结直肠腺癌中MCM7与p27表达相关性的临床研究

张明明等

【摘要】 目的 检测结直肠腺癌组织细胞中MCM7、p27蛋白的表达的差异性与临床表现的相关性，以探讨其对肿瘤发生发展过程中的调控意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测50例结直肠腺癌组织中MCM7、p27蛋白的表达，并对比其与临床表现的相关性。结果 MCM7和p27蛋白在结直肠腺癌的发生、发展及其临床表现中分别存在不同的调控方向，MCM7的高表达与P27的低表达与肿瘤的分期及其愈合有直接的相关性。在P27蛋白表达阴性的实验病例而MCM7阳性者共11例。P27蛋白表达阳性而MCM7表达阴性的实验病例共29例。经统计学处理，在结直肠腺癌中MCM7蛋白的阳性表达p27的表达呈负相关（r=-0.4911P<0.01），分化程度越高，MCM7与P27的表达负相关性越大（P<0.05）。结论 结肠腺癌细胞的不同分级往往决定其不同的生物学特性，并对其预后起关键作用。相关研究发现细胞复制准许因子MCM7蛋白、细胞周期检测点负调控因子P27蛋白的低表达可能与其癌细胞的分化、侵袭性相关，其中MCM7与P27的负相关性的越大，则其预后越差，其联合检测并行对比可能会为我们提供一种新的判断病人预后的参考指标。

【关键词】 结直肠腺癌；MCM7；P27；相关性；免疫组织

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.050 文章编号：1004-7484（2013）-09-4831-02

在结直肠腺癌中，癌细胞的失控性增殖是其发生、侵袭、转移、扩散的基本特征表现，其往往和细胞周期中的调控失控有关。近些年，随着分子生物学技术的不断进步，人们发现微小染色体维持蛋白[minichromosome maintenance（MCM）proteins]基因其编码的MCM蛋白家族在DNA起始复制过程中起着密切相关的作用，其表达的蛋白质家族共同构成DNA的复制许可因子，启动DNA的复制。它主要是通过DNA复制完成从染色体的脱离，以确保在每个周期中染色体仅复制一次，保证细胞复制的精确性及其准确性[1]。P27作为细胞增殖的负调控因子，其表达失常可导致细胞增殖异常。因而对于不同分级的结直肠腺癌我们采用免疫组化技术检测其中MCM7、P27蛋白的表达情况，对比起表达的相关性及临床意义，以探讨其相关性与不同分级结直肠腺癌生物特性、预后的临床意义。

1 材料与方法

1.1 病例来源 随机选取40例柳州市人民医院胃肠外科2000年1月——2012年12月手术切除的结直肠腺癌病例材料，结直肠腺癌的病理诊断、分级和TNM分型按2010年NCCN结直肠腺癌组织学分类标准进行。其中：高分化腺癌7例，中分化腺癌20例，低分化腺癌13例。年齡范围：36-79岁。按NCCN2010结肠癌TNM分期标准分为Ⅰ期14病例；Ⅱ期10例，Ⅲ期13例，Ⅳ3例。标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，常规切片。

1.2 方法 ①免疫组织化学检测：SP法，单克隆抗体MCM7（47DC141）和p27（DCS-72.F6）分别购自NeoMarkers公司和福州迈新生物技术公司，SP试剂盒（Kit-9710）购自福州迈新生物公司。免疫组化染色操作步骤按文献进行[2]。②结果判断：MCM7和p27蛋白的表达主要存在于细胞核，我们通过检测细胞核出现棕黄色颗粒为阳性标志，MCM7、p27染色的判断参照Bukhlm等[3]提出的标准。对于结果的判断通过计数500个以上的肿瘤细胞，分为三个等级，阳性细胞数（细胞核内出现棕黄色颗粒）<10%为（-），10-30%为（+），30-70%为（++），>70%为（+++）。阳性对照以已知人乳腺癌MCM7和p27阳性切片。

