Caveolin-1与Her-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

李 扬，万建设

（1.承德医学院肿瘤外科，河北承德067000；2.河北省保定市第一医院外科，河北保定071000）

·论 著·

Caveolin-1与Her-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

李 扬1，万建设2*

（1.承德医学院肿瘤外科，河北承德067000；2.河北省保定市第一医院外科，河北保定071000）

目的 探讨小凹蛋白1（caveolin-1，Cav-1）、人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor recepter-2，Her-2）在乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测53例IDC组织及其周围正常乳腺组织中Cav-1、Her-2的表达情况，并分析二者与临床病理参数之间及其二者之间的相关关系。结果53例IDC组织中，Cav-1阳性表达率为54.7％，显著低于癌旁正常乳腺组织上皮细胞的88.7％（P=0.000）；Her-2在IDC组织中阳性表达率为30.2％，高于癌旁正常乳腺组织上皮细胞的13.2％（P=0.034）；二者在IDC中的表达呈负相关（rs=-0.310，P=0.024）。Cav-1、Her-2在IDC中的表达情况与有无淋巴结转移、临床分期有关（P＜0.05），与患者年龄、肿瘤大小无关（P＞0.05）。结论Cav-1在IDC组织中表达下调，在细胞信号转导过程中作为负性调节蛋白，负向调节Her-2蛋白的表达，从而抑制乳腺癌的发生、发展及浸润转移。

乳腺肿瘤；小凹蛋白-1；受体，表皮生长因子

乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一［1］，发病率呈逐年上升趋势，其中以浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）最为多见，占所有乳腺癌的50％～80％。小凹蛋白1（caveolin-1，Cav-1）是近年来新发现的抑癌基因［2-5］，人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor recepter-2，Her-2）蛋白的过表达与人类乳腺癌的进展有关［6］。目前对于二者之间的相互作用机制在乳腺癌方面研究还很少，本研究检测二者在乳腺IDC和癌旁正常组织中的表达情况，分析二者与临床病理特征及二者之间的关系，探讨其在乳腺IDC发生、发展中的作用，旨在为乳腺癌的诊断及治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源：53例乳腺浸润性导管癌及癌旁正常组织（距癌变部位5cm以外，病理检查无癌变组织），标本均来自于河北省保定市第一医院病理科2009年6月—2012年6月外科手术切除及存档石蜡包埋标本。所有标本术前均未行放疗和化疗，均为女性，年龄38～75岁，平均52岁；按2002年美国联合癌症分类委员会和国际抗癌联盟制定的标准进行TNM分期为Ⅰ～Ⅲ期［7］。所有标本均经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，进行免疫组织化学染色。

1.2 实验试剂：Cav-1抗体为兔抗人多克隆抗体，购自美国基因公司（稀释度为1∶100）。Her-2抗体为兔抗人单克隆抗体，购自中杉金桥公司（稀释度为1∶150）。二氨基联苯胺显色液购于福州迈新生物技术开发公司。

1.3 Cav-1、Her-2检测：采用免疫组织化学Envision二步法检测Cav-1及Her-2蛋白在乳腺IDC及癌旁正常组织中的表达。操作按照试剂盒所附说明书进行，用已知阳性片（北京中杉金桥生物技术公司提供）作阳性对照，同时用PBS替代一抗作阴性对照，每次实验均设阳性对照及阴性对照。

1.4 结果判定：Cav-1蛋白主要表达于细胞膜上，以胞膜中出现棕黄色颗粒为阳性反应，Her-2表达于细胞膜上。采用双盲法对每张切片在高倍镜（× 200）下计数10个视野。Cav-1以＜50％细胞膜染色为阴性；50％～100％细胞膜染色为阳性。Her-2以全部癌细胞中细胞膜无染色或＞30％癌细胞膜不完整弱染色为阴性；＞10％癌细胞膜轻至中度完整染色或＞30％癌细胞膜完整强染色为阳性。

1.5 统计学方法：应用SPSS17.0统计软件包进行数据处理。计数资料以百分率表示，采用χ2检验；相关性采用Spearman等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Cav-1蛋白在乳腺IDC及正常乳腺组织组织中的表达：Cav-1在53例IDC组织中阳性表达率为54.7％，显著低于癌旁正常乳腺组织上皮细胞的88.7％（P=0.000）；Her-2在IDC组织中阳性表达率为30.2％，高于癌旁正常乳腺组织上皮细胞的13.2％（P=0.034）。经Spearman等级相关分析，二者的表达呈负相关，差异有统计学意义（rs= -0.310，P=0.024）。见表1，2。

