续筋接骨胶囊抗炎、镇痛作用实验研究

王艳丽，马育轩，李冀，王烨燃，周海纯

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

续筋接骨胶囊是在临床验方的基础上配伍而成，主要由土鳖虫、血蝎、骨碎补、乳香、红花、当归、续断等组成。方中土鳖虫首载于有破血逐瘀，续筋接骨之功;骨碎补能补肾强骨，续伤止痛;续断可补肝肾、强筋骨、调血脉、续折伤;配以血竭的活血散瘀，乳香的镇痛作用，以及红花活血通经，祛瘀止痛，当归补血活血的功效。诸药合用，共奏接骨续折，消肿止痛，活血散瘀之功。本实验以续筋接骨胶囊为受试药物，观察其对大鼠足趾肿胀、小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性及小鼠痛阈值的影响，探讨续筋接骨胶囊的抗炎和镇痛作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 昆明种小鼠，雄性30只，雌性60只，体质量18～22g;Wistar大鼠24只，体质量180～200g，雌雄各半。均由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供，许可证号:SYXK黑2011001。

1.2 实验药物 续筋接骨胶囊是由土鳖虫、血蝎、骨碎补、乳香、红花、当归、续断等组成，由佳木斯中药厂提供，规格:0.35g/粒。阿司匹林由哈尔滨泰华药业有限公司提供，规格:0.5g/片。

1.3 实验仪器 电子天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司，型号PL602－S);722光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂);YSD－4G型药理生理实验多用仪(淮北正华生物仪器设备有限公司)。

1.4 分组及给药

Wistar大鼠24只，雌雄各半，随机分为续筋接骨胶囊组、阳性对照(骨折挫伤胶囊)组和模型组3组，每组8只。续筋接骨胶囊组给予续筋接骨胶囊2.268g/kg，模型组给予等体积生理盐水，阳性对照组给予阿司匹林0.1359/kg。各组动物均灌胃给药，连续给药7天。

昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为3组，每组20只。续筋接骨胶囊组给予续筋接骨胶囊3.2g/kg，模型组给予等体积生理盐水，阳性对照组给予阿司匹林0.19g/kg，均灌胃给药，连续给药7天。

取18～22g经痛阈筛选合格(痛阈在10～20s)的雌性小鼠30只，随机分为3组，续筋接骨胶囊组给予续筋接骨胶囊3.2g/kg，空白对照组给予同体积生理盐水，阳性对照组给予阿司匹林0.19g/kg，均灌胃给药。

1.5 指标检测 1)大鼠灌胃给药7天，末次给药后0.5h，右后足趾腱膜下注射1%角叉菜胶0.05ml。用毛细管放大测量装置，观察各鼠足趾体积变化，以致炎后体积减致炎前正常体积的差值，统计对大鼠足趾肿胀的影响。2)在连续给药7天后的小鼠中，各组随机取10只，末次给药1h后于小鼠右耳廓两面均匀涂布二甲苯0.02ml/只致炎，致炎后3h断椎处死。剪下两耳，用4mm直径打孔器在左右耳同一部位打下圆耳片分别称重，以左耳为对照。3)各组剩余的10只小鼠末次给药1h后，均静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，随即腹腔注射 0.6% 醋酸 0.2ml/只，20min后断椎处死，用6ml生理盐水分3次洗涤腹腔，吸出洗涤液、合并后加入生理盐水至10ml，3 000转离心15min，取上清液于590nm处测定光密度，以平均光密度值做t检验。4)取体质量18～22g经痛阈筛选合格(痛阈在10～20s)的雌性小鼠30只，随机分为3组。测定其自然放在热板上至出现舔后足所需时间作为该鼠正常痛阈值，待恢复3h后给药。续筋接骨胶囊组3.2g/kg，空白对照组给予同体积生理盐水，阳性对照组给予阿司匹林0.19g/kg，均灌胃给药。给药后30、60min分别测小鼠痛阈值。

1.6 统计学处理统计软件SPSS 13.0处理，以均数加减标准差(s)表示，进行成组设计t检验。

2 结果

2.1 续筋接骨胶囊对大鼠足趾肿胀的影响 见表1。

表1 续筋接骨胶囊对大鼠足趾肿胀的影响(s，n=8)

