江西省检测HIV-1新近感染的BED捕获酶免疫实验的室内稳定性评价

靳廷丽，唐翼龙，易志强，刘丽萍，樊寒艺

(江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)

江西省检测HIV-1新近感染的BED捕获酶免疫实验的室内稳定性评价

靳廷丽，唐翼龙，易志强，刘丽萍，樊寒艺

(江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)

目的对江西省BED捕获酶免疫检测方法(BED capture enzyme immunoassay,BED-CEIA，简称BED)的实验稳定性进行评价。方法在江西省艾滋病确证中心实验室使用BED方法对2011-2012年新确证的艾滋病病毒抗体阳性血清进行新近感染检测。对每次试验的试剂质控品(阴性对照、校准品、弱阳性对照和强阳性对照)的吸光度OD值和标化OD值(OD-n)的均值(Mean)、标准差(SD)和变异系数(CV)进行分析及对实验的初筛和确认实验结果的一致性进行比较。结果对OD-n的统计显示，质控品阴性对照的变异系数为37.3%。校准品、弱阳性对照和强阳性对照的变异系数在7%以内；初筛和确认实验结果的回归分析决定系数R2值达到了0.9以上。结论江西省艾滋病确证中心实验室使用BED-CEIA方法较稳定，质控在控，结果可靠,但阴性对照变异系数有待于降低。

江西省；HIV-1；新近感染；BED；稳定性；评价

长期以来艾滋病病人(AIDS)、艾滋病病毒(HIV)感染者的病例报告、哨点监测、行为监测等监测方法,为发现艾滋病疫情,掌握艾滋病流行趋势、高危行为的变化情况,以及评价干预措施的效果等提供了大量的依据。但通过上述监测方法只能获得累积感染率，无法获得直接准确的新近感染的数据,不能敏感地反映疫情的真正变化趋势和干预措施的效果,美国疾病预防控制中心(CDC)组织开发BED监测方法，这种方法采用1型HIV病毒特异B、E和D亚型的gp41抗原决定序列所合成的分支肽作为抗原，检测其抗体的一种捕获酶免疫检测方法，因此命名为BED-CEIA。其原理是人体感染艾滋病病毒后，体内艾滋病病毒特异IgG抗体占人体总IgG抗体的比例随感染时间延长而逐渐上升，通过检测血清阳转后HIV-IgG抗体占总IgG的比例达到一定的值来判断是否为新近感染[1]。2011年我省艾滋病确证中心实验室获得该检测方法的实验室认可。本研究是对该实验方法在我们实验室的室内稳定性做一评价。

1 材料与方法

1.1 实验对象2011年至2012年全省艾滋病病毒抗体阳性血清样品。样品的采集、运输、检测及保存均严格按照《全国艾滋病检测技术规范》要求执行。检测样本的纳入标准：(1)HIV-1抗体阳性(蛋白免疫印迹试验(WB)为阳性)；(2)血样保存在-20℃以下，反复冻融少于3次，清亮、无严重溶血、无交叉污染；(3)如果同1人在3个月内出现2份或以上的确认阳性血样，将第1份样本纳入新近感染检测，其余样本从样本中剔除。排除标准：(1)已向监测系统报告的HIV感染者血样(非初次诊断阳性者)；(2)该血样采集时间距HIV-1抗体阳性检测记录时间已超过3个月；(3)接受抗病毒治疗的HIV感染者血样；(4)CD4细胞数＜200个／μl的艾滋病感染者血样。

