不同提取方法研究返魂草提取物中槲皮素的含量

徐云 候宝 于艳辉 白冰

・论著・

不同提取方法研究返魂草提取物中槲皮素的含量

徐云 候宝 于艳辉 白冰

目的 用不同提取方法提取、测定返魂草提取物中槲皮素的含量, 为返魂草及其制剂中槲皮素的提取提供依据。方法 用不同浓度的乙醇溶液回流提取、超声提取, 提取返魂草提取物中的槲皮素, 并采用高效液相色谱法检测其含量, 优化最佳提取工艺并进行工艺验证。结果 槲皮素的含量依次为70%乙醇回流提取>70%乙醇超声提取>50%乙醇回流提取>95%乙醇回流提取。结论 返魂草提取物中槲皮素以70%乙醇回流提取为最佳。

返魂草；槲皮素；高效液相色谱法；提取工艺；含量测定

返魂草是菊科千里光属植物返魂草 (Senecio cannabifolius Less).及其变种单叶返魂草 ［Senecio cannabifolius Less.var.integrifolius(Koidz.)Kitam.］的带根全草, 又名宽叶返魂草、麻叶千里光等, 全草可药用,有清热解毒、散血消肿之功效［1, 2］。

目前, 返魂草中以绿原酸为代表的有机酸成分含量测定的研究报道较多［3, 4］, 而研究表明, 除了以绿原酸为代表的有机酸成分以外, 以槲皮素为代表的黄酮类化合物也是返魂草的主要有效成分。返魂草黄酮类化合物不仅具有抗菌、抗病毒作用, 而且还有很好抗氧化作用［5, 6］。故本研究对返魂草提取物中槲皮素的含量进行测定, 并对返魂草提取物中槲皮素的提取方法进行研究。

本研究选用超声、回流两种提取方法对返魂草提取物中的有效成分进行提取, 并采用高效液相色谱法对提取物中的槲皮素含量进行了测定［7, 8］。

1 材料

高效液相色谱仪：①UItimate3000 紫外检测器(德国戴安)；②安捷伦 1200紫外检测器(美国安捷伦)；Meltter AE240 双量程电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司), AB204-E 电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；SB2200一T型超声波清洗器(上海必能信公司)。

返魂草提取物由吉林修正药业新药开发有限公司提供；槲皮素对照品(批号：100081-200406 供含量测定用, 中国食品药品检定研究院提供)。甲醇为色谱纯, 水为超纯水, 其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相；检测波长为 373 nm；流速1.0 ml/min；柱温25℃；理论板数按槲皮素峰计算应不低于 2000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品10.56 mg, 置 100 ml 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 5 ml, 置 25 ml 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得(每1 ml含槲皮素 0.02113 mg)。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 50%乙醇回流提取供试品制备 取返魂草提取物约 5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入50%乙醇40 ml, 回流提取 1 h, 放冷, 滤过, 滤液转移至 50 ml容量瓶中, 滤器及滤渣用 70%乙醇洗涤, 洗涤液并入同一容量瓶中, 加 70%乙醇至刻度, 摇匀。精密量取 25 ml, 加入 5 ml 浓盐酸, 在 95℃下加热回流 2 h, 立即冷却, 转移至 50 ml 容量瓶中, 用乙醇定容至刻度, 用0.45 μm 滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.3.2 70%乙醇回流提取供试品制备 取返魂草提取物约 5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入70%乙醇40 ml, 回流提取 1 h, 放冷, 滤过, 滤液转移至 50 ml容量瓶中, 滤器及滤渣用 70%乙醇洗涤, 洗涤液并入同一容量瓶中, 加 70%乙醇至刻度, 摇匀。精密量取 25 ml, 加入 5 ml 浓盐酸, 在 95℃下加热回流 2 h, 立即冷却, 转移至 50 ml 容量瓶中, 用乙醇定容至刻度, 用0.45 μm 滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.3.3 95%乙醇回流提取供试品制备 取返魂草提取物约 5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入95%乙醇40 ml, 回流提取 1 h, 放冷, 滤过, 滤液转移至 50 ml容量瓶中, 滤器及滤渣用 70%乙醇洗涤, 洗涤液并入同一容量瓶中, 加 70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取 25 ml, 加入 5 ml 浓盐酸, 在 95℃下加热回流 2 h, 立即冷却, 转移至 50 ml 容量瓶中,用乙醇定容至刻度, 用0.45 μm 滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.3.4 70%乙醇超声提取供试品制备 取返魂草提取物约 5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入70%乙醇40 ml, 超声提取 1 h, 放冷, 滤过, 滤液转移至 50 ml容量瓶中, 滤器及滤渣用 70%乙醇洗涤, 洗涤液并入同一容量瓶中, 加 70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取 25 ml, 加入 5 ml 浓盐酸, 在 95℃下加热回流 2 h, 立即冷却, 转移至 50 ml 容量瓶中,用乙醇定容至刻度, 用0.45 μm 滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.4 槲皮素含量测定 分别精密对照品溶液与供试品溶液各10 μl, 注入液相色谱仪, 测定, 即得。测定结果见表1。