1.3 统计学处理 应用SPSS10.0统计学软件对所得数据行x2检验、秩和检验和Spearman等级相关分析，以P<0.05为显著性检验水准。

2 结果

2.1 结直肠腺癌不同病理分级中MCM7、P27的表达关系 结直肠腺癌不同病理分级组中MCM7与P27表达的相互关系见表1，在P27蛋白表达阴性的实验病例而MCM7阳性者共11例。P27蛋白表达阳性而MCM7表达阴性的实验病例共29例。经统计学处理，在结直肠腺癌中MCM7蛋白的阳性表达p27的表达呈负相关（r=-0.4911P<0.01）。

MCM7、P27的表达与结肠腺癌病理特征的关系见表1。经统计学处理，结直肠腺癌组中MCM7、P27蛋白表达存在负相关性（r=-0.4911P<0.01），并且其负相关性的大小与组织学分级明显相关，高分化组显著低于中分化组和低分化组（P<0.05，P<0.05）。淋巴结转移组中显著高于无淋巴结转移组（P<0.05）；与患者年龄、性别、肿瘤大小不明显相关性（P>0.05），见表2。

3 讨论

近来的科学研究发现，在正常的细胞增殖周期中，细胞核DNA的复制往往起源于特定的起点，其在一个细胞周期中起着十分重要的作用，其通过合成相应的表达因子，调控不同的细胞增殖方向。其中MCM蛋白家族与此复制起始点有规律的结合与释放从而调控DNA的不同复制。激活的MCM4/6/7结合cdc45后具有DNA解链酶活性，并可促进DNA聚合酶（polα）、PRA（replication protein A）、Dpbll 蛋白与复制起点结合，启动DNA的复制[3]，复制起始后MCM蛋白有选择性的破环，严格限制并确保基因组在每一个细胞周期仅复制一次[4]，可见，MCM蛋白家族的表达在细胞增殖的过程中起着非常重要作用，但肿瘤细胞的表达中，我们通过实验可以发现，MCM蛋白存在明显的异常表达，而MCM蛋白的异常表达可导致细胞的复制起始位点重复复制。而p27蛋白的表达下降往往，则可使DNA损伤的异常变异细胞无法完成正常的细胞增殖周期，如果同时存在MCM7蛋白高表达、p27蛋白的低表达的状态下，异常细胞可在S、G2、M期等处直接启动重复复制，同时避开细胞凋亡、DNA修复等正常的细胞调控，从而产生多倍体的形成，进一步形成恶性肿瘤细胞。本组研究实验证实了以上表述，我们知道分级越高的肿瘤细胞往往侵袭性、复制能力往往较差，而分化较差、细胞分级较低的肿瘤细胞往往复发率、侵袭性往往较差，而MCM7、P27的表达情况与此完全相符。并且MCM7与p27的表达呈显著性负相关，我们推断MCM7和p27蛋白在肿瘤细胞发生、发展过程中分别调控不同的肿瘤的不同分化方向，对其联合检测可能会为我们提供一种新的独立于病理分期的评价肿瘤细胞生物学特性的新的客观生物学指标。

参考文献

[1] Semple JW，Duncker BP.ORC-associated replication factor as biomarker for cancer[J].Biotechnol Adv，2004，22（8）：621-631.

[2] Lugrou L，Nurs P，cell cycle：License with held-Geminin Blocks DNA Replication[J].J Cell Sci，2000，290（5500）：2271-2273.

[3] Gonzalez.MA，Pinder SE，Callasy G，et al.Minichromosome maintenance protein 2 is a，strong independent prognostic marker in breast cancer[J].J Clin Oncol，2003，21（23）：4306-4313.

[4] Lei M，Tye BK.Initiating DNA synthesis：from recruiting to activating the MCM complex[J].J Cell Sci，2001，114（Pt8）：1447-1454.