磁珠法在自动化核酸提取工作站中的应用

（烟台市公安局刑侦支队，山东 烟台 264000）

在全国罪犯DNA数据库的建设过程中，需对大量人员样本进行检验，增加了检验人员的工作量。本实验将磁珠法与自动化核酸提取设备相结合以提高检验过程的准确性，减少因手工操作引起的失误，缩短检验时间，提高每次检验结果的可重复性及均一性。

1 材料与方法

人员血样100份，为本实验室2009年上半年采集，载体为公安部物证鉴定中心生产的血样采集卡。采集卡上的血斑面积达到4 cm2，自然晾干后放入纸制包装袋室温保存。使用BSD PP电动手持打样器（烟台澳斯邦公司）打取直径为2.0 mm的血斑滤纸放在96孔板中，封膜保存在4℃冰箱中，以备提取。

将样本板、加样尖、AGOWA®DNA提取试剂盒（烟台澳斯邦公司）、PCR板（保存提纯的DNA）、废液槽按照操作要求放在安利斯达标准型自动化核酸提取工作站（烟台澳斯邦公司）指定的位置上。运行DNA提取程序，仪器自动进行样品的裂解、DNA吸附、洗涤、洗脱提取。100份血样经磁珠法提取后的DNA模板，使用ModulusTM单管型多功能检测仪（美国 Turner Biosystems公司），应用PicoGreen定量试剂盒（北京原平皓生物技术有限公司）对DNA进行定量，每份样品检测3次。

采用Identifiler试剂盒（美国AB公司）在9700型扩增仪（美国AB公司）上进行复合扩增，扩增产物用3130XL遗传分析仪（美国AB公司）进行检测，得到基因分型结果。

2 结果与讨论

经过对100份磁珠法提取后的DNA模板定量检测，样本 DNA 质量浓度在（0.490±0.113）ng/μL。100 份人员血样采用自动化磁珠提取法，经扩增及电泳检测后峰高可达到1000～3000RFU，成功率达到100%。

磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异地吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。本研究中提取的 DNA 模板质量浓度在（0.490±0.113）ng/μL，符合目前普遍采用的荧光检测商品试剂盒对PCR模板浓度的要求。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂，操作简单，将其用于自动化核酸提取平台中，样品的裂解、DNA吸附、洗涤、洗脱、磁珠回收，都在工作站内按照事先编好的程序自动进行，65 min内可完成96孔板的提取工作。操作简单快捷，自动化程度高，减少人为因素的影响。

运用自动化工作站解决了批量样本前期提取工作中的繁琐，同时通过制定血样采集标准、统一打样孔径，以及控制磁珠用量和洗脱液体积即可实现对DNA模板浓度的半定量，从而达到在电泳检测后所获得的基因分型均衡，分析数据时减少了人工干预，易于基因分型判断和DNA数据入库。