RP－HPLC法测定爱维心口服液中田蓟苷的含量

严 欢 贺金华 毛，康雨彤 戎晓娟 蔡晓翠

新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004

RP－HPLC法测定爱维心口服液中田蓟苷的含量

严 欢 贺金华 毛，康雨彤 戎晓娟 蔡晓翠

新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004

目的：采用RP－HPLC法建立爱维心口服液中田蓟苷的含量测定方法。方法：乙腈－0.5%甲酸（25：75）为流动相；Agilent TC－C18（4.6 mm×150 mm，5μm）色谱柱，检测波长为324nm；柱温为30℃，流速为1.0 mL／min。结果：田蓟苷浓度在4.07～40.70μg／mL范围内与峰面积线性关系良好，r＝1（n＝6），平均回收率为100.32%，RSD为1.56%。结论：该方法简便易行，重复性好，结果准确，可用于该制剂的质量控制。

爱维心口服液；田蓟苷；RP－HPLC

爱维心口服液处方来源于 《中华人民共和国卫生部药品标准—维吾尔药分册》，由香青兰等15味药材组成，具有通络行血、强心醒脑、强健支配器官的作用。临床用于心胸疼痛、心悸心慌、失眠健忘、神经衰弱［1－2］。香青兰为唇形科（Labiatae）植物香青兰（Dracocephalum moldavuca L.）的干燥全草，维吾尔语名为Badranjibuyaqini，是维吾尔医常用药材，主产于新疆，目前在新疆各地有栽培。该药材在维吾尔医和民间用于治疗冠心病及血液质旺盛（高血压）、心悸心痛、头晕脑胀、反应迟钝、感觉低下、寒性神经性头疼、寒性感冒、气管炎等疾病，有数百余年的用药历史。在 《中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药材分册》、《新疆维吾尔药材标准》、《维吾尔药志》、《中华本草》（维吾尔药卷）［3－5］均有记载。田蓟苷为香青兰药材中的主要有效成分，化学结构式见图1。本研究采用反相高效液相色谱法研究了制剂里香青兰中田蓟苷的含量测定方法，为控制制剂质量提供科学依据［6－7］。

图1 田蓟苷化学结构式Fig1 Structure of Tilianin

1 仪器与材料

Shimadzu－LC2010C全自动液相色谱仪；Shimadzu CLASS－VPV6.14 SP4数据工作站；色谱柱：Agilent TCC18（4.6 mm×150 mm，5μm）；Satorius BP211电子天平（十万分之一）。田蓟苷对照品 （新疆维吾尔自治区药物研究所自制，纯度99.114%）。爱维心口服液由新疆新维制药厂生产，批号：20090701、20090702、20090703、20090801、20091001、20100101、20100301、20100302、20100401、20100501。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC－C18（4.6mm× 150mm，5μm）；流动相：乙腈－0.5%甲酸（25：75）；检测波长：324nm；柱温30℃；流速1.0ml／min。

2.2 溶液的制备 供试品溶液的制备：精密量取本品5mL，加甲醇定容至10mL量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。对照品溶液的制备：精密称取田蓟苷对照品适量，置棕色量瓶中，用甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。阴性对照品溶液的制备：按照处方比例称取缺香青兰的其它几味药材，按制剂工艺制成阴性样品，依供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验取供试品溶液及对照品溶液进样分析，结果理论板数以田蓟苷峰计为12721.86，分离度为2.0（＞1.5），拖尾因子为1.04，表明本条件下系统适用性试验结果符合要求。

2.4 专属性考察 分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液与阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部，附录ⅥD）测定。色谱图见图2。

2.5 线性考察 精密吸取对照品贮备液（40.70μg／mL），加甲醇分别制成含田蓟苷为4.07、8.14、12.21、20.35、28.49、40.70μg／mL的对照品溶液，进样；以溶液浓度（μg／mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性回归方程为：y＝31655x＋214.99，r＝1。表明田蓟苷浓度在4.07～40.70μg／mL范围内线性关系良好。

图2 专属性考察色谱图.test sample；B.reference substance；C.negative referencegrams of specificity test

2.6 准确度 釆用标准加入法测定回收率。精密量取供试品（批号：20100501）5mL，共6份，分别置10mL量瓶中。每组分别加入浓度为0.0176mg／mL的田蓟苷对照品溶液5mL，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，在含量测定色谱条件下进样10μl，用外标法计算回收率，结果平均回收率（%）为100.32，RSD（%）为1.56。

2.7 重复性试验 取同一批制剂（批号：20100501），按供试品溶液制备方法制备6份溶液，在含量测定色谱条件下测定，结果RSD为1.05%。

2.8 日内日间精密度 同一批样品（批号：20100501）分别在同一天的不同时间 （每隔2小时）用含量测定方法重复测定，计算含量的RSD为0.68%；同一批样品（批号：20100501）不同人分别在不同天（连续5天）用含量测定方法重复测定，计算含量RSD为1.15%。

