奥沙利铂静脉输液处方工艺优化及其稳定性考察

2013-05-22苏晨霞李健和易利丹彭六保湖南新化县孟公镇中心卫生院湖南娄底417605中南大学湘雅二医院药学部长沙410011

中国药房 2013年13期

苏晨霞，李健和，易利丹，彭六保（1.湖南新化县孟公镇中心卫生院，湖南娄底 417605；.中南大学湘雅二医院药学部，长沙 410011）

1 材料

Waters 2010高效液相色谱仪及486紫外检测器（美国Waters公司）；AE200电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo仪器上海有限公司）；pHS-3C型酸度计（上海雷磁仪器厂）；STY-2渗透压摩尔浓度检测仪（北京汉柏科创仪器技术开发公司）。

奥沙利铂原料药及其对照品（长沙华美医药科技开发有限公司，原料药批号:20110113，纯度:99.7%；对照品批号:20110127，纯度:99.9%）；葡萄糖（潍坊盛泰药业有限公司，批号:20110112，纯度:99.8%）；甘露醇（广西南宁化学制药有限责任公司，批号:20110210，纯度:99.90%）；活性炭（溧阳竹溪活性炭有限公司，批号:20110915）；奥沙利铂静脉输液（中南大学湘雅二医院药学部，批号:20110315、20110327、20110328、20110329）；甲醇为色谱纯，盐酸、氢氧化钠、高碘酸钠、硫酸、硫代硫酸钠等试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 处方工艺优化

在参考相关文献和专利[6-7]的基础上，考虑到静脉输液常用的等渗调节剂为葡萄糖、氯化钠、甘露醇等，而奥沙利铂和氯化物包括各种浓度的氯化钠有配伍禁忌，故不采用氯化钠。在确定奥沙利铂静脉输液规格为100 ml∶100 mg的基础上进行如下处方与工艺的优化。

处方1:奥沙利铂1.0 g，葡萄糖50 g，5%草酸溶液适量分别调节药液pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未调整，注射用水加至1000 ml。工艺1:将50 g葡萄糖投入煮沸的约100 ml注射用水中，不断搅拌使溶解后，加入相当于浓溶液0.1%的活性炭即0.1 g，煮沸15 min后，抽滤脱炭。另将奥沙利铂1.0 g加入40℃约500 ml注射用水中，不断搅拌使溶解后，将上述溶液过葡萄糖溶液的炭层，混匀后，补加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液适量分别调节药液pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未调整，再补加注射用水至1000 ml。测pH值和含量，合格后，精滤，灌封，116℃热压灭菌40 min，即可。

处方2:奥沙利铂1.0 g，以甘露醇51 g代替处方1中的葡萄糖，其余同处方1。工艺2:取甘露醇51 g，加入70～80℃约600 ml的注射用水中，不断搅拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.3 g，搅拌，静置15 min后，抽滤脱炭。取奥沙利铂1.0 g加入40℃约300 ml注射用水中，不断搅拌使溶解后，将上述溶液过甘露醇溶液的炭层，混匀后，补加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液适量分别调节pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未调整，再补加注射用水至1000 ml。测pH值和含量，合格后，精滤，灌封，116℃热压灭菌40 min，即可。

处方3:奥沙利铂3.0 g，甘露醇153 g，5%草酸溶液适量调节药液pH值至4.0，注射用水加至3000 ml。工艺2:取甘露醇153 g，加入70～80℃约1800 ml的注射用水中，不断搅拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.9 g，搅拌，静置15 min后，抽滤脱炭。取奥沙利铂3.0 g加入40℃约1200 ml注射用水中，不断搅拌使溶解后，将上述溶液过甘露醇溶液的炭层，混匀后，补加注射用水至2850 ml，用5%草酸溶液适量调节pH值至4.0，再补加注射用水至3000 ml。测pH值和含量，合格后，精滤，灌封，样品等分成3份，然后分别在116℃热压灭菌40 min、121℃热压灭菌15 min、121℃热压灭菌30 min，即可。

2.2 质量考察

2.2.1 pH值。按2010年版《中国药典》（二部）附录ⅥH pH值测定法测定。

上述文献为解决双边匹配问题提供了理论基础和方法支撑，但还存在以下缺陷：①现有文献缺乏对具有多种形式偏好信息的双边匹配问题的研究。由于匹配主体的知识结构、个体偏好和行为习惯等方面的差异，在双边匹配中不同的匹配主体会给出不同形式的偏好信息，例如，主体给出的偏好信息是评价得分和语言短语等形式并存的情形；②现有考虑主体期望的双边匹配文献中期望类型单一，缺乏对含有多种类型主体期望的讨论。

