猪肉中克伦特罗（瘦肉精）的检测能力验证结果分析

2013-01-30张清智王丽丽牛增元叶曦雯

食品研究与开发 2013年22期

张清智，王丽丽，牛增元，叶曦雯

（1.山东出入境检验检疫局，山东青岛266002；2.青岛市崂山区北宅街道办事处，山东青岛266104）

克伦特罗属于苯乙胺类药物，能减缓或减少脂肪沉积，增加肌肉蛋白沉积，使营养重新分配，从而显著提高动物的瘦肉率、增重和提高饲料转化率[1-2]。长期食用含有克伦特罗残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤[3-4]。另外还引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。给患者的精神、健康及正常生活工作造成严重危害[5-7]。

克伦特罗是食品安全和进出口猪肉等动物源食品中一个很重要的监控项目，由于克伦特罗是禁用药物，最低要求执行限最新要求为0.05 μg/kg（痕量级），对检测实验室的技术能力和检测手段要求高[8]。因此，开展猪肉中克伦特罗的检测能力验证对于了解和监督国内各检测机构对克伦特罗检测方法的掌握程度以及检验结果的可信度和可靠性都具有十分重要的意义。对于监控各实验室的持续检测能力，确认其认可项目的持续有效性具有极为重要的现实意义。

1 参加实验室概述

全国共有127 家实验室报名参加本次能力验证计划，其中来自检验检疫系统实验室33 家，占总数的25.98%；各产品质检中心、质检院的实验室52 家，占总数的40.94%；其他政府实验室19 家，占总数的14.96%；企业及社会实验室23 家，占总数的18.11%。

2 样品均匀性检验和稳定性检验

2.1 均匀性检验

依据CNAS-GL-03：2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》要求，将分装好的样品按随机数表各随机抽取10 份用于均匀性检验。采用SN/T 1924-2011《进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》的测试方法对样品中的克伦特罗含量进行检测[9]，每个样品在重复性条件下按随机次序测试2次。最终结果采用单因子方差分析法进行统计处理。

样品间自由度为9，样品内自由度为10，在约定的自由度水平α=0.05 的显著水平下，查表得F 临界值F0.05(9，10)=3.02。计算样品检测结果的F 值均

2.2 稳定性检验

依据CNAS-GL03：2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》要求，随机抽取6 个样品，每个样品独立测定1 次。与t 临界值t0.05(14)=1.761 相比较，计算得到的t 值均小于t 临界值，这表明在α=0.05 显著性水平时，样品中克伦特罗含量是稳定的。

3 统计评价方法

本计划采用稳健（Robust）统计技术确定指定值和变动性量度值（目标标准偏差），即采用稳健统计的中位值作为指定值，标准化四分位距（NIQR）作为变动性度量值（目标标准偏差），计算各实验室结果的Z 比分数（Z 值）。

对参加实验室的结果xi，按公式Z=（Xi-Xa）σ 转化成Z 值，公式中xi代表各实验室的结果，xa是指定值，σ 是能力评价标准偏差。按Z 值的大小评价各实验室的技术能力。

评价原则：|Z|≤2 为满意结果；

2<|Z|<3 为存有问题的结果（可疑值）；

|Z|≥3 为不满意结果（离群值）。

4 测试结果的总体情况

本次能力验证共127 家实验室报名，第一次共回收126 家实验室的测试结果。满意结果数为106 家，占结果总数的84.1%，可疑结果数为6 家，占结果总数的4.8%，不满意结果14 家，占结果总数的11.1%。

5 技术分析与建议

5.1 采用不同检测方法的差异

克伦特罗的检测方法有液相色谱-串联质谱法（HPLC/MS/MS）、气相色谱-质谱法（GC/MS）、液相色谱法（HPLC）等[10]，可以满足我国关于禁用药物的法定检测要求[11]；本次能力验证各参加实验室采用的检测方法统计见表1。

表1 实验室采用的方法统计Table 1 Laboratory Used Statistical Method

5.2 是否采用酶解的差异

本次能力验证所用的猪肉样品为实际阳性样品，克伦特罗药物在猪体内会代谢为克伦特罗葡萄糖苷酸[12-14]，组织中大部分以结合态形式存在，因而为准确测量样品中克伦特罗的含量，协调者在作业指导书中建议在前处理过程中须有水解步骤，也可以减少SPE净化时堵塞柱子。在是否酶解这一步骤的操作上，共有19 家实验室没有选择酶解，其中仅有一家实验室结果不满意，可以看出在不堵塞SPE 净化柱子的前提下，是否酶解对检测猪肉中克伦特罗的含量影响不大。这也再次证实了苯胺型的β-受体激动剂与组织结合不紧密，不酶解也可以，但不酶解样品提取液易堵塞SPE 小柱，所以对克伦特罗仍建议酶解。

5.3 定量方法的差异

127 家参加实验室中有90 家采用内标法定量，其中有11 家结果可疑或不满意，占采用内标法的12.2%。有36 家实验室采用外标法定量，其中有9 家实验室结果可疑或不满意，占采用外标法的25.0%。可以看出采用内标法定量能够消除基质干扰和回收率等的影响，比外标法更能够准确的测定猪肉中盐酸克伦特罗的含量。

在全部参加实验室中，有14 家实验室采用单点定量，其中有两家实验室结果可疑或不满意，占使用采用单点定量实验室的14.3%，采用工作曲线定量的实验室中结果可疑或不满意的实验室占16.1%，可以看出在接近被测克伦特罗浓度的情况下，使用单点定量或者线性定量对结果影响不显著。

5.4 采用不同检测仪器的差异

在使用仪器方面，有119 家实验室选择使用含有LC/MS/MS 仪器的方法，其中有16 家实验室结果可疑或不满意，占使用LC/MS/MS 仪器的13.4%，有7 家实验室选择使用含有GC/MS 方法，其中有4 家实验室结果可疑或不满意，占使用GC/MS 仪器的57.1%，有一家单位使用液相色谱仪进行检测而没有给出结果。可以看出，在检测猪肉中克伦特罗的方法上，选择使用GC/MS 的检测方法，不如选择使用LC/MS/MS 的方法。

5.5 采用不同净化方式的差异

在净化方式方面，共有10 家实验室采用液/液萃取方式进行净化，其中仅有1 家实验室结果不满意，占采用液/液萃取净化方式实验室的10.0%；采用SPE 小柱净化方式的实验室中结果可疑或不满意的实验室占16.4%，可以看出采用SPE 小柱净化和采用液/液萃取净化方式，对检测猪肉中克伦特罗的影响不显著。

6 结语

全国范围内不同行业实验室共有127 家实验室参加本次能力验证，通过稳健统计技术，初次满意率为84.1%，表明国内的大部分检测实验室都掌握了克伦特罗的检测能力。部分实验室出现可疑或者不满意现象的原因可能是由于前处理方法操作不当，固相萃取小柱应用不当，导致结果偏低；标准曲线相关性差，试样浓度偏离线性范围等原因造成。

因此，建议参加实验室参照合适的检测标准，并对猪肉进行酶解，使用合适的标准曲线，采用经过实验室验证的净化方式，选择使用LC/MS/MS 的相关方法进行实验操作，并结合自身的实际，认真对本实验室的数据进行评估，真正找出差距和问题所在，制定纠正措施，有效整改，持续保持和提高技术能力及检测水平。

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