表1 Cav-1、Her-2在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达 （n=53，例数，％）

表2 乳腺癌组织中Cav-1与Her-2的相关性

2.2 免疫组织化学检测结果：Cav-1主要表达于细胞膜上，胞浆中亦有表达；Her-2表达于细胞膜上。见图1，2。

图1 IDC中Cav-1阳性表达（SP×200）

图2 IDC中Her-2阳性表达（SP×200）

2.3 乳腺IDC组织Cav-1、Her-2的表达与临床病理参数的关系：Cav-1及Her-2在IDC组织中的表达与有无淋巴结转移、临床分期有关（P＜0.05），与年龄、肿瘤大小无关（P＞0.05）。其中淋巴结转移越多、临床分期越晚，Cav-1表达率降低；肿瘤越大、淋巴结转移越多、临床分期越晚，Her-2表达率越高。见表3。

表3 乳腺浸润性导管癌组织中Cav-1与Her-2的表达 （例数，％）

3 讨 论

Caveolae（小凹）是细胞质膜表面特异性的内陷微区，是细胞信号转导的信使中心［8］。许多信号分子聚集在Caveolae区，如各种受体酪氨酸激酶，非受体酪氨酸激酶等。Cav-1是Caveolae表面标记蛋白，是许多信号分子的支架蛋白和负性调节蛋白，它与细胞的增殖、迁移、凋亡等过程密切相关［9］。人类的Cav-1基因定位在可疑的肿瘤抑制位点（7q31.1）上，研究［10-11］表明Cav-1在乳腺癌细胞及原癌基因激活的肿瘤细胞中表达下调。Park等［12］研究发现，Cav-1在130例正常乳腺组织中阳性表达率100％；在IDC中阳性表达率为56.9％，其表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结情况等无关。本研究发现Cav-1在正常乳腺组织中阳性表达率为88.7％，IDC中为54.7％，其可能与试验方法、技术操作等因素有关。同时发现乳腺癌临床分期越晚，Cav-1表达减少；伴有淋巴结转移的乳腺癌Cav-1表达减少。表明其具有抑制乳腺癌发生、发展、浸润转移的作用。

Her-2（也称C-erbB-2，Her-2/neu），属于表皮生长子受体家族，与人类及啮齿类动物的乳腺肿瘤的发生有关。研究［13］发现在20％～30％的乳腺癌患者中Her-2过度表达，它参与了抑制细胞凋亡、促进肿瘤新生血管生成、增加肿瘤细胞的侵袭力等过程。目前对其研究较明确，与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关，是判断乳腺癌预后的独立指标。本研究发现Her-2在正常乳腺组织中阳性表达率为13.2％，在IDC中为30.2％，可能与Her-2表达的个体差异、样本含量及所采用的检测技术有关。同时发现乳腺癌临床分期越晚、伴有淋巴结转移的乳腺癌，Her-2的表达增加。提示Her-2表达增高，越容易发生浸润和淋巴结转移。

Cav-1N端近膜区的21个氨基酸残基组成“脚手架”结构域（scaffolding domain，SD），Her-2基因集中定位于Caveolae中［14］，Cav-1通过SD对Her-2起负性调节作用，是Her-2信号传导的负向调控因子［12］。近来Lu等［15］研究表明该效应是使转录下调，抑制细胞增殖，促进细胞成熟、分化，维持细胞稳定，这些都是通过Cav-1的减量调节介导完成的。本研究证实Cav-1与Her-2在乳腺IDC中的表达呈负相关，差异有统计学意义（rs=-0.310，P= 0.024）。表明随着乳腺癌病期的进展，Cav-1表达下调，对Her-2抑制作用减弱，Her-2表达增加，从而促进乳腺癌细胞的增殖，增加侵袭能力。

本研究从蛋白水平初步探讨了Cav-1及Her-2蛋白在乳腺IDC及正常组织中的表达状态，证实Cav-1在乳腺癌中表达下调，并对Her-2蛋白的表达起负性调控作用，初步验证Cav-1具有抑制乳腺癌发生、发展、转移的能力，是乳腺癌发生的重要分子生物学事件。侵袭和转移是恶性肿瘤的本质特征，研究其机制是制定治疗方案的理论基础［16］。本研究为预测患者预后、指导临床、预防肿瘤等方面打下坚实的基础。

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（本文编辑：赵丽洁）

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1007-3205（2013）07-0816-04

2012-12-24；

2013-01-28

李扬（1986-），女，河北衡水人，承德医学院医学硕士研究生，从事乳腺肿瘤诊治研究。

*通讯作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.07.026