表1 返魂草提取物中槲皮素含量测定

结果表明, 70%乙醇回流提取供试品中槲皮素含量最高。

2.5 工艺验证试验 按2.3.2项下工艺条件, 制备3 批70%乙醇回流提取供试品, 按含量测定项下方法测定槲皮素含量, 见图1。验证结果表明, 3批70%乙醇回流提取供试品中槲皮素平均含量为0.378 mg/g,与表1中70%乙醇回流提取供试品中槲皮素含量数据相接近, 且高于其他提取方法供试品中槲皮素含量, 表明返魂草提取物中槲皮素提取物70%乙醇回流提取方法为佳。

图1 70%乙醇回流提取槲皮素含量高效液相色谱图

3 讨论

3.1 检测波长的选择 取 0.1 mg/ml 槲皮素对照品进行全波长扫描, 结果槲皮素在 209 nm、256 nm、373 nm有最大吸收, 本文选择 373 nm 作为吸收波长,见图2。

图2 槲皮素对照品紫外-可见吸收光谱曲线

3.2 不同提取方法的选择 本研究采用不同浓度的乙醇回流提取和超声提取制备返魂草供试品, 结果回流提取供试品中槲皮素含量高于超声提取中供试品槲皮素含量, 且与本试验所得出的结论与王晖等人在进行透骨草中槲皮素含量测定的实验［9］中的结论基本一致。

4 结论

试验结果及验证试验表明返魂草提取物中槲皮素提取以70%乙醇回流提取最佳, 本研究为返魂草、返魂草制剂及含有槲皮素的中草药提取物中槲皮素的提取参数提供了一定的理论依据。

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［7］吴一飞, 巩 江, 令恒莉, 等.返魂草的药学研究进展.山东中医杂志, 2009, 28(6):436-437.

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Studies on content of quercetin in senecio cannabifolius less extract by different extracting processes

XU Yun, HOU Bao, YU Yan-hui, et al. Jilin Xiuzheng Pharmaceutical New Drug Development Co., Ltd.,Changchun 130012, China

Objective Content of quercetin in senecio cannabifolius less extract by different extracting processes to provide evidence for the extraction of quercetin in senecio cannabifolius less and its preparations.Methods Quercetin were extracted by enthanol reflux and ehthanol ultrasonic extracting, the best extracting process was chosen from different extractiong processes based on determining the content of quercetin in senecio canna bifolius extract by HPLC.Results The content of quercetin were 70% ehthanol reflux >70% ehthanol ultrasonic >50% ehthanol reflux>95% ehthanol reflux.Conclusion The best extraction for quercetin in senecio cannabifolius less extract from different extracting processes is 70% ehthanol reflux extracting.

Senecio cannabifolius less; Quercetin; HPLC; Extracting processes; Content determination

R284.1

A

1674-9308(2013)02-0001-03

10.3969/J.ISSN.1674-9308.2013.02.001

吉林省中医药管理局项目(项目编号：PT092)

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徐云 E-mail：xuyun19847180@163.com