高水平血清HCMV IgM在低龄儿童原发性HCMV感染诊断中的作用

孔辉江阳周裕林★

高水平血清HCMV IgM在低龄儿童原发性HCMV感染诊断中的作用

孔辉1江阳2周裕林1★

目的 探讨血清人巨细胞病毒（HCMV）IgM水平在低龄儿童中诊断原发性HCMV感染的意义。 方法 收集临床诊断为HCMV感染的患儿血标本56例，年龄为0.5～1岁，采用全自动化学发光法分别定量检测血清HCMV IgG、IgM抗体水平，以及IgG亲和力指数。 结果 HCMV IgG+患儿亲和力检测结果发现，其中IgM-/IgG+的5例患者都为高亲和力IgG，而IgM+/IgG+的42例患者中25例是低亲和力IgG，占59.5%。根据IgM定量检测结果进一步将此47例HCMVIgG+患儿由低至高分成5组，分别为IgM阴性组（＜30 AU/mL），30～100 AU/mL组，100～170 AU/mL组，170～240 AU/mL组以及大于240 AU/mL组。随着IgM抗体水平的增加，低亲和力样本所占比例呈增高趋势，经卡方检验，差异有统计学意义（χ2=12.72，P＜0.05）。 结论 在0.5～1岁婴儿中，HCMV IgM水平与HCMV原发感染呈正相关，临床同时参考IgM定量检测和HCMV IgG亲合力检测结果，将对0.5～1岁以内婴幼儿近期HCMV感染发生时间的判定起到有益的互补作用。先进行HCMV IgM定量检测，再进行阳性病例的IgG亲和力检测是低龄儿童原发HCMV感染实验室诊断的可行方案。

人巨细胞病毒；IgM；IgG；IgG亲合力；原发性感染

人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）属于人疱疹病毒5型，在我国人群中感染极其广泛。一般人群HCMV IgG阳性率为90%左右，婴幼儿期的阳性率在60%左右。HCMV原发感染多发生在婴幼儿期，主要来自他们的照护者[1]。HCMV原发感染和再发感染早期往往累及肝脾[2]，其中部分患儿可引起神经发育异常，如听力损伤和黄疸等临床表现[3]，因此，及时可靠地诊断婴幼儿是否存在近期HCMV活动性感染对于后续临床治疗至关重要。本研究采用全自动化学发光方法进行了血清HCMV IgM定量和HCMV IgG抗体亲合力检测，以探讨CMV IgM定量检测对诊断婴幼儿近期HCMV原发性感染的临床意义。

1 对象与方法

1.1 对象

2010年7月～2011年8月福建省厦门市妇幼保健院医院收治的临床诊断为HCMV感染患儿56例，其中男婴30例，女婴26例，年龄6～12个月，平均9±0.8个月。

1.2 主要试剂与仪器

HCMV IgM、IgG及IgG亲合力试剂盒，Liaison®全自动化学发光检测平台由意大利索灵公司（DiaSorin）提供。

1.3 人血清HCMV IgM、IgG定量检测

按照说明书进行血清HCMV IgM、IgG抗体定量检测。在Liaison®分析仪上进行自动检测和报告结果，根据经校准后的主曲线确定人血清和血浆中HCMV IgG或IgM抗体含量，分别以IU/mL（IgG）或AU/mL（IgM）为单位表示样本中抗体含量。

1.4 人血清HCMV IgG 亲合力检测

采用化学发光免疫分析技术检测HCMV IgG亲合力。以常规HCMV IgG检测结果为分母，以尿素处理后HCMV IgG检测结果为分子，得到亲合指数（avidity index）。根据说明书，亲合指数小于0.2是低亲合力，位于0.2～0.3之间为灰区，大于0.3则为高亲合力。低亲合力IgG抗体提示HCMV感染发生在4个月内，为原发感染。

1.5 统计学方法

使用SPSS 15.0软件包进行统计学分析。各组之间采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IgG /IgM血清学分析

此56例临床诊断为HCMV感染患儿IgG和IgM检测结果见表1。其中血清HCMV IgM-/IgG+者占8.9%（5/56），IgM+/IgG+占75.0%（42/56），IgM-/IgG-占10.7%（6/56），IgM+/IgG-占5.4%（3/56）。

