乌司他丁对自体回收血液中红细胞和血小板保护作用的研究＊

梁健华，程平瑞，林翠芳，阮绪广

（广东省广州市番禺区中心医院麻醉科 511400）

异体输血有许多并发症且受到血源的限制，自体血回收是解决血源紧张与防止血源性传染病的重要途径。但有研究表明，血液回收过程中可造成一定程度的红细胞破坏和血小板激活，回输后出现一系列相关并发症。本研究将乌司他丁应用于自体血回收过程中，通过扫描电镜和流式细胞仪对回收血中红细胞破坏程度和血小板的活化程度进行观察和量化，观察乌司他丁是否减轻自体血回收过程中红细胞的损伤及血小板的激活，为自体血回输更好地用于临床提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院骨科病房2010年8月至2011年9月收治的50例接受骨科椎体手术的患者，ASA分级Ⅰ～Ⅲ级，其中男36例，女14例，年龄33～62岁，平均年龄（48.4±7.2）岁。所有患者术前各项常规检验均正常，无冠心病、糖尿病、血液系统疾病、脑血管病病史，无恶性肿瘤，无严重肝、肾功能不全，术中血液没有受到污染，手术出血量估计在1 000mL以上。50例患者分为研究组和对照组，两组在性别、年龄、手术时间、术中失血量等一般资料方面的比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 手术方法 两组患者入院后均给予一般常规治疗和护理，术前常规肌肉注射0.01mg／kg剂量的阿托品。两组患者均给予气管插管静吸复合全身麻醉的麻醉方式，维持肺泡气七氟醚的最低有效浓度在（1.0±0.2）MAC左右，手术过程中根据心率和血压的变化随时调节瑞芬太尼的用量。麻醉成功后行右侧颈内静脉和左侧桡动脉置管以便对血压和中心静脉压进行持续监测，同时方便采血。手术期间应用HP多功能监护仪对患者基本生命体征进行全程监测。手术过程中尽量维持平均动脉压在60～80mm Hg之间。研究组于手术开始前静脉推注乌司他丁4 000U／kg，并预充6 000U／kg于储血罐；对照组给予等容量的生理盐水。两组均使用北京精产自体-3000型全自动血液回收机对术中出血进行回收、处理，并进一步浓缩成为“洗涤红细胞”以备回输给患者。在回收血过程中使吸引器负压压力控制在80～120mm Hg之间；根据出血量调节肝素盐水（生理盐水500mL加肝素12 500U）的滴速，使肝素盐水与回收血的体积比为1∶10。

1.2.2 标本采集 两组血液回收后立即抽取回收血液2mL和3mL于柠檬酸钠抗凝的试管（s1和s2试管）中，然后从中心静脉内抽血2mL和3mL（最初5mL血丢弃）于柠檬酸钠抗凝的试管（p1和p2试管）中，标本在15min内送检并固定。

1.2.3 观察指标和检测方法 （1）回收血红细胞的形态和非双凹形红细胞的百分比：采用扫描电子显微镜观察。（2）回收血红细胞检测：s1和p1分别用来检测回收血ATP和2，3-DPG含量，其中ATP试剂由Promega公司提供，2，3-DPG试剂由Roche公司提供。（3）回收血和体内血血小板活化程度检测：预先在美国B-D公司生产FacscaliburⅡ型流式细胞仪试管中加入美国pharmingen公司产的抗人CD41aFITC、CD62pPE、CD45perp抗体各10μL，同时加入鼠抗人IgG1抗体10μL作阴性对照，s2和p2分别用来检测回收血和体内血中血小板表面的GMP-140、P-选择素，同时对回收血和体内血中血小板的活化程度进行量化。

1.3 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行统计学分析，其中计量资料用±s表示，组间比较采用独立样本t检验，同组前后比较采用配对t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 回收血红细胞的形态和非双凹形红细胞的百分比 两组回收血电子显微镜示有少量红细胞边缘出现不归整，大多数基本保持双凹圆盘状，研究组回收血非双凹形红细胞百分比为（7.1±2.4）%，显著低于对照组的（11.6±4.3）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 回收血红细胞检测 研究组回收血红细胞ATP和2，3-DPG含量显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组回收血红细胞ATP和2，3-DPG含量对比（±s）

