益生菌在控制母猪肠道梭菌上的应用

2013-02-20张媛媛鄢红国阳艳林黄广明

饲料工业 2013年15期

■张媛媛罗正鄢红国阳艳林黄广明劳晔

（建明工业（珠海）有限公司，广东珠海 519040）

产气荚膜梭菌又被称为魏氏梭菌，是革兰氏阳性致病菌，根据分泌的毒素不同被分为A、B、C、D 4个型。其中A型和C型对猪的影响最大，C型产气荚膜梭菌是引起仔猪红痢的病原。仔猪在3 d至1周内发病，发病急、病程短、死亡率高、中大猪有时突然死亡，常来不及治疗，给养殖户带来了巨大的经济损失。产气荚膜梭菌广泛分布在自然环境当中，如泥土、河水、饲料、粪便等，新生仔猪主要通过粪口途径感染，由于新生仔猪对病原没有抵抗能力，梭菌在肠道后端迅速大量繁殖，产生大量毒素和气体，造成新生仔猪死亡。没有健康的母猪就没有健康的小猪，因此在仔猪梭菌性疾病的控制必须从母猪开始。目前国内控制梭菌主要是在饲料中添加抗革兰氏阳性菌药物或者广谱抗生素，很少有人采取免疫的方法。由于长时间使用抗生素导致梭菌的耐药性显著增加，用药成本也随之增加，大大降低了养殖的盈利能力，同时也带来了药物残留超标，急需新的有效的解决方案。

克洛生TM是建明工业开发的专门用于控制畜禽肠道梭菌，维持肠道平衡的益生菌，主要成分是获得专利的枯草芽孢杆菌PB6（Bacillius subtilis PB6）。克洛生进入动物肠道后会迅速繁殖，产生表面素(Surfactin)A和表面素B，这两种分子体外实验被证明能有效抑制产气荚膜梭菌生长，克洛生在多个国家被批准作为饲料添加剂用于梭菌性疾病的预防。本研究旨在通过动物试验来验证克洛生在我国猪体内抑制梭菌的能力，同时了解母猪梭菌感染情况，为无抗健康养殖场提供新的梭菌防控选择方案。

1 材料和方法

1.1 材料

梭菌含量检测试剂盒和克洛生11粉剂由建明工业（珠海）有限公司提供。怀孕母猪、哺乳母猪和试验场地由广东某猪场提供。怀孕母猪试验期间分别饲喂于限位栏中，每头哺乳母猪与各自的小猪在一个产床内。

1.2 试验方法

试验最先在没有使用克洛生的情况下检测怀孕母猪和哺乳母猪粪便中梭菌的含量，检测结束后将克洛生拌料饲喂试验母猪，添加剂量为200 g/t。在饲喂含克洛生饲料12 d后分别采集所有试验母猪的粪便，检测梭菌的含量。

梭菌含量检测按照试剂盒说明书进行操作，在第4 h读1次结果，第5 h读1次结果用于判定母猪梭菌感染情况，判断标准见表1。梭菌检测试剂盒的主要原理是梭菌可以代谢含硫氨基酸产生硫化氢气体，在碱性条件下硫化氢气体与亚铁离子反应生成不溶的黑色硫化亚铁沉淀，反应方程式如下：

如果粪便中梭菌含量越高，在培养的过程中相同时间繁殖出的产气荚膜梭菌就越多，代谢产生的硫化氢也更多，因此生成的硫化亚铁也会相应增加，同理产生相同量黑色沉淀菌含量越高所需的时间也就越短。因此可以根据培养过程中开始产生黑色沉淀的时间以及量来判定粪便中产气荚膜梭菌的含量。表1为梭菌含量与出现颜色反应的对应关系。

表1 梭菌含量与颜色反应的关系

2 试验结果（见图1、图2、图3）

按照梭菌检测试剂盒说明书操作，在未饲喂克洛生前对20头怀孕母猪进行粪便梭菌含量检测，分别在4 h、5 h以及6 h记录试验结果。图1a、1b为20头怀孕母猪4 h显色结果，此时有8个样明显变黑。图2a、2b为20头怀孕母猪5 h显色结果，此时有15个样明显变黑。说明该20头怀孕母猪，有8头是梭菌严重感染，有7头是梭菌轻度感染。

图1 怀孕母猪使用克洛生之前（a，b）和使用克洛生之后（c，d）粪便梭菌含量4 h检测结果

图3a为哺乳母猪4 h显色结果，此时有3个样品变黑。图4a为哺乳母猪5 h显色结果，有3个样品变黑。说明该5头哺乳母猪中有3头是梭菌严重感染。

图2 怀孕母猪使用克洛生之前（a、b）和使用克洛生之后（c、d）粪便梭菌含量5 h检测结果

图3哺乳母猪使用克洛生之前（a）和使用克洛生之后（b）粪便梭菌含量4 h检测结果

通过变色情况初步判断母猪感染梭菌的情况十分严重，因此所有母猪使用添加克洛生200 g/t的饲料进行饲喂，共12 d。采集相同怀孕母猪和哺乳母猪粪便检查梭菌含量。图1c、1d为饲喂克洛生后20头哺乳母猪4 h梭菌检测显色结果，图2c、2d为饲喂克洛生后20头怀孕母猪5 h梭菌检测显色结果，图3b、4b分别为5头怀孕母猪饲喂克洛生后4 h和5 h梭菌检查显色结果。从图上可以看出在饲喂克洛生后试管变黑的数量和程度明显下降。

图4 哺乳母猪使用克洛生之前（a）和使用克洛生之后（b）粪便梭菌含量5 h检测结果

3 分析和讨论

中国猪场母猪携带梭菌的情况并不清楚，本研究利用梭菌检测试剂盒对猪场梭菌含量进行调查。被检测的25头母猪中有18头梭菌超标，严重感染的怀孕母猪和哺乳母猪分别达到75%和60%，提示母猪携带梭菌较为普遍，对母猪感染情况进行统计（见表2）。

表2 母猪使用克洛生前后梭菌携带情况统计

在使用克洛生12 d后再次检测可以看出，严重感染的怀孕母猪和哺乳母猪总数从11头减少到2头，总计减少9头，改善率81.3%。轻度感染母猪由7头减少到3头，减少4头，改善率达到57.1%。改善最明显的是哺乳母猪，使用克洛生后3头母猪全部从重度感染变为正常，改善率达到100%。其中轻度感染母猪变化看上去不如重度感染母猪变化明显，可能是因为原来重度感染母猪，使用克洛生后从重度感染变成了轻度感染，掩盖了克洛生对轻度感染梭菌母猪的治疗效果。饲喂含克洛生200 g/t饲料12 d后所有母猪梭菌超标情况由18头变为5头，有13头母猪恢复正常，治疗有效率达到72%。该试验结果证明克洛生可以有效减少猪肠道中的梭菌，改善动物健康状态，这与国外发表的文章结果一致，也与克洛生体外抑制梭菌的结果一致。