2.2.2 渗透压。按2010年版《中国药典》（二部）附录ⅨG渗透压摩尔浓度测定法测定。

2.2.3 有关物质。取本品，作为供试品溶液；精密量取1 ml，置于100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，量取对照溶液20 μl，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰峰高为满量程的20%～25%；再取供试品溶液20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液如显杂质峰，量取各杂质峰面积之和，不得大于对照溶液的主峰峰面积（1.0%）。

2.2.4 热原。取本品，按2010年版《中国药典》（二部）附录ⅪD检查，剂量按家兔体质量每1 kg注射10 ml，应符合规定。

2.2.5 无菌。取本品，按2010年版《中国药典》（二部）附录ⅪH检查，应符合规定。

2.2.6 含量测定。①奥沙利铂:按2010年版《中国药典》（二部）附录ⅤD，采用高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验:色谱柱为Polaris C18-A（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（10∶90，V/V），流速为0.8 ml/min；检测波长为249 nm；进样量为20µl；柱温为25℃。理论板数按奥沙利铂峰计不低于 2000。测定法:精密量取本品5 ml，置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取经105℃干燥至恒质量的奥沙利铂对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1 ml中含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取上述2种溶液各10µl，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，即得。②葡萄糖:精密量取本品2.0 ml，置于250 ml碘量瓶中，精密加入碘液（0.1 mol/L）25 ml，缓缓滴加1 mol/L氢氧化钠溶液4 ml，摇匀，在暗处放置15 min后加稀硫酸溶液4 ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）滴定，近终点时加淀粉指示液1 ml，继续滴定至蓝色消失，并同时将滴定的结果用空白试验校正。每1 ml的硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）相当于9.909 mg的C6H12O6·H2O。③甘露醇:精密量取本品3 ml，置于200 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10 ml，置碘量瓶中，精密加入高碘酸钠溶液[取硫酸溶液（1→20）90 ml与高碘酸钠溶液（2.3→1000）110 ml混合制成]50 ml，置水浴上加热15 min，放冷，加碘化钾试液10 ml，密塞，放置5 min，用硫代硫酸钠滴定液（0.05 mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液1 ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1 ml硫代硫酸钠滴定液（0.05 mol/L）相当于0.9109 mg的C6H14O6。

2.3 稳定性考察

2.3.1 影响因素试验。取批号20110315的奥沙利铂静脉输液置高温[（40±2）、（60±2）℃]，低温0～5℃以及光照（4500±500）lx条件下，于第0、5、10天取样，考察性状、pH值、溶液颜色、有关物质、可见异物及含量，并与0 d的数据进行比较分析。

2.3.2 加速试验。取模拟上市包装的奥沙利铂静脉输液3批，在温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%的条件下，于第0、1、2、3、6个月取样，考察性状、pH值、溶液颜色、有关物质、可见异物及含量，并与0个月的数据进行比较分析。

2.3.3 长期试验。取模拟上市包装的奥沙利铂静脉输液3批，在温度（25±2）℃、相对湿度（60±10）%的条件下，于第0、3、6、9、12个月取样，考察性状、pH值、溶液颜色、有关物质、可见异物及含量，并与0个月的数据进行比较分析。12个月后仍须继续考察，以便确定药品的有效期。

3 结果

3.1 处方工艺优化的考察

各处方工艺优化的考察结果分别见表1、表2、表3。

表1 以葡萄糖为等渗调节剂的样品质量考察结果Tab 1 Results of quality inspection of samples with glucose as the isotonic regulator

表2 以甘露醇为等渗调节剂的样品质量考察结果Tab 2 Results of quality inspection of samples with mannitol as the isotonic regulator

由表1可见，以葡萄糖调节等渗的奥沙利铂静脉输液在同一灭菌条件不同pH值范围内，药液灭菌前后性状、pH值、可见异物、渗透压等基本上无明显变化；灭菌前有关物质检查均符合规定，但灭菌后所有药液有关物质含量均在1%以上；灭菌后奥沙利铂含量较灭菌前有所降低。故以葡萄糖调节奥沙利铂静脉输液渗透压的系列处方均不符合规定，应予淘汰。

由表2可见，以甘露醇调节等渗的奥沙利铂静脉输液在同一灭菌条件不同pH值范围内，除pH值未用5%草酸溶液调节的药液pH值下降幅度较大，以及pH 2.5条件下灭菌前后有关物质含量超过2%且灭菌后奥沙利铂含量较灭菌前下降外，其余进行了pH值调节的药液在不同pH值范围内灭菌前后各项检查均符合规定。表明以甘露醇调节等渗的奥沙利铂静脉输液稳定性良好，灭菌前后的渗透压在人体正常的生理范围（280～310 mOsmol/kg）内。在此基础上，并参考国外专利[6]的报道结果，确定本研制开发的奥沙利铂静脉输液以甘露醇为等渗调节剂，pH值范围为3.0～4.5，生产中一般控制pH值在4.0左右。