表1 续筋接骨胶囊对大鼠足趾肿胀的影响(s，n=8)

注:与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

组别 药量g/kg对照足体积(cm2致炎后不同时间足肿胀度(cm2)0.5h 1.0h 2.0h 3.0h 4.0h续筋接骨胶囊组 2.268 1.014 ±0.164 1.287 ±0.143 1.689 ±0.178* 1.856 ± 0.147* 1.769 ±0.257*)1.662 ± 0.246阳性对照组 0.135 0.988 ±0.967 1.276 ±0.14 1.649 ±0.126＊＊ 1.875 ±0.139* 1.816 ±0.181* 1.729 ±0.14模型组 － 0.992 ±0.260 1.482 ±0.316 1.885 ±0.166 2.015±0.132 1.98 ±0.152 1.832 ±0.102

表1结果显示，致炎后1、2、3h，续筋接骨胶囊组与模型组比较，大鼠足趾肿胀程度均具有显著性差异(P ＜0.05)。

2.2 续筋接骨胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响见表2。

表2 续筋接骨胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(s)

表2 续筋接骨胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(s)

注:与模型组比较，*P ＜0.05。

组别 给药量(g/kg)n 肿胀程度(mg)续筋接骨胶囊组 3.20 10 2.71 ±1.054*阳性对照组 0.19 10 2.80 ±0.918*模型组10 3.60 ±0.751－

表2结果表明，续筋接骨胶囊组与模型组比较，小鼠耳廓肿胀程度差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 续筋接骨胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响 见表3。

表3 对腹腔注射醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高的影响(s)

表3 对腹腔注射醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高的影响(s)

注:与模型组比较，*P ＜0.05。

组别 给药量(g/kg)n 光密度续筋接骨胶囊组 3.20 10 0.427 ±0.111*阳性对照组 0.19 10 0.451 ±0.071*模型组10 0.541 ±0.110－

表3结果显示，续筋接骨胶囊组与模型组比较，小鼠毛细血管通透性明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.4 续筋接骨胶囊对小鼠热板痛阈值的影响 见表4。

表4结果表明，续筋接骨胶囊组与模型组比较，给药后30、60min小鼠痛阈值明显升高，差异均具有统计学意义(P ＜0.05)。

表4 续筋接骨胶囊对小鼠热板痛阈值的影响(s，n=10)

表4 续筋接骨胶囊对小鼠热板痛阈值的影响(s，n=10)

注:与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

组别 给药量(g/kg)给药后不同时间痛阈值(s)30min 60min续筋接骨胶囊组 3.20 22.4 ±4.25 31.7 ±4.29* 31.3 ±4.58给药前痛阈(s)*阳性对照组 0.19 22.6 ±5.37 31.1 ±3.11* 32.4 ±7.75＊＊模型组 － 22.8 ±2.93 26.8 ±3.57 27.1 ±3.7

3 讨论

炎症是骨折的一种常见并发症，骨折愈合过程如果伴随感染可导致愈合明显延迟甚至骨不连的发生。尤其在创伤骨折中，持续性的炎症和感染的存在影响骨再生。骨折后使用抗炎药物，不仅有助于缓解红肿痛等症状，而且阻止炎症因子抑制骨再生可能是潜在的治疗方法。向大鼠足趾注射角叉菜胶建立炎症模型方法实用，药物抗炎效果可作定量测定，是目前最常用的筛选抗炎药物的方法［1］。二甲苯的致炎作用又快又强，小鼠耳廓肿胀法不需特殊的设备，简便易行，实验时间短，模型复制成功率高，适用于抗炎药常规筛选［1］。热刺激法是比较通用的镇痛试验研究方法。上述方法观察到的结果客观可靠，可作为续筋接骨胶囊抗炎、镇痛作用的参考。本研究通过观察续筋接骨胶囊对大鼠足趾肿胀、小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性及小鼠痛阈值的影响，说明续筋接骨胶囊具有较好的抗炎和镇痛作用。

［1］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海:上海科学技术出版社，2006.