表1 HCMV感染患儿IgG，IgM血清学检测结果（n=56）Table 1 Results of serological IgG and IgM from HCMV infected children (n=56)

2.2 亲合力结果分析

HCMV IgG+患儿（包括IgM-/IgG+组和IgM+/ IgG+组）亲合力检测结果见表2。其中5例IgM-/IgG+患者都为IgG高亲合力，而在42例IgM+/IgG+的患儿中25例是低亲合力，占59.5%，17例为高亲合力，占40.5%。

表2 HCMV IgG亲合力结果Table 2 Results of HCMV IgG avidity tests

2.3 HCMV IgM含量与IgG亲合力关系

根据IgM检测结果，将47例HCMV IgG阳性患儿样本（包括IgM-/IgG+组和IgM+/IgG+组）分成5组，分别为IgM阴性组（＜30 AU/mL），30～100 AU/mL组，100～170 AU/mL组，170～240 AU/mL组，以及＞240 AU/mL组，同时分层分析五组中IgG低亲合力的样本所占比例，结果见表3。总体低亲合力的样本数占53.2%（25/47），在IgM含量由低至高五组中，低亲合力样本所占比例分别是0，41.2%，58.3%，75.0%和100%。随着IgM抗体水平的增高，低亲合力IgG病例所占比例呈增高趋势，经卡方检验，差异有统计学意义（χ2=12.72，P＜0.05）。

3 讨论

HCMV是婴幼儿期较易感染的重要病原之一，由于婴幼儿的免疫系统尚未完全成熟，所以HCMV原发性感染（即初次感染）时易出现肝脏、肺脏、血液和消化系统等多脏器损害，并导致相应临床症状[4]。HCMV一旦感染，则终生相伴，常呈潜伏感染状态，但其中10～20%感染的新生儿会在出生后1～2年内诱发激活而形成再次感染，造成神经系统方面的损伤，尤其是影响听力[5]。因此，临床上能尽早准确诊断HCMV原发性感染，并给予及时治疗是避免伤害的关键。

表3 HCMV IgM 含量与IgG亲合力关系分析（n=47）Table 3 The relationship between quantitative IgM and IgG avidity tests (n=47)

目前，临床上诊断原发性HCMV感染的最佳方法是动态检测到HCMV IgG抗体的血清转换，但由于在人群中HCMV既往感染的比率非常高，而且孕期母体IgG抗体可以经胎盘传给胎儿，母体来源的IgG抗体在出生后往往可以在婴儿体内保持半年才消失，所以在半岁内婴儿中单独检测HCMV IgG的诊断意义有限[6]。HCMV IgM也被作为实验室诊断活动性HCMV感染的重要指标之一，其阳性仅提示近期有HCMV活动性感染，在原发和再发HCMV感染中都可产生IgM抗体[7]，且会受到其他因素的影响，如其他病毒株的交叉反应等[8]， 因此，HCMV IgM定性检测结果并不能很好地评估HCMV原发感染。但HCMV IgM定量检测是否在诊断HCMV原发感染中有作用呢？近年有专家在用定量HCMV IgM研究孕妇标本中研究发现，孕妇原发性CMV感染其IgM水平往往较高[9]。1989年Hedman等[10]根据宿主在初次接触抗原时所产生的特异性IgG抗体的亲合力随着免疫时间的推移会逐渐升高的原理，首次采用尿素变性技术区分风疹病毒原发感染或再发感染，该法同样适用于HCMV 和其它病毒感染的诊断[11]。