▲：P＜0.05，与对照组比较。

组别 n ATP 2，3-DPG对照组25 5.42±1.24 3.32±0.53研究组 25 6.42±1.24▲ 4.08±0.65▲

表2 两组回收血和体内血回输前后血小板活化程度（±s）

表2 两组回收血和体内血回输前后血小板活化程度（±s）

▲：P＜0.05，与对照组比较；△P＜0.05，与同组体内血（回输前）比较。

组别 n 回收血血小板活化程度体内血血小板活化程度（回输前）体内血血小板活化程度（回输后）对照组 25 73.8±9.5 23.3±8.6 42.1±5.4△研究组 25 43.6±7.4▲ 20.8±6.1 33.7±4.5▲△

2.3 回收血和体内血回输前后血小板活化程度检测 研究组回收血和体内血回输后血小板表面的GMP-140含量均显著低于对照组，回收血和体内血回输后血小板的活化程度均显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组体内血回输后血小板活化程度均显著高于回输前，且对照组要显著高于研究组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

3 讨 论

随着医疗事业的发展，医疗用血供不应求的矛盾日趋突出，异体输血可能引起感染性疾病（艾滋病、肝炎等），抑制机体免疫功能，增加术后与病死率相关的炎性反应，降低恶性肿瘤患者术后生存率，自体血回收是解决血源紧张与防止血源性传染病的重要途径。随着自体血液回输的广泛应用，临床上出现了一系列的并发症，包括血红蛋白尿，血压下降，术中及术后伤口弥漫性出血；呼吸道阻力升高，肺顺应性下降，动脉氧分压下降，二氧化碳分压升高，肺水肿等类似于成人呼吸窘迫综合征（ARDS）的现象；输血后带状核细胞的升高；全身性水肿。这一系列并发症被称为“自体血回输综合征”，以上并发症的出现与血液回收过程中红细胞、血小板的破坏和激活有直接关系［1］。

血液回收过程中由于自体血和管道的接触、吸引器的吸引力作用、洗涤、离心等机械作用，红细胞的破坏在所难免。ATP主要用于维持细胞膜“钠泵”的正常功能，保持红细胞的离子平衡，维持红细胞膜的正常结构与功能［2-3］。Wang等［4］报道洗涤式血液回收全过程处理可使红细胞有一定程度破坏（ATP及2，3-DPG含量减少）。本研究结果显示，回收血非双凹形红细胞百分比显著高于体内血，同时ATP及2，3-DPG含量显著低于体内血，说明在血液回收过程中确实对红细胞的形态和功能产生了影响。Bull等［5］认为血液回收时机械力的作用以及血液稀释都是导致血小板活化的重要因素，血小板活化后会大量释放GMP-140至血浆，因此，检测GMP-140水平就能反映血小板的活化程度。本研究结果显示，回收血血小板活化程度明显高于体内血，此结果和之前研究结果一致。

乌司他丁是一种广谱的酶抑制剂，主要是从健康男性尿中分离出来的。现代研究结果显示，术中使用乌司他丁对机体重要器官如肾脏、肝脏、肺脏和血液系统有保护作用。有相关研究证实乌司他丁能保护红细胞［6］。江莲等［7］观察到它能降低炎性介质，保护红细胞免疫功能。李丽等［8］观察到CPB期间，乌司他丁通过减轻红细胞膜脂质过氧化反应，对CPB下心内直视手术患者红细胞起到一定的保护作用。另外，乌司他丁能改善血小板代谢，维护血小板正常聚集功能［9-13］。本研究结果显示，研究组回收血非双凹形红细胞百分比为（7.1±2.4）%，显著低于对照组的（11.6±4.3）%，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组回收血红细胞ATP和2，3-DPG含量显著高于对照组（P＜0.05）；研究组回收血和体内血回输后血小板表面的GMP-140含量均显著低于对照组，回收血和体内血回输后血小板的活化程度均显著低于对照组（P＜0.05）。两组体内血回输后血小板活化程度均显著高于回输前，且对照组要显著高于研究组（P＜0.05）。这说明乌司他丁可以很好地保护血液回收过程中外界因素对红细胞和血小板的破坏和激活。

总之，乌司他丁能减轻自体血回收过程中红细胞的损伤及血小板的激活，从而减轻血液回输对机体的不良反应，值得临床推广和普及。

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