PARK18基因多态性与中国汉族人帕金森病的相关性

周莉莉 包琼琼 刘云 庄晓赛 胡乔 孙妙璇 胡艳兵 张雄

PARK18基因多态性与中国汉族人帕金森病的相关性

周莉莉 包琼琼 刘云 庄晓赛 胡乔 孙妙璇 胡艳兵 张雄

目的 研究PARK18基因多态性与中国汉族人群帕金森病（PD）的相关性，旨在探讨PD的发病机制，为PD的风险预测提供新的遗传标记。 方法 选取224例PD患者（PD组）及同期体检健康者309例（对照组），采用PCR、DNA测序等方法检测比较两组PARK18基因多态性位点，分析rs3129882与PD遗传易感性的相关性。 结果 两组对象rs3129882基因型频率和等位基因频率分布的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。rs3129882多态性与PD发生风险的关联性在3种遗传模式下均无统计学意义（均P＞0.05）。 结论 本研究暂不支持中国汉族人群中PARKl8区域rs3129882位点单核苷酸多态性与PD的发生有显著关联性。

帕金森病 PARK18 rs3129882 多态性 疾病遗传易感性

帕金森病（PD）是一种常见的渐进性中枢神经系统变性疾病，其病因及发病机制至今尚不十分清楚。遗传因素在PD病因与发病机制中的作用日益受到重视[1]。近来，欧洲研究者开展了较大规模的全基因组关联研究（GWAS），发现了位于人类白细胞抗原（HLA）基因的一个新的易感区域，命名为PARK18，其中该区域的rs3129882位点与PD相关性最强[2]。HLA在机体免疫应答和免疫调节中起关键作用。有研究发现，免疫反应和炎症过程参与PD疾病过程，在PD的发生和发展中有着重要作用[3]。因此位于HLA基因的PARK18区域可能是导致PD的重要遗传因素。目前，尽管国内外学者己经对HLA基因多态性与PD易感性的关联作了相关研究，但由于等位基因及其频率存在种族及地区差异性，各地研究结果不一，尚无定论。本文通过研究PARK18基因多态性与中国汉族人群PD的相关性，旨在探讨PD的发病机制，以期为早期诊断及治疗提供帮助。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2008—2011我院收治的PD患者224例（PD组），诊断依据英国PD协会脑库标准，除外遗传及免疫性PD。其中男127例，女97例；年龄33～86（65.05±11.19）岁；早发型PD（发病年龄＜50岁）36例。另择同期体检健康者309例作为对照组，男188例，女121例，年龄27～90（65.11±12.27）岁；排除锥体外系及其他神经系统疾病。两组对象均签署知情同意书，并经医院伦理委员会批准。两组对象性别及年龄的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

1.2 方法 标本采集：取外周静脉血2ml，肝素抗凝后-80℃冰箱保存。基因组DNA提取：采用Qiagen公司的QIAmp DNA blood mini kit血液基因组DNA提取试剂盒，从全血中提取基因组DNA。引物合成：采用Primer5.0

软件设计，由上海捷瑞生物工程有限公司完成，正向引物序列为F：5′-ATTATTCCCTTGGTGTTGGTT-3′，反向引物序列为R：5′-TAGTTTTCCTATTATGTAGCCCTG-3′。序列测定及分析：纯化产物测序委托上海申速生物公司完成。采用NCBI网站提供的Blast软件进行比对，根据比对结果判别基因分型。

图1 包含rs3129882多态性位点的DNA片段测序图（箭头所指为rs3129882基因型）

1.3 统计学处理 通过直接计数法对SNP位点基因型和等位基因频率进行计算。采用SPSS13.0统计软件，两组间率的比较采用χ2检验。相关性检验采用Logistic回归分析。

2 结果

2.1 测序结果 两组均发现rs3129882位点的AA、AG、GG的3种基因型，PD组部分测序峰见图1。

2.2 两组对象rs3129882基因型频率和等位基因频率分布的比较 见表1。

表1 两组对象rs3129882基因型频率和等位基因频率分布的比较[例（%）]

由表1可见，其差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

2.3 Logistic回归分析 rs3129882多态性与PD发生风险的关联性在3种遗传模式下均无统计学意义（显性遗传模式下OR=1.326，95%CI：0.937～1.878，P=0.111；隐性遗传模式下 95%OR=1.025，CI：0.644～1.631，P=0.917；加性遗传模式下OR=1.171，95%CI：0.909～1.508，P=0.221）。

2.4 不同临床亚型（震颤为主型、强直型和混合型）PD患者该多态性位点的基因型和等位基因分布 见表2。

表2 不同临床亚型PD患者该多态性位点的基因型和等位基因分布[例（%）]

