4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片的溶出曲线测定

徐冀文，王红爱，李 曼

(广东省第二人民医院药学部，广东 广州 510317)

4-氨基水杨酸钠为传统的抗溃疡性结肠炎药物5-氨基水杨酸钠的同分异构体，原为古老的抗结核药物，20世纪80年代发现其也有抗炎功能，用来治疗溃疡性结肠炎，疗效与5-氨基水杨酸钠相当。4-氨基水杨酸钠不仅价格远低于5-氨基水杨酸钠，而且疗效更稳定，不良反应更低，患者的耐受性较好[1]。溃疡性结肠炎是结肠部位的炎症性病变，为治疗这类疾病，研制的口服结肠定位包衣片不仅要能定位准确，而且最好要持续释放有效成分，从而保持较高的局部药物浓度。按照这一思路，利用pH依赖缓释双重控制原理，设计了4-氨基水杨酸钠结肠定位包衣片，并根据体外释放结果，筛选包衣片的最佳处方及工艺。完成此试验，可得到符合制剂要求的最佳处方，为体内动物试验打好基础。笔者采用反相高效液相色谱法测定4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片的体外溶出曲线，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪。4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片(自制，批号分别为 20120301，20120302，20120303，规格为每片0．5 g);4-氨基水杨酸钠对照品(纯度99．8%，上海生研生物科技有限公司，批号为20110201);甲醇、乙腈(美国迪马化学试剂有限公司)为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(35∶65);流速:1 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃;进样量:20 μL。在此条件下，供试品中4-氨基水杨酸钠峰能达到基线分离，理论板数按4-氨基水杨酸钠峰计应不低于2 000。色谱图见图1。

2．2 溶液制备

精密称取4-氨基水杨酸钠对照品27．78 mg置50 mL容量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，得到0．555 6 g/L 的 4-氨基水杨酸钠对照品溶液。采用2010年版《中国药典(二部)》附录溶出度测定法第二法(即桨法)，设转速为100 r/min，溶出介质分别为 900 mL 的 pH=1．2的盐酸溶液和 pH=6．5，7．0，7．4 的磷酸盐溶液，在 2，3，4，5，6，7，8，9，10，12 h 时分别取样10 mL并同时补充等量介质，滤过，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液、对照品溶液各20 μL注入高效液相色谱仪，测定4-氨基水杨酸钠的峰面积，以外标法计算每个时间点4-氨基水杨酸钠的溶出量。按处方中的辅料，制备空白包衣片，然后按供试品溶液的配制方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察:精密量取0．555 6 g/L的对照品溶液5，10，15，20，30，50 μL 注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标、进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=0．002 8 X ＋1．09(r=0．999 8)。表明 4-氨基水杨酸钠进样量在2．778～27．78 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

阴性干扰试验:照上述色谱条件，取上述3种溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定辅料在主药出峰的保留时间处是否出峰。结果显示，对照品溶液在4-氨基水杨酸钠的保留时间内无干扰，可达基线分离。表明此法专属性强。

滤膜吸附试验:分别取4-氨基水杨酸钠对照品溶液、4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片在4个介质中的溶出液，取尼龙66(孔径 0．45 μm)作为过滤头，分别作高速离心(4 000 r/min，5 min)，过滤弃去3，5 mL后取滤出液作为供试品溶液，然后测定4-氨基水杨酸钠的峰面积，观察同一浓度值峰面积的变化情况。结果表明与高速离心相比，此过滤头对4-氨基水杨酸钠对照品溶液、4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片溶出液过滤弃去3 mL后，不会形成对主药的吸附影响。所以可采用尼龙66(孔径0．45μm)作为过滤头过滤4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片的溶出液与对照品溶液。

稳定性试验:分别取4-氨基水杨酸钠对照品溶液、4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片在4个介质中相当于完全溶出时10%，100% 溶出量的溶出液，分别在 0，1，2，4，8，12，24 h 时测定4-氨基水杨酸钠的峰面积，观察峰面积的变化情况。结果显示，与0 h比较，4-氨基水杨酸钠的峰面积在24 h内的变化均小于2%，表明样品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:分别制备4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片在4个介质溶出度测定的溶出杯中，连续取样6份，测定其4-氨基水杨酸钠的溶出量。结果显示，4-氨基水杨酸钠的溶出量相对标准偏差均小于2%，表明此法测定4-氨基水杨酸钠溶出度重复性良好。

图1 高效液相色谱图

回收率试验:分别配制4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片在4个介质中相当于累计溶出10%，50%，100%的溶出液，每个浓度配制3份，测定4-氨基水杨酸钠的溶出量，计算其回收率。结果显示，4-氨基水杨酸钠3个浓度的回收率均在95%～105%间，相对标准偏差均小于2%，表明此法测定4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片溶出度的回收率高。

2．4 溶出曲线测定

分别取4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片6片(批号为20120301)，按上述溶出条件，测定其溶出曲线，结果见图2。可见，4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片在pH=1．2盐酸溶液中2 h几乎不溶出，在pH=6．5磷酸盐溶液中继续运转12 h溶出不超5%，而在pH=7．0，7．4磷酸盐溶液均显缓慢溶出。

图2 4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片的溶出曲线

3 讨论

测定药物在多pH介质中的溶出曲线，而非1个介质、1个时间点、1个限度的测定，采用此手段来评价口服固体制剂，可指示出不同来源同一制剂的品质差距，从而为临床疗效的差距提供佐证。

本研究以肠溶型和渗透型丙烯酸树脂制备pH依赖的缓释结肠定位给药系统，这一制剂的体外评价方法可根据胃肠道各区段pH的不同选择释放介质，根据制剂在各区段的停留时间选择释放时间。Gupta等[2]建立了pH和时间双重机制控制的结肠定位给药系统，其体外评价方法为将制剂在pH=1．2的盐酸中释放2 h，再分别于 pH=6．5，7．0，7．5 的磷酸盐缓冲液中继续释放12 h。傅崇东等[3-4]制备了pH和时间双重控制的结肠靶向微丸和时控型结肠靶向微丸，模拟胃肠道各区段最高和最低pH变化的释药条件进行微丸的释放研究。本研究参考以上原理制备了pH和时间双重控制的4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片。

采用高效液相色谱法测定4-氨基水杨酸钠口服结肠定位包衣片的溶出曲线，结果表明，此制剂的肠溶效果符合预期，在pH=1．2盐酸溶液、pH=6．5磷酸盐溶液中2 h溶出甚少，而在pH=7．0，7．4 磷酸盐溶液中缓慢溶出。

[1]温忠慧，欧阳钦．4-氨基水杨酸治疗溃疡性结肠炎[J]．中华内科杂志，1997，36(7):470-471．

[2]Gupta VK，Beckert TE，Price JC．A novel pH and time-based multi-unit potential colonic drug delivery system．I．Development[J]．Int J Pharm，2001，213(1-2):83-91．

[3]傅崇东，徐惠南，张 瑜．pH依赖-缓释型美沙拉秦结肠靶向小丸的制备与体外评价[J]．中国医药工业杂志，2000，31(12):541．

[4]傅崇东，徐惠南，张 瑜．5-氨基水杨酸结肠定位给药时控微丸的制备与体外释放[J]．药学学报，2000，35(5):389．