益肾化浊颗粒对腺嘌呤饲喂法所致慢性肾衰大鼠血清中Bun，Crea含量的影响

刘学文杨卫彬荆志伟

（1首都医科大学潞河教学医院中医科，北京，101100；2中国中医科学院，北京，100700）

益肾化浊颗粒对腺嘌呤饲喂法所致慢性肾衰大鼠血清中Bun，Crea含量的影响

刘学文1杨卫彬2荆志伟2

（1首都医科大学潞河教学医院中医科，北京，101100；2中国中医科学院，北京，100700）

目的：探讨益肾化浊颗粒对腺嘌呤饲喂法致慢性肾衰大鼠的治疗作用及作用机制。方法：采用0.75%腺嘌呤饲喂法复制大鼠慢性肾衰模型，动物随机分成6组，即空白对照组、模型对照组、尿毒清颗粒对照组和益肾化浊颗粒大、中、小剂量组，连续给药30 d后，计算肾脏指数，ELISA法测定血清中尿素氮（Blood Urea Nitrogen，Bun）和肌酐（Creatinine，Crea）含量，HE染色观察肾脏组织病理学变化。结果：与模型对照组大鼠比较，各给药组大鼠肾脏脏器指数差异均无统计学意义，各给药组大鼠血清中Bun和Crea含量均显著降低，益肾化浊颗粒大剂量组大鼠肾小管扩张程度较轻（P＜0.05）。结论：益肾化浊颗粒可使腺嘌呤饲喂法所致慢性肾衰大鼠血清中Bun、Crea含量下降，改善肾脏病理变化。

益肾化浊颗粒；慢性肾功能衰竭；尿素氮；肌酐

1 材料

1.1 动物 SD大鼠100只，雄性，体重110～130 g，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXK（京）2002-0003。

1.2 药物 益肾化浊颗粒（药粉），由上海申宏益生物科技有限公司提供，每1 g药粉中含生药4.255 g，批号20050905；尿毒清颗粒，由广州康臣药业有限公司提供，批准文号国药准字Z10970122，批号20051204，大鼠灌服5 g药粉／kg，临用时用去离子水配成所需浓度。

1.3 试剂 腺嘌呤，0.75%腺嘌呤饲料，尿素氮（Bun）试剂，肌酐（Crea）试剂。

1.4 仪器 Lisa 300型生化分析仪，法国生产。

2 方法

2.1 动物模型制作、分组及处理 取大鼠100只，20只做为正常对照组，自由饮水，食用常规饲料，其余用于制备模型，自由饮水，食用含有0.75%腺嘌呤饲料［2］，并记录尿量及日常活动状况。4周后，测定血清Bun、Crea和肾脏脏器指数以验证造模是否成功，并根据测定值调整5组模型大鼠，使各组指标均衡无统计学意义，5组分别为模型对照组、尿毒清颗粒对照组和益肾化浊颗粒大、中、小剂量组。益肾化浊颗粒大、中、小剂量组灌服剂量分别为11.27 g生药／kg、5.64 g生药／kg和2.82 g生药／kg，尿毒清对照组灌服尿毒清颗粒5 g药粉／kg，正常对照组和模型对照组灌服去离子水，连续灌胃30 d。

2.2 体重及饮水量检测 给药期间每天记录大鼠的体重和饮水量的变化。

2.3 血清Bun和Crea含量检测 给药30 d后，取血，离心，分离血清，采用ELISA法测定大鼠血清中Bun和Crea的含量。

2.4 脏器系数计算 给药30 d后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，称取体重，取血后处死，取大鼠肾脏称重，并计算脏器指数（肾脏器指数＝湿质量／体质量× 100%）。

2.5 病理组织学检查 将上述取血后处死的大鼠脏器和组织，用中性福尔马林溶液固定、石蜡包埋、切片、HE染色，光镜检查其组织结构的变化。以肾小管管腔短径≥60μm肾小管的个数作为分级标准，进行半定量分级。

