耳背静脉放血治疗扁平疣及对外周血T淋巴细胞亚群的影响

孙文倩　曹碧兰　颜廷凯　曾霓　陶锐　陈晓红　曾令芬　方宁

[摘要]目的：观察耳背静脉放血治疗扁平疣的临床疗效及检测其对外周血T细胞亚群的影响。方法：应用耳背静脉放血治疗扁平疣患者35例，双侧耳背每周放血1次，疗程15周。观察疗效并于治疗前后抽取患者的静脉血，采用流式细胞仪检测患者外周血T淋巴细胞亚群。结果：完成随访的33例患者总有效率为84.85%。患者在治疗前CD4+和CD4+/CD8+比值明显低于正常对照组（P<0.05，P<0.01）；治疗后均显著升高（P<0.01），与正常对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：耳背静脉放血治疗扁平疣有较好的临床疗效，可调节患者外周血T淋巴细胞亚群水平，提高患者的细胞免疫功能，导致疣体脱落。

[关键词]扁平疣；耳背静脉放血；T淋巴细胞亚群；流式细胞仪

[中图分类号]R752.5+2 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）09-0950-03

扁平疣是由人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染引起的表皮良性赘生物，常侵犯青少年的颜面、手背及前臂，其发生、发展和消退与机体的免疫功能状态密切相关，尤其是细胞免疫。治疗上主要有物理治疗（如激光、冷冻等），抗病毒治疗及免疫疗法（主动免疫及被动免疫）等。耳穴治疗扁平疣在我国已有多年历史，且疗效确切，总有效率为70%～100%，平均为91%，但既往的研究主要局限于临床疗效观察[1]。为探讨耳穴疗法治疗扁平疣的免疫机制，本研究应用耳穴疗法中常用的耳背静脉放血法治疗扁平疣，并观察临床疗效和检测其治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的水平，从免疫学的角度了解耳背静脉放血对扁平疣患者免疫状态的影响。

1 资料和方法

1.1一般资料：实验组为2011年9月～2012年6月在遵义医学院附属医院皮肤科门诊就诊的扁平疣患者35例，均符合扁平疣的临床诊断标准[2]，完成耳背静脉放血治疗患者33例，失访2例。在完成随访的病例中，男性12例，女性21例，年龄9～47岁，平均（21.97±7.54）岁，病程2月～7年，平均（2.09±1.75）年；患者皮损主要发生于面部和手背，少部分为颈部和前臂。入选患者3个月内未接受过干扰素、胸腺肽及IL-2等抗病毒及免疫调节剂治疗，且2月内均无突然增多、发红、发痒等症状；不伴有自身免疫性疾病、严重的系统性疾病和其他病毒感染性疾病。正常对照组15例，均为健康志愿者，其中男性6例，女性9例，平均年龄（26.28±4.25）岁。两组性别和年龄方面无明显差异；所有患者及对照组成员均知情同意。

1.2 耳背静脉放血治疗方法：患者取坐位，选患者耳背上1/3近耳轮处明显静脉1支，揉搓使其充血，75%酒精消毒后用左手拇指、食指将耳背拉平，中指顶于下，右手持消毒刀片，迅速刺破血管，挤压出血约10滴，血止后，再以1cm×1.5cm大小的两层消毒纱布敷于伤口上，并用胶布固定。双侧耳背每周放血1次，疗程15周，治疗过程中若疣体脱落即停止治疗。

1.3 疗效判定标准：痊愈：皮损全部消退，无新出皮疹；显效：皮损消退>70%；有效：皮损消退在3O%～7O%或有个别新出皮疹；无效：皮损无变化或消退不足30%。总有效率=（痊愈例数+显效例数+有效例数）/总例数×100%。

1.4 样本采集：无菌条件下分别采集患者治疗前、治疗后及正常对照组EDTA抗凝静脉血2ml立即送检。

1.5 试验方法

1.5.1 仪器与试剂：FACSCalibur流式细胞仪（美国BD公司）。主要试剂：外周血CD4-FITC/CD8-PE/ CD3-PerCP三色抗体、FACS Lysing Solution红细胞裂解液（均来自美国BD公司）。

1.5.2 实验操作：样品测定管中加入荧光抗体CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP20μl，抗凝血50μl混匀，避光静置20min，再加入红细胞裂解液200μl充分混匀，避光静置15min后使用流式细胞仪进行检测。激光室工作波长488nm，FITC受激发后发绿色荧光，PE受激发后发橙色荧光，PerCP受激发后发深红色荧光，每份样品检测20 000个细胞。测定结果采用MultiSET功能软件分析。

1.6 统计学处理：采用SPSS17.0统计软件对所得数据进行治疗前后配对t检验，组间比较采用成组t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。数据采用 x±s表示。