表3 同一pH值不同灭菌条件下的样品质量考察结果Tab 3 Results of quality inspection of samples with same pH value under different sterilization conditions

由表3可见，在同一pH值不同灭菌条件下奥沙利铂静脉输液灭菌前后各项考察指标均无明显变化，并且各项检查均符合规定。考虑到国内外输液制剂中的灭菌条件多采用116℃热压灭菌40 min，故确定本研究开发的奥沙利铂静脉输液的灭菌条件也为116℃热压灭菌40 min。

3.2 最佳处方工艺确定

综上所述，得奥沙利铂静脉输液的最佳处方为:奥沙利铂1.0 g，甘露醇51 g，5%草酸溶液适量调节药液pH值至3.0～4.5（生产中一般控制pH值在4.0左右），注射用水加至1000 ml。最佳工艺为:取甘露醇51 g，加入70～80℃注射用水约600 ml中，不断搅拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.3 g，搅拌，静置15 min后，抽滤脱炭；另将奥沙利铂1.0 g加入40℃约300 ml注射用水中，不断搅拌使溶解后，将上述溶液过甘露醇溶液的炭层，混匀后，补加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液适量调pH值至3.0～4.5（生产中一般控制pH值在4.0左右），补加注射用水至1000 ml，混匀。测pH值和含量，合格后，精滤，灌封于100 ml玻璃瓶中，116℃热压灭菌40 min，即得。

3.3 稳定性考察

影响因素试验中除在光照、高温（60±2）℃条件下pH值略有升高、有关物质有所增加，以及高温（60±2）℃条件下颜色略有加深外，其他各项考察指标均无明显变化。pH值、有关物质及含量的测定结果见表4。

加速试验中除有关物质有呈上升的趋势，但仍在＜1.0%的合格范围内外，其他各项考察指标基本无明显变化；加速试验6个月无菌和热原检查仍合格。pH值、有关物质及含量的测定结果见表5，表明本品在本加速试验条件下放置6个月较为稳定。

表4 影响因素试验考察结果Tab 4 Results of influencing factor tests

表5 加速试验和长期试验考察结果Tab 5 Results of accelerated test and long-term test

长期试验12个月后，各项考察指标与0个月比较均基本上无变化，且无菌和热原检查仍合格。pH值、有关物质及含量的测定结果见表5，表明本品在长期试验条件下放置12个月较为稳定。有效期暂定为12个月，贮存条件为:遮光、密闭保存。

4 讨论

国外专利[6]报道规格为20 ml∶100 mg的奥沙利铂注射液的研究结果如下:（1）奥沙利铂注射液的浓度范围为1～7 mg/ml，较好浓度范围为1～5 mg/ml，最佳浓度范围为2～5 mg/ml。（2）奥沙利铂注射液在一般常用的枸橼酸、醋酸、甘氨酸和磷酸等缓冲溶液中不稳定，pH值调节剂一般采用草酸、草酸钠或二者的混合溶液，且以草酸为最佳。在药液中草酸的浓度范围一般为5×10－5～ 1×10－2mol/L，较好的浓度范围为5×10－5～2×10－3mol/L，最佳浓度范围为2×10－4～ 4×10－4mol/L。（3）奥沙利铂注射液pH值范围一般为2～6，较好范围为2～5，最佳范围为3.0～4.5。（4）溶解奥沙利铂的最佳温度为40 ℃。（5）奥沙利铂注射液制备过程中，灌封的容器中充或不充惰性气体如氮气对其质量无影响。（6）奥沙利铂注射液在充或不充氮气的条件下于121℃分别热压灭菌15、30、45、120 min对其质量无影响。（7）溶媒一般采用注射用水、糖溶液（如葡萄糖、甘露醇等）。本研究所得结果与上述专利报道的结果有相似之处，进一步证明本处方及工艺合理、可行。

处方中奥沙利铂为主药；甘露醇为等渗调节剂，调节输液的渗透压至人体正常的生理范围；草酸为pH值调节剂，调节输液的pH值至3.0～4.5，达最佳pH值范围；注射用水作为溶媒；活性炭起吸附热原、助滤脱色的作用。

在参考相关文献[8-11]的基础上，采用高效液相色谱法测定奥沙利铂的有关物质及含量。奥沙利铂为手性药物，具有旋光性，故质量考察中不能采用旋光法测定葡萄糖的含量，而是采用碘量法测定葡萄糖含量。

奥沙利铂水溶液放置时间过长，会不同程度地产生3种降解产物，使其制剂的毒副作用增加。故研制开发一种不产生上述降解产物、稳定性良好且方便临床应用的奥沙利铂静脉输液是十分必要的。

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