表1 十批样品测定结果（n＝3）Tab 1 The determination results of ten batches of samples（n＝3）

2.8 十批样品测定 取十批样品，依田蓟苷含量测定条件测定，结果见表1。

3 讨论

3.1 色谱条件及供试品处理方法选择根据文献报道，田蓟苷的测定方法有两种。方法一［8］：色谱条件：Diamonsil C8色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇－0.2%磷酸水溶液（48：52）；流速：1.0mL／min；柱温：30℃；检测波长：324nm。供试品溶液的制备方法：取本品100mL，加入已处理好的聚酰胺柱（80－120目，3 g，内径1.5 cm）上，用水500mL洗脱，弃去水液，再经甲醇500 m L洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，残渣用色谱甲醇溶解并定容10mL，摇匀；用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。方法二［9－10］：色谱条件：Agilent TC－C18色谱柱（4.6mm ×150mm，5μm）；乙腈－0.5%甲酸（25：75）为流动相；检测波长：324nm；柱温30℃；流速1.0mL／min。供试品溶液的制备：精密量取本品5mL，加甲醇定容至10mL量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.4μm）滤过，即得。

通过两种方法的比较，方法一色谱条件下田蓟苷可以得到很好的分离，因供试品处理方法较为繁琐，制剂处方中其含量不高，故不适合复方制剂中田蓟苷含量测定；方法二色谱条件下供试品虽杂质含量较高，但田蓟苷可以得到很好的分离，且处理方法简便易行，故选择方法二的供试品处理方法及色谱条件进行。

3.2 检测波长的选择 取同一供试品溶液，依方法二的液相色谱条件下分别于波长为320nm、324nm、328nm波长处测定，结果田蓟苷含量分别为：17.1313、17.7920、17.7688μg／mL，故最终选择324nm作为检测波长。

3.3 讨论 标准中没有设定含量测定项，这与当前于药品质量标准规定存在一定的差距。为控制其内在质量，将以高效液相色谱法测定田蓟苷的含量，增加该制剂的含量测定项。本方法专属性强、操作简单、灵敏度高、结果准确、重现性好，可用于制剂的质量控制，同时完善并提高了原有的药品质量标准。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典 （一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］中国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准 （维吾尔药分册）［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：72..

［3］新疆维吾尔自治区卫生厅.维吾尔药材标准 ［M］.乌鲁木齐：新疆科技出版社，1999：245－249.

［4］刘勇民.维吾尔药志 （上册）［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：405－407.

［5］中华本草编委会.中华本草 （维吾尔药）［M］.上海：上海科学技术出版社，2005：235.

［6］苗明山，李振国.现代实用中药质量控制技术 ［M］.北京：人民卫生出版社，2000.

［7］刘金晖，严欢，钟丽，等.HPLC法测定益心巴迪然吉布亚颗粒中咖啡酸的含量［J］.新疆中医药，2010，28（2）：49－50.

［8］买买提·努尔艾合提，吐尔洪·艾买尔，罗光明.高效液相色谱法测定维吾尔药材香青兰中田蓟苷和洋芹素的含量 ［J］.中国民族医药杂志，2009，11（11）：61－62.

［9］严欢，仲婕，闫明，等.RP－HPLC法测定温肾苏拉甫片中吗啡的含量［J］.新疆医科大学学报，2009，32（3）：262－264.

［10］仲婕，徐芳，闫明，等.RP－HPLC法测定维药通滞苏润江胶囊中秋水仙碱的含量［J］.中国药房，2009，20（3）：200－201.

Determ ination of tilianin content in Aiweixin oral liquid by RP－HPLC

YAN Huan，HE Jinhua，MAO Yan，RONG Xiaojuan，KANG Yutong，CAIXiaocui
（Xinjiang Institute of Materia Medica，Urumqi830004，China）

ObjectiveTo establish an RP－HPLCmethod to determine the contentof tilianin in oral liquid.Mothods：By RPHPLC.Themobile phase was acetonitrile－0.5%methane acid（25：75）；the liquid chromatography was carried out using a Agilent TC－C18（4.6 mm×150 mm，5μm）.Detection wavelength was at324 nm，column temperature was at 30℃，The flow rate was 1.0 mL／min.Results：The linear responserange of tilianin was 4.07～40.70μg／mL（r＝1，n＝6）.The average recovery was 100.32%，RSD（%）was1.56（n＝6）.Conclusion：Themethod is simple，sensitive，accurate and reproducible.It can be used in quality control of Aiweixin oral liquid.

Aiweixin oral liquid；tilianin；RP－HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）17－0023－02

2013.07.14）