HPLC测定维药罗补甫克比日丸中丁香酚的含量

司马义江.阿布都热西提 木合塔尔.木明

新疆维吾尔自治区喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000

HPLC测定维药罗补甫克比日丸中丁香酚的含量

司马义江.阿布都热西提 木合塔尔.木明

新疆维吾尔自治区喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000

目的：高效液相色谱法测定罗补甫克比日丸中丁香酚的含量。方法：甲醇－5%甲醇溶液（50∶50）；流速lmL／min；检测波长225nm；柱温：25℃；进样量：l0μL；分析方法：外标法。结果：丁香酚在6.32～126.46μg／mL范围内线性良好（r＝0.9995），方法精密度为RSD为0.7%（n＝5），平均回收率为97.2%，RSD为1.3%（n＝6）。结论：该方法简便、准确、测得结果稳定重现性好，可作为该制剂中丁香酚的含量测定方法。

HPLC；丁香酚；罗补甫克比日丸；含量测定

罗补甫克比日丸是新疆维吾尔族名药之一，主要由牛鞭、肉桂、苜蓿子、洋葱子、丁香、花椒、胡萝卜子、甜瓜子、巴丹仁、韭菜子等30味药材组成。具有温补脑肾，益心填精的功效。主要用于阳痿、抑郁、早泄、滑精、体虚、消瘦、神经衰弱，属部颁标准－维吾尔药分册收录品种［2］。部颁标准仅采用定性鉴别试验来控制该制剂的质量，研究该成分的含量测定方法可以更好的反映和控制本品的内在质量。

1 仪器和试药

1.1 仪器 岛津高效液相色谱系统：包括LC 20AT型双泵，SIL 20AC型自动进样器，SPD-M20A型PDA检测器；岛津uv－2450紫外可见分光光度计；BP211D型分析天平（德国Sartorius公司）

1.2试药 丁香酚对照品（批号：110725－200711，中国药品生物制品鉴定所）；罗补甫克比日丸（批号：20110830、20110836、20120419，和田维吾尔药业有限责任公司）；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；所有色谱用试剂均用0.45μm微孔滤膜过滤，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：岛津VP－ODS 250×4.6mm 5μm；流动相：甲醇－5%甲醇溶液（50∶50），流速lml／mi，检测波长225 nm，柱温25℃；进样量：l0μL；分析方法：外标法［1］。

2.2 对照品溶液的配制 精密称取丁香酚对照品，加流动相溶解制成1.2646mg／ml的溶液，精密量取5ml置50m l量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成126.46μg／ml的溶液，作为对照品溶液储备液。

2.3 供试品溶液的配制 取样品（批号：20110830、20110836、20120419），研碎，称取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50m l，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，擦干，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，用微孔滤膜 （0. 45μm）滤过，取续滤液即得。

2.4 系统适应性试验 分别按照2.2、2.3项下方法制备对照品溶液及供试品溶液，按2.1项下色谱条件，各进样10μL，同时采集225nm光谱数据，结果显示，供试品溶液相应色谱峰的光谱与对照品丁香酚一致。丁香酚酸对照品保留时间为11.2min，理论塔板数大于6000。

2.5 线性关系考察 精密量取对照品储备液（126.46μg／ml）0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取10μL，按“2.1”色谱条件下操作，以6次测定的峰面积平均值考察线性范围。线性方程为：Y＝1.09×10－4X＋1.54（r＝0.9995），结果表明，丁香酚在线性范围：6.32～126.46μg／m l范围内线性关系良好。

2.6 精密度实验精密量取对照品溶液储备液（126.46μg／ml）5ml置25ml量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，取10μL，重复进样5次，以峰面积计算RSD（n＝5）为0.69%。证明本法有较高的精密度。

2.7 稳定性实验 取同一批号本品（20110836），按“2.6”方法配制溶液，分别于0、1、2、4、6h进样，进样量为10μL，测定丁香酚的峰面积，RSD为1.68%，表明样品在6h内稳定。

2.8 重复性实验 取同一批号本品（20110836），平行制备5份样品，按样品测定法测定，并对所得数据进行处理，结果测得丁香酚含量的RSD为1.28%。

2.9 加样回收率实验 精密量取已知含量的样品 （批号：20110836，含量860.7μg／g）称取1g，精密称定，置50ml容量瓶中，精密加入丁香酚对照品溶液储备液 （浓度为126.46μg／g）5ml，再加流动相适量密塞，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为加样回收率样品。同法制备6份加样回收率样品。按照样品测定项下的方法测定含量，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果（n＝6）

2.10 样品测定 取3批样品按“2.3”方法制备供试品溶液，按 “2.1”色谱条件下测定，按外标法计算没食子酸含量。结果见表2。对照品和供试品色谱图见图1。

表2 罗补甫克比日丸中丁香酚的含量测定结果（n＝3）mg／mL

图1 HPLC色谱图

3 讨论

3.1 检测波长的选择 取丁香酚对照品适量，用流动相溶解并稀释成0.1mg／ml溶液，用紫外可见分光光度计于200～400nm处进行扫描，从其紫外图谱中可见其在225nm、280nm处有最大吸收，但在225nm处吸收比较强，故选择225nm为检测波长。

3.2 流动相的选择 参考文献报道的方法试验，流动相用甲醇－水（65：35）［3］，甲醇－水（58：42）［4］，在该制剂中丁香酚的分离效果均不佳，通过不断改变甲醇与水的比例及流速，选定甲醇－5%甲醇溶液（50∶50）及流速lml／min比较合适，分离度好且保留时间适宜。

本实验测定了不同批号的罗补甫克比日丸，结果均能检出丁香酚，但含量有所差异。本篇通过实验研究，建立了罗补甫克比日丸中丁香酚含量的HPLC测定法，本法取样量少，方法简单，重现性好，结果准确，可作为质量控制分析方法，为丁香酚的含量测定提供了有效的方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典 （一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录36.

［2］中国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准 （维吾尔药分册）［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1998：155.

［3］余小平.高效液相色谱法测定丁香中丁香酚的含量 ［J］.中国药物分析杂志，2008，28（6）：975.

［4］吴军侠，赵红侠.高效液相色谱法测定蒙药暖宫七味散中丁香酚含量［J］.中国药业2010，19（5）：31.

Determ ination of Uygur Medicine Preparation Luobupukebiri Pills Solution of Eugenol by HPLC

Simayijiang Abudurexiti Muhetaer Muming
（Kashi Institute for Drog Control，Kashi Xinjiang 844000，China）

ObjectiveDetermination of Luobufukebiripills solution of Eugenol.Methods Amethanol，5%methanol（four Fifty－Fifty）；flow lmL／min；detection wavelength 225 nm column temperature：25℃；injection volume：l0μL；analysismethods：external standard method.Results：Eugenol.in 6.32～126.46μg／mL range of good linearity（r＝0.9995），method precision was RSD＝0.7%（n＝5），the average recovery was 97.2%，RSD was 1.3%（n＝6）.Conclusions Themethod is，accurate and measured results are stable and reproducible and can be used in thesimple preparation of Eugenolmethod.

HPLC；Eugenol；Luobufukebiri pills；content determination

R29

A

1007－8517（2013）20－0001－02

2013.08.16）

司马义江.阿布都热西提（1973－），男，大学本科，主管药师。E－mail：simayi1102＠126.com