本研究以HCMV IgG亲合力检测结果为对照，探讨了HCMV IgM定量检测在诊断原发性感染中的应用价值。结果发现在56例临床诊断为HCMV感染的半岁至一岁患儿中，IgG或IgM至少一项指标阳性的有50例（89.3%）。其中IgG/IgM双阳性的占大多数，有42例（75.0%）；IgM单阳性有3例（5.4%）；IgG单阳性有5例（8.9%）。 在47例IgG阳性患者（包括IgG/IgM双阳性及IgG单阳性的患者）中，就其亲合力检测结果进行分析认为：（1）IgG低亲合力的样本有25例，占IgG/IgM双阳性（42例）的59.5%。可见在半岁至一岁婴幼儿HCMV感染中，有一半以上是HCMV原发感染。（2）3例IgM单阳性病例应为HCMV原发感染早期，此时其IgG抗体尚未表达。（3）5例IgG单阳性的患者其IgG亲合力都表现为高亲合力，提示患儿HCMV感染可能发生在检测时间点的四个月之前，或所测IgG抗体是来自于母体的尚未消失的抗体。另外，对47例IgG阳性样本，进一步分析其IgM含量变化与IgG低亲合力病例所占比例之间的关系，结果发现IgM含量越高的研究组中其IgG低亲合力病例所占比例也越高，经卡方检验分析，卡方值χ2=12.72，P＜0.05，差异具有统计学意义。因此IgM定量检测有助于判断HCMV感染的时期，HCMV IgM水平越高则发生4个月内HCMV原发性感染的风险越大。

综上所述，血清HCMV IgG亲合力检测是判定HCMV原发感染较特异的方法，尤其对于半岁至一岁的儿童具有不可替代的作用，但由于此检测方法操作过程复杂，检测成本较高，目前尚难以在临床广泛开展。本研究发现HCMV IgM水平越高的HCMV感染病例组其IgG低亲和力所占比例也越高，提示在半岁至一岁的儿童中，高HCMV IgM水平也有助于临床判断近期HCMV原发感染。若临床同时参考IgM定量检测和HCMV IgG低亲合力检测结果，将对0.5～1岁以内婴幼儿近期HCMV感染发生时间的判定起到有益的互补作用。鉴于我国育龄妇女HCMV既往感染率在95%以上，且来自于母体的IgG抗体可通过胎盘进入胎儿血液循环，直接进行IgG抗体亲和力检测成本高、样本量大。先进行HCMV IgM定量检测，再进行IgM阳性病例的IgG亲和力检测是低龄儿童原发HCMV感染实验室诊断的可行方案。

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Diagnostic role of high HCMV IgM level in serum for HCMV primary infection

KONG Hui1, JIANG Yang2, ZHOU Yulin1★
(1.Central Laboratory of Pregnatal Diagnosis, Xiamen Meternal & Children's Hospital, Fujian, Xiamen 361003, China; 2.Shanghai Institute of Immunolog, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025, China)

Objective To study the diagnostic role of human cytomegalovirus (HCMV) IgM level for HCMV primary infection in lower aged children. Methods 56 serum samples were collected from 0.5～1 years old new borns, who were clinically diagnosed as HCMV infection. HCMV IgM/IgG and IgG avidity were quantitatively detected by automatic CLIA. Results Among the HCMV IgG positive samples, 5 samples, which were IgM-/IgG+, showed high HCMV IgG avidities. In the remaining 42 samples, which were IgM+/ IgG+, 25 samples (about 59.5%) showed low IgG avidities. Based on the HCMV IgM level, the samples were further divided into 5 groups: IgM negative group (＜30 AU/mL), 30～100 AU/mL group, 100～170 AU/mL group, 170～240 AU/mL group and ＞240 AU/mL group. It was found that the percentage of HCMV IgG low avidity samples were increased with increases of IgM levels. The difference was statistically significant (χ2=12.72,P＜0.05). Conclusion High HCMV IgM level in serum are positively correlated to HCMV primary infection among newborns of 0.5～1 age. Quantitative IgM assay could be complimentary to diagnosis of primary HCMV infection in paralle with IgG avidity test. This data imply that quantitatively detection of HCMV IgM antibody followed by IgG avidity detection is practical proposal for laboratory diagnosis of HCMV primary infection in lower aged children.

Human cytomegalovirus; IgM; IgG; IgG avidity; Primary Infection

1.福建省厦门市妇幼保健院产前诊断中心实验室，福建，厦门 361003 2.上海交通大学医学院免疫学研究所，上海 200025

★通讯作者：周裕林，E-mail:zhou_yulin@126.com