尿沉渣分析仪对尿液中细菌测定性能及对尿路感染的筛查价值

王学涵，吴丽萍

（新疆医科大学第五附属医院检验科，乌鲁木齐 830011）

尿路感染是指在肾、尿管、膀胱、尿道上发生的非特异性炎症，大部分是由大肠埃希菌感染引起的［1］。大多数情况下细菌是由外尿道口入侵，由尿道上行，引起膀胱和肾发生感染。诊断尿路感染要根据患者的临床症状和尿液检查结果等综合判断。辅助诊断有尿液沉渣计数白细胞、细菌计数、干化学中的白细胞酯酶和亚硝酸盐反应以及中段尿细菌培养法。每种方法都各有优缺点，干化学法简便、快速但由于受人体内物理变化或化学条件的影响，会导致结果的假阴性或假阳性。UF－1000i全自动尿沉渣分析仪（简称UF－1000i）采用红色半导体激光、核酸荧光染色技术和流式细胞技术，在鞘液、稀释液和染色液的作用下对尿液有形成分进行多角度散射光和不同级别荧光的检测，可以消除大部分的干扰因素［2］。本文针对尿细菌检查UF－1000i同亚硝酸盐检测等其他检测的关联性，以及使用UF－1000i的散点图模型区别杆菌和球菌进行了研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 采集2011年1月5日至2012年9月5日520例泌尿科疑似尿路感染住院患者，按照无菌操作的原则留取患者清洁中段尿液于无菌杯中及时送检。漂浮于培养液中的纯培养细菌检样用于散点图模型样例。

1.2 实验设备 UF－1000i尿沉渣分析仪（日本Sysmex公司产品）及配套试剂和质控物；尤利特干化学分析仪及配套试纸条和质控物；VTTEK2全自动微生物分析仪（法国生物梅里埃公司产品）。

1.3 方法

1.3.1 尿标本定量培养 将尿液标本做定量培养和分离培养，根据临床和检验标准化研究所的要求，整个过程采取无菌操作。将清洁中段尿充分混匀，用定量接种环取尿液标本分区画线于血琼脂平板上，在35℃的孵育箱中培养24h后，计数生长菌落，乘以稀释倍数，计算每毫升生长菌落，使用VTTEK2全自动微生物分析仪进行细菌鉴定。无菌生长的标本继续培养24h［3－4］。

1.3.2 UF－1000i检测尿沉渣细菌 将培养接种后的尿液标本做尿沉渣细菌计数并保存。通过UF－1000i测得细菌计数和标本散点图。严格按照操作规程操作，从标本留取到检验全过程控制在1h之内。

2 结 果

2.1 UF－1000i的细菌数与定量培养细菌数的相关性 在住院患者尿液标本中，经过UF－1000i测定且通过细菌培养检查进行定量培养的尿液标本共有138例。对该138例尿液样本进行细菌数比较，达到1.0×105/mL以上视为阳性。在对UF－1000i的灵敏度和特异度进行确认后，其灵敏度为95.2%，特异度为70.2%（表1）。与定量培养法相比，UF－1000i具有在细菌数1.0×104/mL以下低值区域内较定量培养法得出的数据偏高，而在1.0×106/mL以上的高值区域内较定量培养法得出的数据偏低的倾向。

表1 定量培养和UF－1000i的细菌计数比较（n＝138）

2.2 UF－1000i细菌计数与亚硝酸盐检测 UF－1000i中细菌计数在1.0×105/mL以上且为了不含污染物质，WBC数量在10个/微升以上的尿液样本视为细菌尿。细菌尿的亚硝酸盐阳性率15.2%，非细菌尿的阴性率100.0%，与细菌计数呈正比，细菌计数越大，阳性率越高（表2）。

