朝药蛭龙通脉胶囊提取工艺研究

2013-06-07李湘兰何得宾严成玉朴明杰

中国民族民间医药 2013年18期

关键词：通脉天麻乙醇

李湘兰何得宾严成玉朴明杰

吉林省延边朝医医院，吉林延吉 133000

朝药蛭龙通脉胶囊提取工艺研究

李湘兰何得宾严成玉朴明杰

吉林省延边朝医医院，吉林延吉 133000

目的：考察天麻有效成分提取的影响因素，研究蛭龙通脉胶囊的提取工艺。方法：采用正交试验设计法以天麻素的含量为指标，对蛭龙通脉胶囊提取工艺进行优选。结果：蛭龙通脉胶囊最佳提取工艺为：过20目筛的天麻粗粉及组方中需要提取的中药饮片，用6倍量70%乙醇，每次提取1h。结论：本方法工艺稳定、专属性好、灵敏度高，可有效控制本制剂质量。

天麻；正交设计；提取工艺

朝药蛭龙通脉胶囊是在朝医四象体质理论的指导下，以朝医古方为基础，通过长期临床实践的总结而得到的太阴人药，用于治疗太阴人缺血性中风引起的头痛、瘫痪、痰多、便秘等症。天麻是蛭龙通脉胶囊中主要药味之一，而天麻素是其活性成分含量最高的有效单体成分［1］。为有效控制产品质量，实验以天麻素的含量为指标，采用高效液相色谱法进行蛭龙通脉胶囊的最佳提取工艺的研究。

1 材料与仪器

1.1 药材与试药朝药饮片由延边朝医医院提供；天麻素对照品由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯；其余试剂为分析纯。

1.2 仪器 LC2900高效液相色谱仪，上海天普分析仪器有限公司；FA2004分析天平，沈阳龙腾电子有限公司；MP2008电子天平，沈阳龙腾电子有限公司；JC101型电热鼓风干燥箱，上海成顺仪器仪表有限公司；微孔滤膜0.45μm，天津津腾公司。

2 天麻素HPLC分析方法的建立

2.1 色谱条件［2］色谱柱为：Diamonsil C18柱（150mm× 4.6mm，5μm）；流动相为乙腈－0.05%磷酸水（3∶97）；柱温25℃；流速0.8ml／min；检测波长220nm；进样量10μl。

2.2 方法学考察

2.2.1 溶液的制备对照品溶液的制备：精确称取天麻素标准品10mg，用流动相定容于10ml棕色容量瓶中，摇匀，配成天麻素含量1mg／ml的标准储备溶液备用。再从储备液中取出2.1ml置10m l容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得浓度为0.21mg／ml的对照品溶液。供试品溶液的制备：精密称定天麻提取物适量，用流动相定容于10ml棕色容量瓶中，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，配成天麻供试品溶液。

2.2.2 线性关系考察分别精密吸取对照溶液2、5、10、15、20、30μl进样。以峰面积Y和天麻素的含量X（μg）进行线性回归，绘制标准曲线。得到回归方程：Y＝667803X－47449 R＝0.9999（n＝9），表明天麻素在0.42～6.3μg范围内线性关系良好。

2.2.3 精密度试验精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10μl，测得峰面积积分值的RSD为0.95%，表明本法精密度较好。

2.2.4 稳定性试验取天麻提取物，按“2.2.1”项下制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、10、12h进样。测定峰面积积分值得RSD为0.96%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.2.5 重现性试验精密称取同一天麻提取物5份，按“2.2.1”项下制备供试品溶液，进样，测得供试品中天麻素含量的RSD为1.02%，表明本法重现性好。

2.2.6 加样回收率试验精密称取已知天麻素含量的天麻粉末6份，置锥形瓶中，分别精密加入对照品（0.95－1.15）mg。按“2.2.1”项下供试品溶液的制备方法处理，进样，测得峰面积分值，计算天麻素回收率在98.40%～101.26%之间，平均回收率为99.32%，RSD＝0.99%（n＝6），表明天麻回收率良好。

3 实验方法与结果

天麻块茎内主要含有对羟基甲苯－P－D－吡喃葡萄糖苷，命名为天麻苷，也称为天麻素，含量大约为0.3%，还含有D－葡萄糖苷（即胡萝卜苷）、对羟基苯甲醇、香荚兰醛、维生素A类物质、蛋白质、多肽、淀粉、强心苷和钙、镁等物质。天麻素为无色针状结晶体（C13H18O7），熔点为154～156℃，易溶于甲醇、乙醇和水，很难溶于乙醚和氯仿。因此采用乙醇加热回流提取［3－5］。

3.1 提取工艺的优化经预实验及参考相关文献［6］，确定对天麻药材采用乙醇回流法进行提取，次数为3次，并以提取物中天麻素的含量为考察指标，对主要影响因素采用正交表安排实验，优化提取工艺。主要考察乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（D）三个因素，每个因素设三个水平，采用L9（33）正交表安排实验，其因素水平见表1，正交实验安排及结果见表2，方差分析见表3。

表1 L9（33）正交实验因素水平表

3.2 方法与结果将天麻碾磨粉碎，过20目筛。准确称取定量天麻粉末，与其他药材根据方剂中比例混合，按表1正交实验方案提取后，提取液过虑，干燥成粉末。放置备用。

HPLC法测定天麻素含量，供试液按“3.1”项下方法制备。正交实验结果见表2、3。

表2 L9（33）正交实验结果

表3 方差分析表

由表，2、3可以得出各因素作用主次为A＞B＞C，A因素对于天麻素的含量有显著性影响（P＜0.05），而B因素、C因素对天麻素的含量无显著性影响。考虑到实际工艺条件，确定蛭龙通脉胶囊的提取工艺为A3B1C1，即乙醇浓度为70%，乙醇用量为6倍量，每次提取0.5h。考虑到方剂中其他药物含量因素，最后确定提取工艺为A3B1C2，即乙醇浓度为70%，乙醇用量为6倍量，每次提取1h。