清心片质量标准研究

2013-03-31杨白玉苗艳萍范晓青

长春中医药大学学报 2013年6期

杨白玉,苗艳萍，范晓青

(长春中医药大学药学院，长春 130117)

清心片是以丹参、槐花、川芎、三七、红花、降香、赤芍等中药加工而成的片剂。其主药为丹参，丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根茎。主产于四川、山东、江苏、安徽等省。味苦，微寒，归心、肝经。有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痛。用于胸痹心痛，脘腹胁痛，瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛等功效[1-2]。丹参素是清心片中发挥药理活性的主要成分，因此，清心片中丹参素含量是评价清心片质量优劣的重要指标。

1 实验材料

岛津高效液相色谱仪，LC-10ATvp 溶剂输送泵，SPD-10Avp 紫外—可见检测器。PV ODS(150×4.6) 色谱柱。岛津紫外—可见分光光度计：UV-1601(PC)S 型。甲醇：美国新泽西Fisher化学药品，高效液相色谱纯。水：超纯水。冰乙酸：北京化工厂产品，优级纯(G.R)；丹参素钠对照品：购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110855-200506。

2 方法与结果

采用薄层色谱法进行定性鉴别，用高效液相色谱法，对制剂中的丹参素进行含量测定[3-4]。

2.1 定性鉴别

2.1.1 取本品3 g，加甲醇30 mL，超声处理5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取槐花对照药材1 g，加水50 mL，煎煮30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇20 mL，超声处理5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液10 μL，对照药材溶液2 μL，分别点于同一以0.6%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱的相应位置上，显一相同颜色的斑点。

2.1.2 取本品鉴别(2.1.1)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材1 g,加水50 mL，水煎1 h，滤过，滤液浓缩，蒸干，残渣加乙醚20 mL，超声处理20 min，滤过，药渣挥去乙醚，自“加甲醇20 mL起”依法制成对照药材溶液，再取芍药苷对照品,加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一以0.6%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

定性鉴别合格后，采用高效液相色谱法，以丹参素为标准进行含量测定。

2.2 测定波长的选择在清心片原标准中(《中国药典》2010年版一部)测定丹参素的含量时，以283 nm为检测波长。我们对仿制的清心片含量测定进行方法学考察时，首先进行了测定波长的选择试验，具体方法是：精密称取丹参素钠对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含48 μg的溶液，加入紫外—可见分光光度计吸收池内，在波长190～600 nm范围内进行光谱扫描，结果在波长283 nm有最大吸收。

2.3 系统适用性色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰乙酸(2∶95∶2∶1)为流动相，检测波长283 nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于6 000。

2.4 供试品和标准品溶液的制备[5-8]对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1 mL含50 μg(相当于每1 mL含丹参素45 μg)的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取清心片10片，除去包衣，精密称定，研细，取约1 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸溶液(1→50)50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用上述盐酸溶液补足减失重量，加氯化钠5 g，摇匀，离心，精密量取上清液25 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取4次(50、30、20、20 mL)，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用50%甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5 标准曲线的绘制[7-9]以丹参素钠为标准品绘制标准曲线，精密吸取丹参素钠对照品溶液(浓度0.048 mg/mL，相当于丹参素0.0432 mg/mL)分别进样5、10、15、20、25 μL，测量相对应的峰面积，结果：A=276 101.873 1C+10 133.53 781，r=0.999 1。进样量在0.216～1.08 μg的范围内，进样量与峰面积之间呈直线函数关系。

2.6 清心片中丹参素含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，得峰面积，通过方程A=276 101.873 1C+101 33.537 81和溶液配制过程计算丹参素含量。

2.7 方法学考察[9-11]

2.7.1 稳定性试验精密吸取丹参素钠对照品溶液10 μL，于第1、第2、第3、第4、第5天分别进样10 μL，测量峰面积，结果X=131 415.720，RSD=1.02%。

2.7.2 精密度试验取同一对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL，测量峰面积，结果x=130 017.320，RSD=1.22%。

2.7.3 重现性试验取清心片样品一批，每片重0.6 g,批号为20120601，依法独立测定5次。对照品丹参素钠的浓度为48 μg/mL(相当于丹参素的浓度为43.2 μg/mL)，进样量10 μL，峰面积131 245.406。根据对照品峰面积与供试品峰面积计算样品含量，结果平均含量为1.37 mg/片。RSD=2.09%。

2.7.4 回收率测定取清心片样品一批：批号为20120601，除去薄膜衣后的平均片重为0.5 719 g/片，含量为1.37 mg/片；取样品5分，分别加对照品适量，依法独立测定，结果对照品溶液中丹参素浓度为43.2 μg/mL，进样量为10 μL。

2.8 10批样品含量测定取中试样品10批，按照正文含量测定方法测定，结果表明原标准规定 “每片含丹参以丹参素计，不得少于0.80 mg ”。经测定样品结果，均能达到上述标准,因此仍规定“本品每片含丹参以丹参素(C9H10O5)计，不得少于0.80 mg”。