表2 UF－1000i的BACT细菌数同亚硝酸盐检测

2.3 检出菌种和亚硝酸盐检测的相关性 对表2中研究的部分标本进行细菌鉴定检查并将检查出的菌种与亚硝酸盐检测的阳性率进行比较。结果证明，由杆菌引起的亚硝酸盐阳性率较高，而其中引起亚硝酸盐阳性率最高的菌种是大肠杆菌，阳性率约为70.0%，在球菌中只有葡萄球菌会引起亚硝酸盐反应阳性。

2.4 根据UF－1000i的散点图模型辨别杆菌与球菌可能性的研究 细菌的散点图模型是根据细菌的形状建立，由于杆菌趋向与在X轴以上约10°～20°的小角落出现，而球菌则趋向于在30°～45°的大角度出现，所以在细菌数达到1.0×105/mL以上105例患者尿液标本中，将30°以下的认定为杆菌，30°以上的认定为球菌，并将此作为与散点图模型分离的杆菌和球菌的一致率。因UF－1000i细菌散点图纵轴通过前向散射光强度来表示粒子的大小，横轴则以周围荧光强度来表示粒子的染色强度。散点图X轴在30°以下且该散点图模型已获认可的65例样本中，检测出杆菌样本所占比例达到93.8%（61/65），检测出球菌的样本6.2%（4/65），见表3。其中属于肠球菌的有2例，属于链球菌的有1例。当X轴在30°以上且散点图已获认可的40例样本中，检测出球菌的样本所占的比例为82.5%（33/40），检测出杆菌的样本为4例。由于细菌数在1.0×105/mL左右，细菌量太少无法进行鉴别的样本有3例。其中有2例是混合菌样本，有1例是球菌样本。因此基本能够实现杆菌和球菌的鉴别。

表3 根据散点图模型进行杆菌和球菌的鉴别［n（%）］

3 讨 论

使用UF－1000i可以简便且快速地进行细菌计数的测定，同时可以通过细菌散点图推断所含的杆菌或球菌。就定量细菌培养和UF－1000i的细菌数的相关性而言，在低值范围内UF－1000i检测出的样本常含有假阳性的样本；但这些假阳性标本通过镜检就基本可以认定［5－7］。在本次试验中没有对是否使用抗生素进行研究，因为考虑到在定量培养中由于细菌自身的特点，也可能细菌本身因发育不良或患者预先使用过抗生素的原因在培养过程中死亡。在高值范围内UF－1000i测定数据偏低，推测其原因可能与细菌聚集在一起同时通过计数池而造成数据偏低有关，其中球菌尤为明显［8－10］。细菌尿亚硝酸盐反应中，细菌越多，反应阳性率越高，但由于菌种的不同对亚硝酸盐的还原能力也有所差别，且亚硝酸盐阳性反应必须符合的条件如尿液必须在膀胱中储存4h以上，体内有适量的硝酸盐存在等因素的影响，导致最终阳性率只有15.2%的低值［11］。但是在UF－1000i中亚硝酸盐呈阳性的样本均被认定为是细菌尿，不存在假阳性计数。在通过散点图模型进行的杆菌和球菌的鉴别中，大部分能够进行很好的鉴别；而只有在少量细菌的情况下鉴别较困难，这种情况可以配合尿液培养检查。在散点图模型中在30°左右区域内，由于同时混杂着杆菌和球菌，所以很难进行鉴别。根据本次对亚硝酸盐反应和相关菌种的研究，以及表3根据UF－1000i的散点图模型辨别杆菌和球菌的研究结果显示，亚硝酸盐反应呈阳性时，可推断存在杆菌，而反应呈阴性时则不存在杆菌。由于目前只能用目测的方式来观察散点图的分布情况用以判断杆菌还是球菌，所以检验人员期望对散点图模型的认识能直接通过仪器来进行鉴别。

本文研究结果显示，UF－1000i能够对细菌数及杆菌和球菌进行迅速鉴别且对尿亚硝酸盐反应、尿沉渣检查、尿培养检查等相关尿路感染的诊断有所帮助。

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