合并糖尿病的急性冠脉综合征患者共刺激分子与炎症指标的研究

操 明, 吕彩霞, 董 璇, 严凤琴, 尚莎莎, 吴晓芬, 王 冠, 阮 磊, 全小庆,张存泰



合并糖尿病的急性冠脉综合征患者共刺激分子与炎症指标的研究

操 明, 吕彩霞, 董 璇, 严凤琴, 尚莎莎, 吴晓芬, 王 冠, 阮 磊, 全小庆,张存泰*

（华中科技大学同济医学院附属同济医院综合科, 武汉 430030）

探讨CD4+CD28nullT淋巴细胞及炎症因子C反应蛋白（CRP）在合并糖尿病的冠心病患者发病机制中的作用。51例经冠状动脉造影确认为急性冠脉综合征（ACS）的患者，根据1999年WHO标准分为2型糖尿病合并ACS组21例，单纯ACS组30例，对所有研究对象均通过流式细胞术测量外周血中CD4+CD28nullT淋巴细胞的数量，对比分析两组患者的临床资料和冠状动脉造影结果。与单纯ACS患者相比较，合并糖尿病的ACS患者外周血CD4+CD28nullT淋巴细胞的数量显著增多[（4.66±4.24）%（8.89±6.45）%，＜0.05]，CRP浓度无明显统计学差异[（1.97±1.05）（2.22±1.14）mg/L，＞0.05]，冠状动脉造影显示完全闭塞、弥漫病变比例较高（711，＜0.05；612，＜0.01 ）。糖尿病合并ACS患者冠状动脉病变累及范围广且程度重，共刺激分子可能与合并糖尿病的ACS患者的免疫调节异常有关。

糖尿病; 急性冠脉综合征; T淋巴细胞; 炎症

心血管疾病是糖尿病患者死亡的首要原因，糖尿病可显著增加冠状动脉硬化、心肌梗死、死亡的发生率，其病理机制与内皮功能紊乱、炎症和免疫反应改变有关[1,2]。CD4+CD28nullT淋巴细胞作为免疫系统功能退化的标志之一，与许多炎症反应性疾病相关[3]。国内外及我们课题组既往研究均证实CD4+CD28nullT淋巴细胞有促进冠心病动脉粥样硬化生成与斑块不稳定的作用[4,5]；此外，近年来亦有越来越多的研究表明糖尿病患者CD4+CD28nullT淋巴细胞较正常人群明显增多。免疫系统的激活和慢性炎症均参与了冠心病与2型糖尿病的发生与发展[6]。但是，目前尚无CD4+CD28nullT淋巴细胞在合并糖尿病的急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）患者中的相关研究。本研究以非糖尿病的ACS患者为对照组，观察合并糖尿病的ACS患者外周血中CD4+CD28nullT淋巴细胞的数量、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）浓度以及冠状动脉造影特点，为ACS合并糖尿病患者的二级预防提供预测依据。

1 对象与方法

1.1 对象

纳入2010年3月至2011年6月华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科收治的ACS合并2型糖尿病的患者21例作为病例组（合并糖尿病的ACS组），其中男16例，女5例；同时入选单纯ACS患者30例作为对照组（单纯ACS组），其中男20例，女10例。ACS患者均符合中华医学会心血管分会制定的急性心肌梗死和不稳定心绞痛的诊断标准；2型糖尿病均为确定有糖尿病病史并符合WHO1999年的糖尿病诊断标准。入选患者均排除：（1）合并严重感染、恶性肿瘤和免疫系统疾病；（2）既往有经皮冠状动脉介入或支架植入史；（3）正在服用抗炎药物或他汀类药物。

1.2 主要仪器和试剂

流式细胞仪（FACSCanto，美国Beckman Coulter）；酶标仪（美国Thermo Labsystem Multiskan MK3），单克隆抗体CD3-FITC、CD4-PerCP-Cy5.5、CD28-PE （美国eBioscience）；红细胞裂解液（谷歌生物公司），人CRP ELISA试剂盒（美国eBioscience）。

1.3 细胞分离和炎症指标的测定

收集外周静脉血10ml，3000r/min离心10min，留取上清血浆。采取密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，将分离的细胞加入1640培养基置于培养箱中孵育过夜去除单核细胞，取细胞悬液洗涤后，将其浓度调整为106个/ml。采用ELISA试剂盒检测血浆中CRP的浓度。

1.4 流式细胞术检测

取50ul上述细胞悬液加入FITC标记的CD3、PerCP-Cy5.5标记的CD4和PE标记的CD28流式抗体，置于6℃避光孵育20min后，用PBS洗涤细胞2次，再加入流式固定液重悬细胞，用流式细胞仪计数CD4+CD28nullT淋巴细胞占CD4+T细胞的比例。

1.5 统计学处理

2 结 果

2.1 一般临床资料

单纯ACS组与合并糖尿病的ACS组性别、年龄、吸烟史、血脂水平及左室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）差异均无统计学意义（表1）。

2.2 CD4+CD28null T淋巴细胞水平

与单纯ACS患者相比，合并糖尿病的ACS患者外周血CD4+CD28nullT淋巴细胞比例显著增多[（4.66±4.24）%（8.89±6.45）%，＜0.05；图1] 。

2.3 CRP水平及冠状动脉病变情况

与单纯ACS患者比较，合并糖尿病的ACS患者血浆CRP浓度差异无统计学意义；冠状动脉造影结果提示合并糖尿病的ACS患者冠状动脉弥漫性及闭塞性病变的比例均高于单纯ACS患者（分别＝0.033，＝0.007；表2）。