由表2可见，不同临床亚型（震颤为主型、强直型和混合型）PD患者该多态性位点的基因型和等位基因的分布差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

3 讨论

目前，散发性PD的发病机制尚未完全阐明，可能涉及免疫、遗传、环境等诸多因素。Hamza等[2]对欧州人的研究中发现了新的PD相关区域，命名为PARK18基因。但后续有关PARK18与PD的相关性研究并不能完全重复Hamza等的研究结果，如Mata等[4]在西班牙人群及Sim n-S nchez等[5]在荷兰人群中检测基因rs3129882位点时未发现其与PD的发病相关。表明PARK18基因的SNP在不同的人群中与PD的相关性存在差异，其是否为PD的危险因素还需进一步研究。

PARKl8位于6p21.3，其中与PD相关性最强的SNP位点rs3129882位于HLA-DRA基因的1号内含子。rs3129882被认为是一个顺式作用调节因子，其功能为调节HLA-DRA、HLA-DQA2和HLA-DRB5的表达量[6]。HLA基因是一组免疫应答基因，具有高度多态性，其基因多态性决定了HLA系统参与的免疫反应的多样性和复杂性。关于PARK18基因多态性导致PD的易患性增加的机制仍在探索中。本研究结果暂不支持rs3129882多态性是中国人群PD的危险因素，但不能就此排除PARK18基因参与PD发病的可能性。一方面可能是由地区或者种族差异所致，另一方面也可能本研究样本量相对较小有关。

由于PD的易感性与多基因相关，除SNCA、LRRK2等已知易感基因外，PARK16、17、18等新发现的候选基因也可能影响患者PD易感性[2,7-8]。因此中国人群PD与其它基因易感性也值得进一步研究。

[1] Hardy J.Genetic Analysis of Pathways to Parkinson Disease[J]. Neuron,2010,68(2):201-206.

[2] Hamza T H,Zabetian C P,Tenesa A,et al.Common genetic variation in the HLA region is associated with late-onset sporadic Parkinson's disease[J].Nature Genetics,2010,42(9):781-785.

[3] Puschmann A,Verbeeck C,Heckman M G,et al.Human leukocyte antigen variation and Parkinson's disease[J].Parkinsonism Relat Disord,2011,17(5):376-378.

[4] Mata I F,Yearout D,Alvarez V,et al.Replication of MAPT and SNCA,but not PARK16-18,as susceptibility genes for Parkinson's disease[J].Movement Disorders,2011,26(5):819-823.

[5] Sim n-S nchez J,van Hilten J J,van de Warrenburg B,et al. Genome-wide association study confirms extant PD risk loci among the Dutch[J].European Journal of Human Genetics,2011, 19(6):655-661.

[6] Montgomery S B,Sammeth M,Gutierrez-Arcelus M,et al.Transcrip tome genetics using second generation sequencing in a Caucasian population[J].Nature,2010,464(7289):773-777.

[7] Satake W,Nakabayashi Y,Mizuta I,et al.Genome-wide association study identifies common variants at four loci as genetic risk factors for Parkinson's disease[J].Nature Genetics,2009,41(12): 1303-1307.

[8] Pankratz N,Wilk J B,Latourelle J C,et al.Genomewide association study for susceptibility genes contributing to familial Parkinson disease[J].Human Genetics,2008,124(6):593-605.

Association between PARK18 gene polymorphisms and Parkinson's disease in Han China population

ZHOU Lili，BAO Qiongqiong，LIU

Yun，et al.Department of Neurology，the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou 325027,China

Objective To investigate whether PARK18 gene polymorphism is associated with Parkinson's disease (PD)in Han Chinese population.Methods Polymerase chain reaction(PCR)and sequencing analysis were employed to determine the genotype of 224 PD patients and 309 age-matched healthy controls.The representative SNP rs3129882 in PARKl8 was analyzed and the role of rs3129882 in PD was assessed with dominant,recessive and additive model. Results No significant difference was found in allelic frequencies or genotypic distributions among different subsets of patients(P＞0.05).No association between rs3129882 and the risk of PD was detected under dominant,recessive and additive model(P＞0.05). Conclusion No evidence shows that PARK18 gene rs3129882 polymorphisms are associated with Parkinson's disease in Han Chinese population in the current study.

Parkinson's disease PARK18 locus rs3129882 Polymorphism Genetic predisposition to disease

2011-12-04）

（本文编辑：欧阳卿）

325027 温州医学院附属第二医院神经内科通信作者：张雄，E-mail：zhangxiong98@gmail.com