2 结果

2.1 临床疗效：33例患者治疗后痊愈20例（60.61%）；显效5例（15.15%）；有效3例（9.09%）；无效5例（15.15%）；总有效率为84.85%。其中治愈患者中有18例在治疗4～8周后局部皮疹突然增大、发红、发痒或出现新发皮疹（起效标志），继续治疗2～3周后疣体脱落痊愈；2例患者皮疹消退无上述反应过程，仅表现为原有皮疹逐渐变平至完全消退。治疗过程中除有轻微疼痛外，疗程结束后所有患者的耳背静脉放血部位均未出现瘢痕和感染等任何不良反应。

2.2 对外周血T淋巴细胞亚群的影响 患者在治疗前CD4+和CD4+/CD8+比值明显低于正常对照组（t=2.23，P<0.05；t=3.00，P<0.01）；而CD8+明显高于正常对照组（t=2.66，P<0.05）；治疗后与正常对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。治疗前与治疗后各指标比较，差异均有统计学意义（P<0.01），详见表1。

3 讨论

扁平疣是一种病毒感染性皮肤病。虽然本病有自愈倾向，但因主要发生于青少年的面部、手背及前臂等暴露部位，严重影响美观和身心健康，因此患者的治疗愿望仍十分迫切。从本文临床就诊情况看以年轻女性患者居多，这可能是女性追求美的积极性高于男性所致，然而目前并没有证据表明扁平疣的发病与性别有关。

本研究结果显示耳背静脉放血治疗扁平疣的总有效率为84.85%；治疗前其CD4+和CD4+/CD8+比值降低，而CD8+明显升高；提示机体存在免疫平衡紊乱。治疗后患者的CD4+细胞、CD4+/CD8+比值较治疗前显著升高，CD8+细胞水平显著下降，与正常对照组比较，差异无统计学意义。提示耳背静脉放血可以调节扁平疣患者外周血T淋巴细胞亚群水平，恢复机体的免疫平衡，增强机体的抗病毒能力，最终导致疣体脱落。本结果与以往的文献报道相似[1，3-5]。

中医认为扁平疣主要是人体感受潮湿毒邪，内动肝火所致，其发生发展与内在的脏腑功能及免疫、内分泌、神经等功能的失调密切相关[1，6]。耳廓上各耳穴与脏腑躯体的联系是多途径的，如耳穴针刺治疗主要是通过神经体液综合调节来激发机体内非特异性防御反应，调动体内各种免疫因素，提高抗御病邪的能力[7]。皮肤作为一个内分泌组织，具有神经内分泌的功能与其他系统互相影响共同维持机体的内环境稳定。近年来神经一内分泌一免疫（Neuro-endocrine-immunity Net work，NEI）网络的提出和研究[8]拉近了中医与现代医学的距离；随着分子生物学的发展，已逐步认为NEI网络是生物体内的精密、完整而且复杂的调节体系，正如针灸它本身并不提供任何外源性物质，却能通过NEI网络，调节下丘脑一垂体一性腺（HPA）轴，产生一系列生理生化改变来维持机体内环境稳定，恢复机体的内分泌、免疫等功能而达到治疗疾病的目的，在病理情况下发挥其双向调节作用[8-9]。

针对临床疗效的差异性，可能与多种因素有关，如宿主的主要组织相容性复合体（MHC）的多态性、患者感染HPV的类型和数量，以及患者的年龄、病程等，因此临床呈现出个体之间不同的治疗效果。但耳背静脉放血治疗扁平疣总体疗效满意，方法简单且不良反应小，患者容易接受，值得临床推广。

[参考文献]

[1]董勤.耳穴疗法治疗扁平疣的取穴思路与疗效评价[J].新中医，2008，40（1）：104-106.

[2]赵辨.中国临床皮肤病学[M].南京：江苏科学技术出版，2010：0413-0417.

[3]黄红革.扁平疣患者穿刺置疣术治疗前后外周血T淋巴细胞亚群和IL-2检测的临床意义[J].放射免疫学志，2007，2O（5）：438-439.

[4]仇萌，邹先彪.黄芪注射液治疗扁平疣疗效观察及对外周血T淋巴细胞亚群和白细胞介素-2的影响[J]. 中国中医药信息杂志，2010，17（8）：7-8.

[5]曹碧兰，郭瑞珍，肖庆邦，等.自体疣植入治疗扁平疣及其相关机制研究[J].中华皮肤科杂志，2004，37（9）：525-527.

[6]董勤.耳穴疗法治疗扁平疣的作用特点探析[J].上海针灸杂志，2008，27（5）：44-45.

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[8]付义，陈冰.神经-内分泌-免疫（NEI）网络研究促进中西医交融[J].中华中医药刊，2008，26（4）：821-822.

[9]王春雷，吴金鹏，王军.筋膜学说解读中医经络实质及针灸作用机制[J].中国中医基础医学杂志，2008，14（4）：312-314

[收稿日期]2013-03-22 [修回日期]2013-04-24

编辑/张惠娟