RP－HPLC法测定三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量

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1.广西盈康药业有限责任公司，广西 南宁 530023；2.广西壮族自治区药用植物园，广西 南宁 530023

RP－HPLC法测定三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量

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1.广西盈康药业有限责任公司，广西 南宁 530023；2.广西壮族自治区药用植物园，广西 南宁 530023

目的：建立三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，Inertsil ODS－SP C18（150mm×4.6μm）色谱柱，流动相：甲醇－水－冰乙酸（50∶50∶1），检测波长262nm。结果：盐酸麻黄碱在0.0504～1.0080μg内线性关系良好。平均回收率99.8%，RSD＝1.20（n＝9）。结论：该方法简便、准确、专属性强，可用于三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱的含量测定。

三味清热止痒洗剂；盐酸麻黄碱；反相高效液相色谱法

三味清热止痒洗剂是由败酱草、麻黄、威灵仙三味药材制成，具清热燥湿、解毒祛风止痒之功效，用于湿热风毒瘀阻所致的外阴瘙痒，症见局部皮肤干燥、肥厚、瘙痒难忍者。原标准对方中麻黄主要成分盐酸麻黄碱的测定采用薄层扫描法，检测方法较为滞后，重现性不理想，因此对本品中盐酸麻黄碱的含量测定方法进行改进，是非常必要和必须的。根据文献［1－3］报道及预实验结果，对本品中盐酸麻黄碱的含量测定方法作了修订，采用RP－HPLC对其进行研究和测定，方法简便、准确、专属性强。

1 仪器及试药

日本岛津公司LC－10ATVP高效液相色谱仪；SPD－10AVP分光光度计；威玛龙色谱工作站；BP211D十万分之一电子天平；盐酸麻黄碱对照品 （中国药品生物制品检定所，批号：171241－200506）；三味清热止痒洗剂样品由广西盈康药业有限责任公司提供；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水－冰乙酸 （50∶50∶1）为流动相；检测波长262nm；柱温：室温，流速：1.0ml／mi，理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于2000。

2.2 专属性试验取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60μg的溶液，摇匀，精密量取10ml，置25m l量瓶中，加入0.1mol／L的高碘酸试液1ml，摇匀，加入浓氨试液1ml，振摇5分钟，加20%的冰乙酸溶液1m l，摇匀，加流动相至刻度，摇匀，制成24μg／L的对照品溶液；精密量取本品10ml，加2mol／L的氢氧化钠溶液125m l，摇匀，加氯化钠10g，振摇使溶解后，蒸馏，用盛有1mol／L盐酸溶液1m l的100m l量瓶收集蒸馏液近95m l，加水至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25m l量瓶中，按照对照品溶液制备方法，自加入高碘酸试液起，至用流动相稀释至刻度止，依法操作，摇匀，制成供试品溶液；按三味清热止痒洗剂原标准的处方、工艺制备不含麻黄的阴性样品，照供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。分别精密量取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，记录色谱图 （见图1、2、3）。在上述色谱条件下，盐酸麻黄碱峰的峰形和分离度均良好，阴性溶液在相应保留时间无杂峰干扰。

图1 盐酸麻黄碱对照品HPLC色谱图

图2 三味清热止痒洗剂供试品HPLC色谱图

图3 缺麻黄阴性样品HPLC色谱图

2.3 线性关系考察 精密量取盐酸麻黄碱对照品贮备液（含盐酸麻黄碱0.126mg／ml）1、5、10、15、20ml，分别置25ml容量瓶中，加入0.1mol／L的高碘酸溶液1ml，摇匀，加入浓氨试液1ml，振摇5分钟，加20%的冰乙酸溶液1ml，摇匀，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取以上溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量 （μg）为横坐标，绘制标准曲线图，得回归方程为：Y＝3386509.759X－4309.1369，r＝0.9999（n＝5）。结果表明，盐酸麻黄碱在0.0504～1.0080μg之间呈良好线性关系。

2.4 重复性试验 取本品同一批样品6份，在上述色谱条件下测定盐酸麻黄碱含量，结果分别为0.7000、0.6991、0.6924、0.6940、0.6967、0.6888 mg／m l，RSD＝0.61（n＝6）。结果表明，本法用重复性良好。

