羽毛肽粉对日本鳗鲡饲料氨基酸平衡的影响

2013-02-20福建省农业科学院中心实验室福建福州350003福建省精密仪器农业测试重点实验室福建福州350003福建正源饲料有限公司福建莆田351111

饲料工业 2013年18期

（1.福建省农业科学院中心实验室，福建福州 350003；2.福建省精密仪器农业测试重点实验室，福建福州 350003；3.福建正源饲料有限公司，福建莆田 351111）

鳗鲡是一种深受国内外消费者欢迎的高档水产品，营养价值非常高，被称作水中的软黄金。从20世纪80年代中后期开始，鳗鱼养殖在我国大规模开展，并形成了一条从苗种捕捞、饲料加工、鳗鲡养殖、加工出口的完整产业链，养殖种类涉及日本鳗鲡（Anguilla japonica）、欧洲鳗鲡（Anguilla an⁃guilla）、美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)等。鳗鲡是一种高蛋白需求的水产动物，饲料中鱼粉含量较高。近年来，水产养殖工厂化、集约化的快速发展，优质饲料蛋白源鱼粉的需求量连年攀升，价格不断高涨，供不应求[1]。

国内外大量学者通过体外降解技术，已可制备肽含量丰富的饲用羽毛肽粉，已在消化、吸收上增强了羽毛粉产品在饲料领域的应用潜力[2-9]。氨基酸营养平衡对水产动物的消化、生长均具有决定性影响[10]。饲料限制性氨基酸的种类、顺序因鱼种及饲料配方差异而不同，如谷物类的主要限制性氨基酸为 Lys、Met，豆粕为 Met、Phe[10]。肌肉组织是动物最大的氨基酸代谢场所，以动物组织（肌肉或胴体）的氨基酸组成作为参比蛋白是评价饲料氨基酸平衡的最佳选择之一[1,7]。本研究根据日本鳗鲡营养需求，配制了含不同量羽毛肽粉鳗鲡饲料，以日本鳗鲡肌肉氨基酸组成为参考模式，从氨基酸平衡角度分析羽毛肽粉在鳗鲡饲料中的应用前景。

1 材料与方法

1.1 试验材料和仪器

1.1.1 材料

饲用羽毛肽粉，自制[11]；日本鳗鲡，购自长乐鳗鲡养殖场；鱼粉、淀粉等其它饲料原料，由福建正源饲料有限公司提供。

1.1.2 试剂

浓盐酸，优级纯；混合氨基酸标准品（sigmaaldrich）；缓冲液、茚三酮溶液(GB/T 5009.124.2003)。

1.1.3 仪器

电子分析天平（METTLER TOLEDO AL204）、全自动氨基酸分析仪（日立L8800）、恒温干燥箱、水解管（用去离子水冲洗干净，烘干备用）。

1.2 方法

1.2.1 饲料生产

根据SC/T 1004—2010鳗鲡配合饲料，设计4种符合标准的等氮饲料，配方见表1。由福建正源饲料公司生产，微量成分添加采取逐级扩大法，经过混合-粉碎-混合，饲料为粉末状，100%过80目筛，80%过100目筛。

表1 饲料配方（%）

1.2.2 氨基酸组成测定[12]

取日本鳗鲡各部位肌肉，混匀，烘干，粉碎，称取适量鳗鲡肌肉样品及4组饲料，置于水解管中。加入6 mol/l盐酸10 ml，抽真空，充入高纯氮气，再抽真空充氮气，重复3次，封口，110℃左右水解22 h，冷却。打开水解管，过滤，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50 ml容量瓶内，用去离子水定容。取滤液1 ml于5 ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃条件下干燥，残留物用1～2 ml蒸馏水溶解，再干燥，反复两次，蒸干，溶解于1 ml pH值2.2的缓冲液。用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样液的氨基酸含量。每个样品均做3组平行。

1.2.3 饲料氨基酸营养评价

以日本鳗鲡肌肉氨基酸组成为参考模式利用国际通用的氨基酸比值系数法，对4个组的饲料作为日本鳗鲡饲料的氨基酸平衡性进行评价。具体指标包括氨基酸总量、必需氨基酸组成模式、氨基酸比值系数(RC)、氨基酸比值系数分（SRC）。

RC=氨基酸比值/氨基酸比值之均数；

SRC=100-CV×100。

式中：Ax——样品中氨基酸含量；

As——参比蛋白中氨基酸含量；

CV——RC的变异系数，CV=标准差/均数。

如果饲料氨基酸组成与日本鳗鲡肌肉氨基酸组成完全一致，则各氨基酸的RC均应等于1。RC＞1，表示此组饲料氨基酸在日本鳗鲡肌肉氨基酸组成模式中过剩，反之则表示此类氨基酸相对不足。RC最小的氨基酸为第一限制氨基酸，以此类推。

SRC的意义为：当饲料氨基酸组成与日本鳗鲡肌肉氨基酸组成一致，则CV=0，SRC=100。SRC越小，蛋白源营养价值越差，SRC越接近100，其营养价值相对较高。

