参照CLSI EP文件评价两种类风湿因子测定试剂的优劣
2013-06-08曾崇亮四川省成都市传染病医院检验科610066
曾崇亮(四川省成都市传染病医院检验科 610066)
类风湿因子(RF)是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体,无种属特异性[1-2]。RF与天然IgG结合能力较差,但易与免疫复合物中的IgG或聚合IgG反应。RF测定方法有很多,如胶乳凝剂试验、双抗原夹心法、酶联免疫吸附试验、速率散射比浊法、免疫比浊法,前面几种方法需手工操作,标本用量较大,且费时。免疫比浊法临床操作简单,灵敏度高,在临床上广泛应用。同时免疫比浊又分为胶乳增强免疫比浊法和免疫比浊法,胶乳增强免疫比浊法是由特异抗体结合胶乳颗粒表面,标本中的RF与其结合,并使相邻的乳胶颗粒彼此交联,具有较好的放大作用。本文依据美国临床实验室标准化协会颁发的EP7-A2和EP9-A2文件[3-4],对胶乳增强免疫比浊和免疫比浊法测定RF进行了初步评价,报道如下。
1 资料与方法
1.1 标本采集 试验组为本院2010年10月至2011年9月的类风湿关节炎患者,其中男22例,女18例,年龄22~40岁,诊断均符合美国风湿病学会1987年修订的标准[3];对照组为健康人62例。
1.2 试剂与校准品 试剂分别为A厂家提供的RF胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒(批号:0311021)及配套校准品(批号:0311012),B厂家提供的RF免疫比浊法测定试剂盒(批号:104151C)及配套校准品(批号:106281LY)。
1.3 质控品 朗道特殊蛋白质控品212LPC与198LPC。
1.4 仪器 采用日立7180全自动生化分析仪进行检测。
1.5 主要分析参数 严格按照仪器、试剂说明书及相关实验室技术操作规程进行设定。
1.6 评价方法
1.6.1 精密度 取高、低值两种不同水平的混合血清RF样品,用A厂家和B厂家提供的试剂测定20次,计算均值CV。
1.6.2 测定范围 准备高浓度(H)和低浓度(L)水平的样本,依照5/5L+0/5H、4/5L+1/5H、3/5L+2/5H、2/5L+3/5H、1/5L+4/5H、0/5L+5/5H的比例制成一系列浓度的样本,用两种方法的试剂对每个样本做3次重复测定,对理论浓度与实际浓度进行线性回归分析,得到相关系数(r)≥0.95的范围为线性范围。
1.6.3 干扰试验 参照EP7-A2文件的评价方法测定临床标本,先将其分成4n+1份,每组(胆红素组、三酰甘油组、血红蛋白组和维生素C组共4组)中的n份分别加入不同浓度的该种干扰物质,另1份作为干扰试验的基准对照组,即加入干扰物质的浓度为0。用2个厂家试剂测定所有样本,各重复测定3次,计算各自的干扰值。
1.6.4 功能灵敏度 用临床样本(浓度为8U/mL)加入生理盐水对倍稀释,组成“检测限”样本,分别测定20次,计算变异系数(CV),当CV≤20%时的最大稀释浓度作为功能灵敏度。
1.6.5 试剂的开瓶稳定性观察 取A厂家和B厂家试剂开瓶后分别放入日立7180的试剂仓中,时间为30d,每天测定质控品3次,记录并取均值。
2 结 果
2.1 精密度评价 根据实验结果得出A厂家和B厂家试剂的精密度,见表1。
表1 2个厂家试剂的精密度比较
2.2 测定范围 测定数据录入Excel表格,使用SPSS16.0软件统计分析其吸光度变化值的平均值与对应浓度的线性关系,回归方程和r分别为:A厂家Y=0.996 2X-0.046 7;r=0.999 3,测定范围2~140U/mL。B厂家Y=0.992 3X-0.062 4;r=0.999 7,测定范围0~300U/mL。
2.3 干扰试验 A厂家试剂抗干扰能力为:胆红素小于或等于342μmol/L,血红蛋白小于或等于10g/L,三酰甘油小于或等于11.3mmol/L以内测定结果良好。B厂家试剂抗干扰能力为:胆红素小于或等于500μmol/L,血红蛋白小于或等于5 g/L,三酰甘油小于或等于6.75mmol/L以内测定结果良好。
2.4 功能灵敏度 A厂家试剂功能灵敏度为2U/mL,B厂家试剂功能灵敏度为9U/mL。
2.5 开瓶稳定性观察 见表2。
表2 2个厂家试剂的开瓶稳定性比较
3 讨 论
RF是一类自身抗体,包括所有类型的免疫球蛋白,他们是抗生素变性或聚合IgG分子FC片段的抗体,诊断所检测的RF主要是RF-IgM,主要用于辅助诊断各种类风湿疾病[5-7]。
本文采用目前市售的两种免疫比浊法方法试剂进行评估,研究结果为:胶乳增强免疫比浊法和免疫比浊法测定RF的精密度分别为4.58%(低值)、2.83%(高值)和7.19%(低值)、2.90%(高值),功能灵敏度为2U/mL和9U/mL,测定范围分别为:2~140U/mL和0~300U/mL;抗干扰能力分别为胆红素:≤342μmol/L和≤500μmol/L,血红蛋白:≤10g/L和≤5g/L,三酰甘油:≤11.3mmol/L和≤6.75mmol/L;试剂开瓶后30d反复测定CV分别为:4.35%(高值)、4.89%(低值)和4.45%(高值)和7.39%(低值)。根据试验结果可以看出胶乳增强免疫比浊法试剂的精密度、功能灵敏度、开瓶稳定性低值测定方面明显优于免疫比浊法试剂,抗干扰能力中抗血红蛋白和三酰甘油方面要比免疫比浊法效果好,测定范围和抗胆红素方面低于免疫比浊法,开瓶稳定性高值测定方面二者差异无统计学意义。两种试剂各有优势,因血清中RF的含量比较低,其医学决定水平为30U/mL,胶乳增强免疫比浊法测定RF具有很好的精密度和功能灵敏度,能够更好地满足临床需求,测定低浓度RF更有优势[8]。试剂开瓶稳定性观察结果两种方法在高端差异不大,而在低端有明显的区别,开瓶30d后胶乳增强免疫比浊法试剂吸光度无明显变化,说明该试剂胶乳包被技术稳定,试剂均一性较好,不会随着时间的延长出现沉淀现象。
综上所述,经过本试验方案结果对比可以看出,A厂家生产的胶乳增强免疫比浊法试剂性能明显优于B厂家生产的免疫比浊法试剂,而且A厂家试剂价格更便宜,符合择优选用的原则。本次试验中只选择了精密度、功能灵敏度、测定范围、干扰试验和开瓶稳定性等5项指标进行检测,原因在于可操作性。医院检验科应该根据实际情况,正确选择合适的性能评估指标进行试剂评价试验。目前市面上检测同类型指标的试剂非常杂多,通过本次试验,本科室建立了本院检验科可用的同类试剂评价方案,便于择优选用。
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