2.5 中间精密度试验 精密吸取本品同一份样品溶液，重复进样6次，测定其中盐酸麻黄碱含量，分别在不同的日期、不同分析人员、不同的高效液相色谱仪等条件下制备供试品测定，结果为：岛津LC－10AT高效液相色谱仪的测定值为0.6920、0.6898、0.6921、0.6903、0.6950、0.6896 mg／m l，RSD＝0.29（n＝6）；岛津LC－20AT高效液相色谱仪的测定值为0.6887、0.6940、0.6983、0.6870、0.6920、0.6976mg／m l，RSD＝0.66（n＝6）；威玛龙高效液相色谱仪的测定值为0.6867、0.6902、0.6940、0.6970、0.6941、0.6852mg／m l，RSD＝0.67（n＝6）。说明本法用于三味清热止痒洗剂中盐酸麻黄碱含量测定，中间精密度良好。

2.6 加样回收率试验 精密量取已知盐酸麻黄碱含量的本品3ml（含盐酸麻黄碱1.0525mg／ml），分别精密加入对照品储备溶液（浓度为0.5127mg／m l）5、7、9ml，低、中、高浓度各3份，依法处理测定。结果平均回收率为99.8%，RSD＝1.2%（n＝9），表明本法准确性良好。结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.7 稳定性试验 取供试品溶液，每隔2h进样一次，依法测定其峰面积，直至12h。峰面积分别为338324、331827、335429、332803、328703、334566、332051，平均峰面积333386，RSD＝0.92（n＝6）。结果表明，所制备的供试品在12小时内进样，能满足含量测定的要求。

2.8 样品含量的测定 按上述方法分别对10批产品进行含量测定，为考察有效期内产品的盐酸麻黄碱含量情况，测定结果见表2。

表2 十批产品含量测定

3 讨论

在供试品溶液配制实验中，分别尝试过乙醚萃取法、蒸馏法进行处理后，再按照对照品溶液处理方法依次加入高碘酸溶液、浓氨试液、冰乙酸溶液等进行处理，结果乙醚萃取法因萃取过程中溶液极易乳化，水层和乙醚层难以分离，方法繁琐、耗时，且主成分峰前沿有一杂质峰干扰，未采用。最终以蒸馏法制备方法简便，供试液较澄清，盐酸麻黄碱成分提取完全，主成分色谱峰不受杂峰干扰等优点而采用。在高碘酸溶液衍生化过程，最初使用氢氧化钠溶液调节pH值，但在进样测定时出现钠盐遇有机溶剂析出沉淀，堵塞仪器流动相管路，后经优化和改进，改用浓氨试液调节pH值，解决了钠盐析出堵塞仪器流动相管路的问题。

实验结果证明，建立的测定方法较原标准采用的薄层扫描法简便、准确，专属性强，可用于三味清热止痒洗剂的含量测定及质量控制。

［1］周玲，吴德康，唐于平，等.麻黄中化学成分研究进展 ［J］.南京中医药大学学报，2008，24（1）：71－74.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典 （一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：300，496，489.

［3］杨辉.HPLC法测定三味清热止痒洗剂中麻黄碱的含量［J］.广西中医学院学报，2006，9（3）：75－77.

Determ ination of Ephedrine Hydrochloride in Sanwei Qingre Anti－itch Lotion by RP－HPLC

HUANG Ruo-gan1LAN Ming-sheng2HUANG Ping-quan1LU Chen2QIN Pei－li1LIANG Feng1
（1.Guangxi Yingkang Pharmacy Co.Ltd.，Nanning 530023；2.Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plant，Nanning 530023）

Objective：Establish amethod to determine the ephedrine hydrochloride in SanweiQingre anti－itch lotion.Methods RP－HPLC analysis was carried out in the condition of Inertsil ODS－SP C18 column（150mm×4.6μm），the mobile phase was methanol－water－acetic acid glacial（50：50：1），the detection wave－length was 262nm.Results：The ephedrine hydrochloride showed a good linearity at a range of 0.0504～1.0080μg，and the average recovery was 99.8%（RSD＝1.20，n＝9）.Conclusion：Themethod is rapid，accurate and specific.It can be used in the quantitative determination of the ephedrine in SanweiQingre anti－itch lotion.

SanweiQingre anti－itch lotion；ephedrine hydrochloride；RP－HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）20－0009－02

2013.08.21）

广西壮族自治区科技厅千亿元重大科技攻关工程项目（桂科攻11107010－3－7）。

黄若干 （1973－），男，本科。主要从事中药制剂分析及中药研究开发。