表1单纯ACS组和糖尿病合并ACS组患者之间临床资料的比较

Table 1 Comparison of clinical information between ACS and DM-ACS patients

注: ACS: 急性冠脉综合征; LDL-C: 低密度脂蛋白胆固醇; LVEF: 左室射血分数

图1 糖尿病合并ACS组外周血中CD4+CD28null T淋巴细胞的比例较单纯ACS组显著增高

Figure 1 The percentage of CD4+CD28nullT lymphocytes significantly increases in DM-ACS patients compared with that of the pure ACS patients

A: P2表示外周血中CD3+CD4+T淋巴细胞; B: Q4-1表示单纯ACS患者外周血中CD4+CD28nullT淋巴细胞占CD3+CD4+T淋巴细胞的比例; C: Q4-1表示合并糖尿病的ACS患者外周血中CD4+CD28nullT淋巴细胞占CD3+CD4+T淋巴细胞的比例; D: 统计分析。与单纯ACS组比较,*＜0.05

表2两组患者C反应蛋白浓度及冠状动脉造影结果比较

Table 2 Comparison of C-reactive protein and angiography results between ACS and DM-ACS patients

注: ACS: 急性冠脉综合征。与单纯ACS组比较,*＜0.05,**＜0.01

3 讨 论

CD4+CD28nullT淋巴细胞是一个具有特殊生物学效应的细胞亚型，具有自然杀伤细胞毒性，已报道其与许多免疫相关性疾病密切相关，包括冠心病和2型糖尿病。辅助性T细胞Th1和Th2通过分泌不同的细胞因子相互制约，维持机体免疫系统处于动态平衡。由于缺乏共刺激分子CD28，CD4+CD28nullT淋巴细胞主要表现为分泌Th1型细胞因子的功能特性，通过大量分泌干扰素（interferons，IFN）-γ及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α等，造成Th1与Th2细胞调节的不平衡，促成自身免疫疾病的发生与发展。2型糖尿病主要病理机制是胰岛素抵抗，IFN-γ及TNF-α可通过升高游离脂肪酸水平影响胰岛素信号转导通路蛋白，降低组织器官对胰岛素的敏感性，参与胰岛素抵抗的发生[7,8]。冠心病作为糖尿病主要的血管并发症，基本病理改变是动脉粥样硬化，已有研究发现CD4+CD28nullT淋巴细胞与急性冠状动脉病变密切相关，在ACS患者粥样硬化斑块局部及外周血中均发现该细胞数量显著增多[9]。CD4+CD28nullT淋巴细胞一方面通过分泌穿孔素和颗粒酶直接杀伤靶细胞，引起局部组织炎性病变；另一方面通过IFN-γ激活巨噬细胞，促进泡沫细胞形成，导致动脉粥样硬化的发生[10]。

与非糖尿病患者相比较，合并糖尿病的冠心病患者冠状动脉粥样硬化病变的程度更为严重，且有较严重的多支病变[11,12]，而且行PCI和冠状动脉旁路移植术术后疗效也明显差于非糖尿病患者，因而糖尿病冠心病患者一级和二级预防对改善患者预后具有重要的临床意义。本研究结果发现合并糖尿病的ACS患者较单纯ACS患者外周血中CD4+CD28nullT淋巴细胞显著增多，这表明CD4+CD28nullT淋巴细胞作为一个具有特殊生物学效应的细胞亚群，参与了冠心病合并糖尿病时异常T细胞免疫反应的病理过程，研究其生物学功能可为探讨糖尿病及其血管并发症的免疫病理机制提供新的思路，并为临床治疗与该疾病的一二级预防奠定理论基础。

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（编辑: 王雪萍）

Costimulatory molecules and inflammatory indicator in diabetes and non-diabetes acute coronary syndrome patients

CAO Ming, LYU Caixia, DONG Xuan, YAN Fengqin, SHANG Shasha, WU Xiaofen, WANG Guan, RUAN Lei, QUAN Xiaoqing, ZHANG Cuntai*

(Department of Integrated Medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China)

To determine the roles of the frequency of CD4+CD28nullT lymphocytes and the serum level of C-reactive protein (CRP) in diabetes and non-diabetes coronary patients.A total of 51 patients with acute coronary syndrome (ACS) in the Department of Cardiology from our hospital during March 2010 to June 2011 were enrolled in this study. They were further divided into diabetes (=21) and non-diabetes (=30) group, according to the diagnostic standards of type 2 diabetes mellitus. Frequency of CD4+CD28nullT lymphocytes was analyzed by multiple-color flow cytometry, and serum level of CRP was measured by ELISA. Their clinical data and results of coronary arteriography were recorded and analyzed.Compared to the non-diabetes ACS patients, the frequency of CD4+CD28nullT lymphocytes was higher in peripheral blood of diabetes ACS patients [(4.66±4.24)%(8.89±6.45)%,＜0.05]. But there was no significant difference in serum level of CRP between the two groups [(1.97±1.05)(2.22±1.14)mg/L,＞0.05]. Coronary angiography suggested that the rate of complete obstruction and diffuse pathogenic changes were more severe in diabetes ACS patients (711,＜0.05; 612,＜0.01).Coronary pathogenic changes are more severe in diabetes ACS patients than those without diabetes. Costimulatory molecule may be involved in the immune-modulation disturbance of patients with diabetes and ACS.

diabetes mellitus; acute coronary syndrome; T lymphocyte; inflammation

(No. 30871070)(No. 20604002-258)

R543.3

A

10.3724/SP.J.1264.2013.00033

2012-10-23;

2012-11-31

国家自然科学基金（No. 30871070）; 湖北省自然科学基金（No. 20604002-258）

张存泰, Tel: 027-83663050, E-mail: ctzhang0425@163.com