2 结果

2.1 4组饲料氨基酸组成

4组饲料氨基酸种类齐全，如表2所示。氨基酸总量分别达到42.41%、41.39%、39.32%、42.69%。均具有水产动物所需的各种必需或半必需氨基酸[10，12]，但4#料 Lys含量(1.94%)略低于SC/T1004—2010要求(2.1%)。其中必需氨基酸含量为20.51%、20.02%、18.15%、18.81%，占氨基酸总量的48.36%、48.37%、46.16%、44.06%，与非必需氨基酸的比值为93.65%、93.68%、85.73%、78.77%；呈味氨基酸含量为20.28%、19.80%、19.62%、21.98%，占氨基酸总量的47.82%、47.84%、49.90%、51.49%。鲜味氨基酸Asp和Glu的含量为10.21%、9.67%、8.88%、8.99%；甘味氨基酸Gly和Ala的含量为5.73%、5.57%、5.71%、6.36%；与甘味有关的Ser和Pro的含量为4.34%、4.56%、5.03%、6.63%。可见，随着羽毛肽粉添加量的增加，与风味相关的氨基酸含量呈增加趋势，饲料的风味明显增强。

表2 日本鳗鲡和4组饲料氨基酸组成（%）

2.2 氨基酸比值系数法评价饲料蛋白源营养价值

氨基酸的比值系数如表3所示，其中Ile、Leu、Thr、Val、Phe+Tyr、Arg的相对含量基本达到或超过日本鳗鲡的生长及生理需要。参照SC/T1004—2010鳗鲡配合饲料，除4#组料的Lys含量略低外，其它组并无氨基酸问题。但从比值系数可以看出，4组饲料中氨基酸相对含量无法满足日本鳗鲡生长及生理需要的有Lys、His、Met+Cys。其中Lys、His在全鱼粉组中已出现不足现象，在添加饲用羽毛肽粉后，短缺继续增大。但是Met+Cys的平衡性在添加适量饲用羽毛肽粉后得到明显改善。但当饲用羽毛肽粉添加量超过10%后，Met+Cys的RC值降低了，结合表1分析认为是由于饲用羽毛肽粉中Met含量减少引起的。饲用羽毛肽粉添加对饲料氨基酸组成中Lys、Met+Cys、His影响较大，RC变化幅度分别达到0.43、0.35、0.22。其它变化并不大，氨基酸组成也仅略有差异。

表3 4组饲料氨基酸比值系数

2.3 羽毛相关产品作为饲料蛋白源的限制性氨基酸

饲用羽毛肽粉添加量对日本鳗鲡饲料中限制性氨基酸的排序及综合平衡结果（氨基酸比值系数分SRC）如表4所示。SRC值随着饲用羽毛肽粉添加量增加而降低。根据表1设计的日本鳗鲡饲料第一限制性氨基酸均为His。可见，以日本鳗鲡肌肉氨基酸组成模式作为参考，饲用羽毛肽粉作为日本鳗鲡饲料蛋白源还存在一定不足，但实际应用结果还有待养殖试验结果进一步验证。

1#鱼粉组与2#、3#、4#组相比，鱼粉的氨基酸组成模式更接近日本鳗鲡要求。但饲用羽毛肽粉配制的饲料在Met+Cys上更具优势。此外，饲用羽毛肽粉高风味、鲜味氨基酸含量使其在鳗鲡饲料上还是具有一定的应用潜力。

表4 4组饲料限制性氨基酸排序

3 讨论

水产饲料优劣不仅取决于氨基酸平衡及消化吸收率，在一定程度上也取决于适口性——呈鲜味的天冬氨酸和谷氨酸、呈甘味的甘氨酸和丙氨酸以及与甘味有关的脯氨酸和丝氨酸的含量[13-14]。氨基酸已被公认是鱼类、甲壳类等水产动物的诱食剂，可以起到良好诱食作用。研究表明[15-17]，龙虾的嗅觉神经元数目对半胱氨酸、谷氨酸等物质能产生不同的反应。Gly对真鲷、红鳍东方鲀有良好的诱食效果。但不同的氨基酸种类对不同的水产动物诱食效果也不尽相同，如0.05 mol/l的Gly对鲤鱼有强烈的诱食作用，但对鲫鱼却有排斥作用。Val对肉食性鱼类诱食效果较好。同时，羽毛肽粉中部分氨基酸短缺的现象可以通过选取与相应氨基酸含量较高的互补的蛋白源进行搭配，如富含Lys的蚕豆粉浆蛋白粉、血粉等、富含Thr、Trp的血粉等、富含His的豆粕、玉米粉等[18]，或直接添加相应的限制性氨基酸[14]。

因此，饲用羽毛肽粉添加后虽对日本鳗鲡饲料氨基酸均衡性有所影响，通过与适当的蛋白原料相配合后，其富含的风味氨基酸有望提高饲料的风味，刺激鳗鲡摄食，增加摄食量，改善植物蛋白的适口性。具体的养殖效果及配方设计有待后续进一步研究。