白芍提取物肠溶微囊的制备及体外释放度的研究＊

崔亚男 管 华 刘春华 付英杰 王慧云

（1济宁医学院药学院，山东 日照276826；2济宁医学院临床学院，山东 济宁272067）

本文作者曾成功制备了复方参芍注射剂［1－2］。但近年来，随着中药注射剂的产销量快速增长，有关中药注射剂的产品质量问题和临床安全问题的报道也逐渐增多。因此，本文在前期研究的基础上，进一步对复方参芍进行研究，拟通过微囊化技术，将白芍及人参茎叶皂苷分别包囊，提高储存稳定性，延长和控制膜内物质的释放，提高生物利用度。

1 仪器与试剂

白芍饮片（日照市药材公司）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检验所）；AB－8型大孔吸附树脂（南开大学化工厂）；Eudragit L100（连云港制药厂）；HPMC（石家庄优甫化工有限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯；其它均为分析纯；DMBA数码显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司）；光学显微镜（Nikon YS100）；78HW－1型恒温磁力搅拌器（杭州仪表电机厂）；冷冻干燥机（北京四环科学仪器厂）；LC－10ATVP高效液相色谱泵（日本岛津株式会社）；SPD－10AVP高效液相检测器（日本岛津株式会社）；柱温箱（大连中汇达科学仪器有限公司）；ZRS－8G智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）。

2 方法与结果

2.1 白芍提取物的制备

将白芍饮片粉碎过20目筛，取100g，加80%乙醇200ml，回流提取2次，每次2h［2］，合并提取滤液，将提取液减压浓缩至稠膏，于真空干燥箱内60℃干燥至恒重，称取提取物0.02g，加水超声定容至10ml容量瓶中，用离心机离心20min（4 000 r／min），取上清，定容10ml，抽滤，得上柱液。取该液35ml，用AB－8型大孔吸附树脂吸附，选择5倍柱体积的25%乙醇为洗脱剂，洗脱流速为6ml／min。收集洗脱液，于60℃干燥，最终得白芍提取物。以指标成分芍药苷为代表，其含量占提取物的33%。

2.2 白芍提取物肠溶微囊的制备

本文采用改进的相凝聚法制备微囊［3］。将10g的Eudragit L100溶于100ml丙酮中制成胶液，4.2g白芍提取物中加入少许span－60润湿后，加入Eudragit L100胶液中，作为油相。将HPMC溶于0.1mol／L的磷酸盐缓冲液（pH 7.2）中制成1%HPMC溶液作为水相。将15ml的1%HPMC溶液逐渐滴加到10ml的油相中，于750rpm搅拌10min后，并逐渐升温至45℃，溶液出现浑浊，继续搅拌5min。然后加入同温度下50ml蒸馏水，继续搅拌10min，迅速将混悬液于2500rpm离心10min，然后冷冻干燥，即得微囊。通过此工艺所制得的微囊外观圆整，平均粒径为（460±120）μm，微囊的光学显微镜照片如图1。

2.3 微囊中白芍提取物含量的测定

2.3.1 最大吸收波长的选择 分别称取芍药苷对照品和按处方投药比制备的空白微囊，用pH6.8的磷酸盐缓冲溶液与无水乙醇液（1∶1）溶解，配成浓度约为10μg／ml的2份试液，在190～310nm波长范围内进行扫描。扫描图见图2。由图可知，芍药苷于230nm处有最大吸收，辅料在此波长范围内对检测无影响，所以选择波长λ＝230nm处测定芍药苷。

图2 检测波长的确定

2.3.2 色谱条件 色谱柱：ODS C18柱（250×4.6mm，5μm迪马公司）；流动相：乙腈－水－甲醇（60∶25∶15）；检测波长：230nm；流速：1.0ml／min；柱温：30℃；进样量：20μl。