2.6 统计学分析 试验数据采用SPSS统计软件10.0版进行处理，实验数据以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用q检验，等级资料用Radit分析。

3 结果

3.1 对慢性肾功能衰竭大鼠体重的影响 进食腺嘌呤期间，大鼠体重增长较慢，体毛欠光泽，不顺滑，脱毛，精神不振，尿量增多。改为正常鼠料饲养后，大鼠体重增长加快。给药前，模型组和各给药组与正常对照组比较体重差异具有统计学意义（P＜0.01），模型组和各给药组之间体重差异不具有统计学意义（P＞0.05）；给药后，各给药组与模型组比较，体重差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见表1。

表1 益肾化浊颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠体重的影响（n＝12，单位：g）

表2 益肾化浊颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠饮水量的影响（n＝12，单位：mL／100g体重）

表3 益肾化浊颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠血清生化学指标的影响（n＝12）

3.2 对慢性肾功能衰竭大鼠饮水量的影响 给药前，各模型组饮水量比正常对照组增多，差异显著，给药第2周，小剂量组饮水量减少，与正常对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），给药第3周，各给药组饮水量均少于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结果见表2。

3.3 对慢性肾功能衰竭大鼠血清Bun和Crea的影响益肾化浊颗粒各剂量组大鼠血清中Bun和Crea值均显著低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），并显著低于给药前大鼠血清中Bun和Crea值。结果见表3。

3.4 对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏脏器指数的影响与模型对照组大鼠比较，各给药组大鼠的肾脏脏器系数差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结果见表4。

表4 益肾化浊颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏的影响（n＝12）

3.5 对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏的影响 （肾小管扩张分级评分和肾小球径长）饲喂0.75%腺嘌呤4周后，取16只大鼠进行尸解检查，正常对照组大鼠肾脏蚕豆状，色暗红，质软，切面皮质暗红，髓质浅红；造模组大鼠肾脏肿胀，色灰白，质硬，切面灰白。给药30 d，处死各组大鼠，空白对照组大鼠肾脏无明显变化，模型对照组大鼠肾脏未见明显恢复，各给药组大鼠肾脏表面均出现不同程度红、白相兼颗粒状纹理，切面可见药物结晶沉积；病理切片镜检观察到模型对照组大鼠肾脏有黄绿色结晶沉积，形成异物性肉芽肿，肾小管扩张，肾间质增生，出现蛋白管型。除空白对照组未见病理变化外，各给药组大鼠肾脏病变类型与模型对照组大鼠相同，但病变程度不同。与模型对照组比较，益肾化浊颗粒大剂量组大鼠肾小管扩张程度较轻（P＜0.05）。

4 讨论

CRF是指各种原因造成的慢性进行性肾实质损害，致使肾脏不能维持基本功能，从而呈现氮质血症、代谢紊乱和各系统受累等一系列临床症状的综合征［1］。腺嘌呤在体内可导致肾单位大量丧失并造成肾功能衰竭，其特征与人类肾功能衰竭相似［3-5］，故本研究采用0.75%腺嘌呤饲喂法复制大鼠慢性肾衰模型。

CRF属于中医“水肿”“癃闭”“关格”等范畴，在CRF早、中期阶段运用中医药综合疗法治疗，可改善肾功能，有效地延缓CRF病程进展［6-8］。中医肾病专家时振声教授认为［9-12］，肾主水，肾脏气阴两虚，气化不行，体内水湿不能及时排出，而致血行不畅，出现瘀血、湿阻、水停等病理产物蕴积，加之阴虚燥热，进而化生热毒、湿毒、瘀毒、浊毒等毒邪，毒邪久而入络，损伤肾脏。现代研究也发现，气阴两虚为CRF重要证型，CRF后期又有瘀血因素等实邪存在，实邪又可加重CRF进展，正虚邪实兼夹出现是CRF临床特征［13-15］。结合时振声教授临床经验和现代中医药研究成果，确立了益气养阴、活血化浊治法，以及益肾化浊颗粒组方。其组方为：太子参、黄芪、生地黄、山药、山茱萸、茯苓、泽泻、丹参、大黄、砂仁。方中太子参补益肺脾之气，兼以生津养阴为君药；黄芪补脾肺之气，生地黄养阴生津，二者辅助太子参为臣药；山药益气养阴，山茱萸补益肝肾，茯苓配山药健脾利水渗湿浊，泽泻配生地黄泄热利水渗湿浊，丹参养血活血祛瘀，大黄活血祛瘀，清泄湿热，砂仁醒脾和胃，防养阴药滋腻碍胃，且行气化湿浊，诸药合用，益气养阴、活血化浊，驱邪兼以扶正，驱邪不伤正，补虚不留邪。