1.2 试剂和方法试剂盒购自美国Sedia公司，每个试剂盒均在效期内。每盒试剂提供质控品一套，包括阴性质控(NC)、校准品(CAL)、弱阳性质控(LPC)和强阳性质控(HPC)。新近感染检测实验分为初筛试验和确认试验，每个反应板中包含2个NC及各3个CAL、LPC和HPC。按照检测试剂盒说明书对样品进行处理。反应结束后，OD值使用450nm检测波长、630nm参考波长测定，OD值换算成OD标化值(OD-n值)，质控品：ODn值＝质控品的中值OD值/校准品的中值OD；样品：初筛实验样品ODn值＝样品的OD/校准品的中值OD；确认实验各样品的ODn值＝各样品的中值OD值/校准品的中值OD。初筛实验为单孔检测，OD标化值(OD-n值)＞1．2者为既往感染，OD-n值≤1．2者将进行确认试验。确认实验是将样本分3孔重复检测，OD-n值＞0．8者为既往感染，OD-n值≤0．8者为新近感染。实验中得到质控品(NC、LPC和HPC)的OD以及其标化的OD-n必须在试剂盒规定的范围内，该次实验才有效；否则为无效实验，需重复检测。将样品、质控品的OD值输入EXCEL表，计算酶标板的质控品(NC、CAL、LPC和HPC)OD和OD-n的均数、标准差和变异系数(Mean、SD和CV)，计算线性回归分析决定系数R2，比较检测样品初筛和确认实验中OD-n值的一致性。

2 结果

2.1 实验中(包括初筛和确证实验)的OD和OD-n的Mean、SD及变异系数(CV)值的统计结果见表1。

表1 质控品OD(OD-n)的Mean，SD和CV的比较

2.2 根据BED-CEIA方法的实验流程，初筛试验中OD-n＜1．2的样品需要进行BED确认试验(3份重复检测)。统计分析实验中324样品初筛试验和确认试验OD-n的结果，其回归分析决定系数R2为0．9143，实验稳定性可靠。

3 讨论

样品检测的初筛试验和确认试验OD-n值一致性结果较好，其相关系数R2为0．9143，说明BED实验可重复性好，试剂盒本身稳定，实验结果较理想、可靠。变异系数(CV)是用于评价不同抗体滴度血清BED-CEIA测量值的离散程度(信度)。OD-n值是经过标化的OD值，OD值进行标化后测量值的集中度提高，标化是必要的。本实验中质控品HPC和LPC的OD-n值的变异系数(6%～7%)小于OD值的变异系数(12.7%～16.8%)[2]。

本实验阳性质控品(LPC、HPC)的OD-n值的变异系数(6%～7%)与国家参比室的报道6%左右相近，而阴性质控品(NC)的OD值变异系数达33.8%，明显高于参比室的14.4%的值，也高于国外所报道的27．2%，这会使得使用低抗体滴度的标本检测的信度降低[3-6]。由于NC的测量值非常低，数值的稍许改变，会导致变异系数增大，因此对实验室人员的操作和实验室条件要求更加严格，需要进一步提高检测质量控制。在我们实验中出现2次对照和校准品OD值低于试剂盒要求范围，导致实验无效，考虑为孵育温度偏低所影响，这也说明在开展BED-CEIA检测之前，需要对实验室的硬件进行严格的现场检查[7]。

为保证BED检测方法的质量控制要做到：建立BED检测的SOP文件和QA/QC计划；酶标仪和加样器需在校准有效期内；每次试验必须通过质控；任何一次检测出现无效实验，均需进行重复检测，一旦实验结果发生偏倚，要仔细检查试剂和质控品的有效期以及贮存温度；核对洗液的配制浓度；检查酶标仪、洗板机及加样器的校准期；严格按照说明书控制孵育温度和时间，所有上述事项核对无误后，重新进行实验。

通过对实验结果的分析可以看出该方法稳定性和重复性均十分好，但还有不足之处，我们还需进一步提高检测的精确性，做好检测前、检测中和检测后的质量控制，相信BED-CEIA方法会在我省的艾滋病防治事业中会发挥重要作用。

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[7]陆胜,季雄娟.实验室分析前质量控制浅析[J].实验与检验医学, 2012,30(1):46-47.

R512.91，R446.62

A

1674-1129(2013)03-0232-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.03.011

江西省卫生厅重大招标课题(编号：2010-2012)

靳廷丽，1978年出生，硕士，从事艾滋病实验室检测。