2.3.3 标准曲线的绘制 精密称取芍药苷对照品4.2mg，置于100ml量瓶中，用pH6.8的磷酸盐缓冲溶液与无水乙醇液（1∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密吸取贮备液2.0、4.0、6.0、8.0和10.0ml于10ml量瓶中，用pH6.8的磷酸盐缓冲溶液与无水乙醇液（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为标准供试液。精密取各供试液20μl，进样，按上述色谱条件测定，重复操作3次，测定结果见表1。以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得标 准 曲 线 方 程A＝121619C－102160，R2＝0.9992，标准曲线见图3。芍药苷在8.4～42.0 μg／ml范围内，线性关系良好（r＝0.9996）。

图3 芍药苷含量测定标准曲线

表1 芍药苷浓度的测定

2.3.4 仪器精密度考察 取中间浓度的标准供试液，连续进样6次，测定峰面积，计算RSD为1.42%；连续6d求得日间含量的RSD为1.83%。

2.3.5 溶液稳定性考察 取中间浓度的标准供试液，分别于0、4、8、12、24h进样，测定芍药苷的峰面积。结果表明，24h内峰面积的RSD为1.67%，说明样品稳定性良好。

2.3.6 加样回收率 称取空白微囊适量，用pH6.8的磷酸盐缓冲溶液与无水乙醇液（1∶1）溶解制备空白样品溶液。精密量取芍药苷标准贮备液（52μg／ml）2.0、4.0、8.0ml各3份于10ml容量瓶中，用空白样品溶液定容10ml，进样，测定其峰面积，根据标准曲线计算浓度，求得平均加样回收率为100.24%，相对标准偏差为1.64%。结果见表2。

表2 芍药苷回收率的测定（n＝3）

2.3.7 载药量、包封率的确定 精密称取制得的微囊10mg于100ml容量瓶中，加入50ml pH6.8的磷酸盐缓冲溶液与无水乙醇液（1∶1）振摇溶解，然后定容100ml。进样，测定峰面积，根据标准曲线计算浓度，依据下式计算微囊载药量与包封率：

载药量＝微囊中所含芍药苷的量／（0.33×微囊的总量）×100%

包封率＝微囊中所含芍药苷的量／（0.33×白芍提取物投药量）×100%

2.4 释放度的测定

精密称取制得的微囊100mg，3份，按《中国药典》2010版二部释放度测定方法［4］，首先将微囊投放至0.1mol／L的盐酸溶液500ml中，在（37±0.5）℃，100rpm条件下，分别于10、20、40、60、90、120 min取样5ml（同时补充同体积同温新鲜溶出介质），用0.22μm微孔滤膜过滤，依法测定其峰面积，计算样品浓度，并计算累积释放百分率。2h后，于上述酸溶液中加入的0.2mol／L的磷酸盐缓冲液250ml，同时以2mol／L的NaOH溶液调节pH值至6.8，在（37±0.5）℃，100rpm条件下，同时开始计时，分别于30、45、60、90、120min后取样5ml，用0.22μm微孔滤膜过滤，依法测定其峰面积，计算样品浓度，并计算累积释放百分率。结果见图4。

图4 白芍提取物肠溶微囊在人工胃液、肠液中释放结果

3 结果与讨论

经过本法提取纯化的白芍提取物，水溶性差，在50%以上的乙醇溶液中溶解良好，亦可溶于丙酮中，因此本文选择将白芍提取物加入到EudragitL100的丙酮溶液中作为油相。同时在测定载药量和包封率时，选用pH6.8的磷酸盐缓冲溶液与无水乙醇液按1∶1的比例作为微囊的良溶剂。

在筛选微囊的最佳处方工艺时，通常以载药量和包封率为指标。本文所制备的微囊载药量为92.3%，而包封率仅为43.04%，主要考虑的是为防止剂量过大，为今后制备口腔崩解片打下基础。

［1］ 崔亚男，王东凯，邱志斌.2种溶血性试验方法在复方参芍注射剂研究中的应用［J］.中国药房，2007，18（3）：182－183.

［2］ 崔亚男，王东凯，邱志斌，等.复方参芍注射剂制备工艺的研究［J］.中成药，2007，29（3）：447－450.

［3］ Dong W，Bodmeier R.Encapsulation of lipophilic drugs within enteric microparticles by a novel coacervation method［J］.Int J Pharm，2006，326：128－138.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.