血尿素氮、肌肝能够反映慢性肾衰进展，是慢性肾功能衰竭分期的重要依据之一，也是考察肾小球滤过功能的临床常用指标［16-18］，与肾动脉内径、叶间动脉收缩期最大血流速度、舒张末期最低血流速度呈负相关，与阻力指数正相关［19］，相当于中医所指的湿浊瘀毒。益肾化浊颗粒有利于肾小球滤出血中Bun和Crea，具有保护肾小球滤过率（GFR）的作用。

与模型对照组比较，益肾化浊颗粒可以改善因饲喂0.75%腺嘌呤饲料所引起的大鼠营养不良，使其体重增长速度加快，一般状态和精神状况改善。由于肾小管功能病变引起的动物饮水量较多的状况，给药组动物也有所改善，饮水量较少。

综上所述，益肾化浊颗粒具有保护肾脏肾小管和肾小球的药理作用，能够减缓慢性肾功能衰竭引起的肾脏实质性病变恶化过程，降低血中Bun和Crea的含量，改善慢性肾功能衰竭引起的氮质血症，具有益气养阴、活血化浊之效。

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（2013-05-21收稿）

Effects of Yishenhuazhuo granules on Bun and Crea in Serum of Adenine Feeding Method Induced Chronic Renal Failure Rats

Liu Xuewen1，Yang Weibin2，Jing Zhiwei2
（1 Department of Chinese Medicine，Luhe Teaching Hospital of the Capital Medical University，Beijing 101100，China；2 China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China）

Objective：To investigate the effect and mechanism of Yishenhuazhuo granules on Adenine feedingmethod induced chronic renal failure Rats.Methods：The ratswere fed with 0.75%adenine tomake themodels of chronic renal failure，then they were randomly divided into six groups，including blank control group，model control group，Niaoduqing granules control group and Yishenhuazhuo granuleswith large，medium and small dosage groups.After administered continuously for 30 days，kidney index were calculated，Bun and Crea content in serum were determined by using ELISAmethod，and renal pathological changeswere observed by using HE staining.Results：Compared withmodel controlgroup of drug-treated rats，kidney index differenceswere not statistically significant，serum Bun and Crea were significantly reduced in each administration group，and tubular dilatation in Yishenhuazhuo granules large dosage group was slight（P＜0.05）.Conclusion：Yishenhuazhuo granules could reduce Bun and Crea content in serum in Adenine feeding method induced chronic renal failure rats，and improve renal pathological changes.

Yishenhuazhuo granules；Chronic renal failure；Blood urea nitrogen；Creatinine

10.3969／j.issn.1673-7202.2013.12.030慢性肾功能衰竭（Chronic Renal Failure，CRF）是指各种慢性肾脏疾病所致进行性肾功能损耗所出现的一系列症状或代谢紊乱组成的临床综合征，我国每年每百万人口中约有300人死于本病［1］。益气养阴、活血化浊是中医治疗该病的主要治法之一。我们在本实验以0.75%腺嘌呤饲喂法致大鼠慢性肾衰为动物模型，观察益肾化浊颗粒对其治疗作用，探讨其作用机制。

刘学文，医学博士，博士后，主治医师，主要从事中医老年病防治研究，E-mail：tjtcmliu＠126.com

荆志伟，中国中医科学院副研究员，主要从事中医内科研究，E-mail：drjzw＠163.com