采收于春、秋季云南鸡屎藤根体外抗菌对比研究

毛彩艳 申元英袁芝琼 陈红云 季守莲 林丽佳

大理学院，云南 大理 671003

采收于春、秋季云南鸡屎藤根体外抗菌对比研究

毛彩艳 申元英*袁芝琼 陈红云 季守莲 林丽佳

大理学院，云南 大理 671003

目的：了解采收于春、秋季云南鸡屎藤根对四种实验菌的体外抗菌作用。方法：采集于春、秋季的云南鸡屎藤根的水提取液，用试管稀释法、平板计数法对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌进行体外抑菌、杀菌实验。结果：春季采云南鸡屎藤根对金黄色葡萄球菌（25922）的抑菌作用最强，对绿脓杆菌（ATCC27853）的杀菌作用最强，其对金黄色葡萄球菌（25922）的抑菌作用、大肠杆菌 （25923）的抑菌、杀菌作用优于秋季采云南鸡屎藤根。秋季采云南鸡屎藤根对痢疾杆菌 （2a24577）的抑菌作用最强，对绿脓杆菌的杀菌作用最强，其对痢疾杆菌（2a24577）、绿脓杆菌（ATCC27853）的抑菌、杀菌作用，对金黄色葡萄球菌（25922）的抑菌作用均优于春季采云南鸡屎藤根。结论：采集于春、秋两季的云南鸡屎藤根的水提取液对四种实验菌均具有抑菌、杀菌作用。针对不同的致病菌感染导致的疾病，应选择不同季节采收的云南鸡屎藤根治疗。

春、秋季采收；云南鸡屎藤根；体外抗菌；对比研究

中草药的来源、产地、采收季节、炮制加工、煎煮方法的不同，会影响药物有效成分及有效成分的含量，最终都会影响其临床疗效［1］。鸡屎藤［Paederia scandens（Lour.）Merr］，又名斑鸠饭、女青、牛皮冻、臭藤、鸡矢藤等，主要分布在南亚、东北亚、东南亚各国。药材用鸡屎藤主产云南、贵州、四川、广西、广东、福建、安徽、江苏等省［2］。鸡屎藤根在中医临床中常用于治疗消化系统、呼吸系统及皮肤感染性疾病［3－7］。鸡屎藤根是鸡屎藤的主要用药部位，其采收季节的不同，将直接影响其有效成份的含量及对疾病的治疗效果［8］。为了解采收于春、秋季节云南鸡屎藤根对消化系统、呼吸系统及皮肤感染性疾病常见致病菌痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的体外抗菌作用，作者对分别于春、秋两季采收于云南滇中的鸡屎藤根的水提取液对以上四种实验菌的体外抗菌作用进行了对比研究。

1 材料

1.1 药材 鸡屎藤根：采集于云南滇中地区大姚县城西郊坡地，由大理学院药学与化学学院马晓匡教授鉴定为云南鸡屎藤根。把所采集到的鸡屎藤根泥土洗净，切片晒干后用中药粉碎机粉碎过40目筛，把粉碎后的鸡屎藤根置于40℃恒温干燥箱内干燥到恒重，收集于密闭保鲜袋常温保存备用。

1.2 实验菌株 实验所用菌株金黄色葡萄球菌（25922）、痢疾杆菌（2a24577）、大肠杆菌（25923）、绿脓杆菌（ATCC27853），以上菌种均为标准菌，取自大理学院基础医学院病原微生物实验室。

1.3 实验仪器 旋转蒸发器（RE－52A，上海亚荣生化仪器厂生产）；SHZ－D（Ⅲ）循环水式真空泵 （巩义市子华仪器有限责任公司）；高速中药粉碎机（DFY－600）；干燥箱、恒温培养箱、冰箱、定量滤纸 （快速201，灰分：0.01）、酶标仪、96孔板、高压灭菌锅等。

2 方法

2.1 实验药液的制备 称取鸡屎藤根各100g，分别加入500m l超纯水浸泡30min，煮沸后文火煎20min，各煎煮3次，把3次水煎液滤出混合后用定量滤纸过滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩得浸膏春季采收鸡屎藤根13g，秋季采收鸡屎藤根14g。把所得浸膏120℃高压灭菌20min后用无菌水稀释到1g/ml置于4℃冰箱保存备用。

2.2 实验菌液的制备 从保种斜面上挑取菌苔划线接种到营养琼脂平板，置于恒温培养箱37℃下培养18h，挑取单个菌落接种到5ml肉汤中，在恒温培养箱37℃下培养18h，取出置于4℃冰箱保存备用。

2.3 实验菌的浓度计算 用麦氏比浊法得出实验菌细菌浓度标准曲线公式为：y＝41.658x＋0.5502，R2＝0.9985。把制备好的菌液摇匀后，吸取1ml，用生理盐水作10倍顺序稀释为10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6摇匀，用移液枪吸取300μl顺序放入已读取过空白板吸光度值的96孔板的微孔里，另吸取300μl生理盐水作为对照，作好标记［9－10］。用酶标仪读出不同浓度菌液的吸光度，把吸光度数值带入标准曲线公式算出细菌浓度，取浓度为105cfu/ml的菌液为实验菌。

