥癣。鱼腥草可以增强白细胞的吞噬能力，提高血清备解素，在治疗慢性气管炎时，合成鱼腥草素可使患者白细胞对白色葡萄球菌的吞噬能力明显提高，血清备解素明显升高。家兔每日肌肉注射鱼腥草素8mg［6］。连续给药3天后，血清中备解素也明显升高，鱼腥草提高机体兔疫力，对感染性病的治疗有着重要的意义。用鱼腥草提取物灌流蟾蜍肾或蛙蹼，能使毛细血管扩张，增加血流量及尿液分泌，从而具有利尿的作用。其作用可能由有机物所致，钾仅起增加利尿的附加作用，直接作用时，能使钩端螺旋体活动减弱-死亡-裂解，亦能推迟人工感染钩端螺旋体的豚鼠的发病期。鱼腥草鲜汁对金黄色葡萄球菌有抑制作用，加热后作用减弱．体外试验证明，鱼腥草煎剂对多种革兰阳性细菌和阴性细菌如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、卡他球菌、白喉杆菌、变形杆菌、志贺、施氏、福氏及宋内痢疾杆菌、肠炎杆菌等均有不同程度的抑制作用。

鱼腥草中的黄酮类化合物包括芦丁、金丝桃苷、槲皮素、槲皮苷等具有药理作用的活性成分，传统提取方法为有机溶剂提取法，多使用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等作为溶剂。这类方法的特点是设备简单，产品得率高，但杂质含量也较高。高浓度的醇适用于提取黄酮苷元，中等浓度的醇适用于提取黄酮苷，提取次数一般是2～4次。其次是采用用极性由小到大的溶剂依次提取，该法的优点在于提取和分离可以同时实现，但是由于使用的溶剂种类多，工艺繁琐，工业上应用困难。同时由于黄酮类化合物种类多，其结构和存在状态不同，溶解度有很大差异，所以在提取该类成分时要恰当的选择溶剂。游离的苷元，一般不易溶于水，而溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂或稀碱溶液。

改良流体萃取技术是利用处于临界压力和临界温度以上的流体具有特异增加的溶解能力而发展出来的化工分离新技术。有研究使用超临界CO2从大豆粉中萃取异黄酮类化合物，考察了温度、压力和夹带剂含量等因素，并与索氏提取和超声波辅助提取比较。还有研究测量了槲皮素在超临界CO2和夹带剂乙醇混合溶剂中的溶解度，发现其操作较为简便，易于分离，没有残留。有研究在萃取黄芩根中的黄酮类物质时使用的超临界CO2-70%的甲醇，并与传统方法进行对比，得出超临界萃取优化的工艺条件。而紫外分光光度法是根据物质溶液本身颜色的深浅或被测物质与显色剂反应生成物质颜色的深浅来测定物质浓度的一种方法，简便且快速。本文结果显示，在改良流体萃取法提取中，总黄酮萃取率为3.15%，总黄酮含量为24.00%，其中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的萃取率分别为0.35%mg／g，1.52% mg／g，1.70%mg／g，0.50mg／g。

总之，本文采用改良流体萃取法从鱼腥草中提取黄酮类化合物，最终确定50%乙醇为合适的乙醇浓度，1.8mL／分钟为合适的流量，70℃为合适的萃取温度，总黄酮萃取率为3.15%，总黄酮的含量为24.00%，显示了很好的效果。

［1］彭海燕，章永红．中医药治疗原发性肝癌的现状与展望［J］．中西医结合肝病杂志，2006，16（3）：184-187．

［2］任美萍，钟琳，肖顺汉．中药抗肿瘤机制研究近况［J］．四川生理科学杂志，2006，28（4）：168-170．

［3］陈绍淑，赵宝玉，莫重辉，等．苦马豆素对人食道癌Eca-109细胞体外生长的抑制实验［J］．动物医学进展，2003，24（3）：90-92．

［4］邱江匀，杨亚玲，杨国荣，等．鱼腥草中总黄酮提取及其抗过敏活性的研究［J］．云南大学学报（自然科学版），2005，27（3）：239-244．

［5］刘成梅，游海．天然产物有效成分的分离与应用［M］．北京：化学工业出版社，2009：170-188．

［6］胡杰，邓宇．芦丁提取工艺的综述［J］．中国食物与营养，2010，8（14）：45-47．

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.15.108

1672-2779（2013）-15-0161-02

杨 佳

2013-05-23）