2.4 最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的测定 用试管稀释法测定分别采集于春、秋两季的云南鸡屎藤根对四个实验菌的最低抑菌浓度 （MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。取10支灭菌有塞试管，分别加入营养肉汤1ml，在第1管中加入实验药液1ml，混匀后吸取1ml加入到第2管中，第二管按同样方法混匀后吸取1ml加入到第3管，依次稀释到第9管，第9管混匀后弃去1ml，第10管不加药液作对照［11］。各管分别加入试验菌液0.1m l，混匀置于恒温培养箱37℃下培养18h，肉眼观察无细菌生长的药液最低浓度为最低抑菌浓度 （MIC）。测出最低抑菌浓度（MIC）后，再依次从无细菌生长的各管中吸取0.1m l培养物分别接种于营养琼脂平板，置于恒温培养箱37℃下培养18－24h，数平板上生长的菌落数小于5个的药液最低浓度为最低杀菌浓度 （MBC）［12］。

3 结果与分析

3.1 两个实验药对四种实验菌的最低抑菌浓度（MIC）采集于春、秋季云南鸡屎藤根的水提取液抗四种试验菌的抑菌作用及最低抑菌浓度（MIC）见附表1。对表1中数据进行分析可发现，两种实验药对四种实验菌均有抑菌作用，春季采云南鸡屎藤根水提取液对金黄色葡萄球菌 （25922）的抑菌作用最强，其MIC为0.0000769mg/ml，对痢疾杆菌（2a24577）、大肠杆菌（25923）、绿脓杆菌（ATCC27853）的抑菌作用相当，其MIC均为0.769mg/ml。秋季采云南鸡屎藤根对痢疾杆菌（2a24577）的抑菌作用最强，其MIC为0.0714mg/ml，对金黄色葡萄球菌（25922）和绿脓杆菌（ATCC27853）的抑菌作用次之，其MIC为0.714mg/ml，对大肠杆菌（25923）的抑菌作用最差，其MIC为7.14mg/ml。对比发现春季采云南鸡屎藤根水提取液对金黄色葡萄球菌（25922）、大肠杆菌（25923）的抑菌作用有突出优势。秋季采云南鸡屎藤根水提取液对痢疾杆菌（2a24577）、绿脓杆菌（ATCC27853）的抑菌作用有突出优势。

表1 采收于春、秋季云南鸡屎藤根水提取液对4种实验菌的最低抑菌浓度 （MIC）

3.2 两个实验药对四种实验菌的最低杀菌浓度（MBC）采集于春、秋两季云南鸡屎藤根的水提取液对四种试验菌的杀菌作用及最低杀菌浓度（MBC）见附表2。对表2中数据分析可发现，春、秋季采云南鸡屎藤根水提取液对四种实验菌均有杀菌作用，并且它们对绿脓杆菌（ATCC27853）的杀菌作用相比其它实验菌均较强，其MBC分别为7.69mg/m l、7.14mg/m l，春季采云南鸡屎藤根水提取液对大肠杆菌 （25923）的杀菌作用有突出优势，其MBC为76.9mg/m l。秋季采云南鸡屎藤根水提取液对痢疾杆菌（2a24577）的杀菌作用有突出优势，其MBC为71.4mg/ml。两个实验药对金黄色葡萄球菌（25922）的杀菌作用相比其它实验菌均较弱。

表2 采收于春、秋季云南鸡屎藤根水提取液对4种实验菌的最低杀菌浓度 （MBC）

4 讨论

通过对采集于春、秋季云南鸡屎藤根的水提取液对四种实验菌的体外抑菌、杀菌作用的实验数据分析得出，采集于春、秋两季的云南鸡屎藤根的水提取液对四种实验菌均具有抑菌、杀菌作用。对四种实验菌的抑菌、杀菌作用相比较，春季采云南鸡屎藤根对金黄色葡萄球菌 （25922）的抑菌作用最强，对绿脓杆菌（ATCC27853）的杀菌作用最强，其对金黄色葡萄球菌 （25922）的抑菌作用、大肠杆菌 （25923）的抑菌、杀菌作用优于秋季采云南鸡屎藤根。秋季采云南鸡屎藤根对痢疾杆菌（2a24577）的抑菌作用最强，对绿脓杆菌的杀菌作用最强，其对痢疾杆菌（2a24577）、绿脓杆菌（ATCC27853）的抑菌、杀菌作用、对金黄色葡萄球菌 （25922）的抑菌作用均优于春季采云南鸡屎藤根。数据分析结果表明，在用云南鸡屎藤根治疗由痢疾杆菌感染引起的疾病时，宜首选秋季采挖的鸡屎藤根，治疗由大肠杆菌感染引起的疾病时，宜首选春季采挖的鸡屎藤根。两个季节采挖的鸡屎藤根均适宜用于治疗由金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌感染引起的疾病，并且对绿脓杆菌感染引起的疾病的治疗效果更优。所以，为了提高药物的临床疗效，在用云南鸡屎藤水煎液治疗以上四种实验菌感染而引起的感染性疾病时，我们应根据不同的致病菌，选择不同季节采收的云南鸡屎藤治疗。

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R285.5

A

1007－8517（2013）08－0006－02

2013.03.12）

大理学院青年教师科研基金资助项目 （编号：KYQN2010－58）；2、“云南省药用昆虫及蛛形类资源开发利用工程实验室”建设项目。

毛彩艳，女，（1981－），研究实习员，研究领域：中西医结合临床、流行病与卫生统计学、管理学；研究方向：分子流行病学、药物流行病学、高校管理。

*通讯作者：申元英，女，（1963－），职称：教授研究领域：感染性疾病及传染病；临床医学；基础医学；研究方向：医学微生物与免疫学研究。