金银花中绿原酸的提取工艺及制剂研究进展

2013-01-22王爱萍郑茂东徐今宁

中国药业 2013年14期

王爱萍，郑茂东，徐今宁，闪云

(河北北方学院附属第一医院，河北张家口 075000)

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb的干燥花蕾，为常用的清热解毒中药，富含挥发油、黄酮类、三菇类及有机酸等。其主要有效成分绿原酸及异绿原酸[1]具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆等多种药理作用，广泛应用于临床。现就金银花中绿原酸的提取工艺及其有关制剂领域的研究开发进行介绍。

1 绿原酸提取工艺

1.1 水提法

取适量干燥并粉碎的金银花粉末，适宜温度下水浴加热，将提取液在一定温度下减压浓缩即得。梅林等[2]采用正交试验优选出水提金银花最佳条件为预浸泡8 h，15倍溶剂，80℃下浸提1 h，提取率为4.85%，影响因素的主次顺序为提取温度＞提取时间＞预浸泡时间＞溶剂倍数。该工艺条件简单、稳定、可行，绿原酸提取率可达5.57%。金银花传统多用水提工艺，且现代药理学也多用金银花水煎剂进行药效学试验。

1.2 醇提法

称取金银花粉末适量，采用正交试验设计，考察乙醇用量、乙醇浓度、提取次数、提取时间的影响，分别进行提取后测定提取率，选择最佳提取工艺。王晓慈[3]的试验证明，绿原酸在乙醇中的溶解性优于水中，且乙醇浓度对绿原酸的溶出度影响明显，最佳工艺为10倍量的75%的乙醇回流提取2次，每次提取1.5 h。

1.3 水提醇沉法

钱芳等[4]采用正交试验法，以绿原酸的含量为考核指标，优选出感冒口服液醇沉、水沉的最佳工艺条件为，煎煮2次，每次1 h，加水量为10倍，合并提取液，滤过，醇沉浓度为60%，水沉时药液量与加水量比为1∶1;冷藏24 h，滤过，滤液回收乙醇至尽，再浓缩即得。该最佳工艺条件适合批量生产。

1.4 酶解法

取适量干燥并粉碎的金银花粉末，刘佳佳等[5]采用正交试验考察酶的用量、酶解时间、酶处理温度对提取率的影响，选择最佳提取工艺。酶提取是一项很有前途的新技术，酶反应可较温和地将植物组织分解，可较大幅度提高提取效率。生产量大、廉价的酶、合理的提取工艺条件，是未来酶提取法完全适于工业化大生产的基础。

1.5 冷浸法

称取金银花细粉适量，邢俊波等[6]采用正交试验法，对冷浸法、水提石灰乳沉法、渗漉法进行研究，结果加10倍量的95%乙醇，冷浸48 h，离心30 min，浓缩，真空干燥，为优选的最佳工艺。

1.6 水提石灰乳沉法[6]

称取金银花细粉适量，加10倍量的水煎煮2 h，过滤;药渣再用8倍量的水煎煮2 h，过滤，合并滤液，浓缩至药材量的4～5倍，加20%石灰乳调pH至12，滤取沉淀物;沉淀物加2倍量的95%乙醇混悬，用50%硫酸调pH至3～4，充分搅拌过滤，滤液用40%NaOH中和调pH至6～7，再过滤，真空干燥得干膏。

1.7 渗漉法[6]

称取金银花细粉适量，95%乙醇浸泡药材24 h;再总共用10倍量的95%乙醇渗漉24 h;渗漉液离心30 min，离心液浓缩，真空干燥即得。渗漉法适用于提取热敏性、挥发性或剧毒类中草药物料和有效成分含量较低或要求浸出液浓度较高的中草药物料。

1.8 异戊醇法[7]

异戊醇法是将生药粗粉用酸性乙醇渗流，然后将渗液用5%NaOH调制至中性，回收乙醇;再将浓缩液用浓盐酸调pH至2～3，酸液加异戊醇提取，得异戊醇层;加入5%NaOH使异戊醇成中性，此时绿原酸转入水相，上层得异戊醇可复用;将水相浓缩后即得绿原酸粗品。

1.9 铅沉法[7]

铅沉法是将生药用氯仿或乙醚回流脱脂，然后用95%乙醇回流提取;提取液浓缩成膏后，加入硅藻土混合均匀，加入热水，搅拌溶解，滤去不溶物，向滤液中加入饱和中性乙酸铅溶液至不再产生沉淀为止;用离心收集沉淀并用水洗涤;将沉淀悬浮于水中通入硫化氢(HZS)气体至产生硫化铅(PbS)沉淀为止;用抽滤法除取PbS;滤液用乙酸乙酯反复萃取，合并萃取液，浓缩;将浓缩液放入冰箱冷藏室静置，绿原酸粗品析出。

1.10 超滤法

王永香等[8]考察聚砜材质中空纤维超滤膜精制金银花提取液的适用性，并进行膜超滤过程优化设计。取金银花适量，加15，10倍量的水，煎煮2次，每次2 h，滤过，合并滤液;滤液浓缩至原体积的2/5后，采用中空纤维超滤膜超滤，减压浓缩，真空干燥得干膏。精制药液时选择合适孔径的膜及最佳膜滤条件，能有效提高生产效率。金银花药材中主要有效成分绿原酸不稳定，遇热易分解，采用超滤法可以避免浓缩过程中绿原酸的破坏。超滤技术不仅去杂质效果好，还能提高药液中绿原酸含量。

1.11 大孔树脂吸附法

黄云等[9]用大孔吸附树脂处理金银花。取金银花适量，加15，10倍量的水，90℃提取2次，每次2 h;滤过，合并滤液，滤液加至已预处理的大孔吸附树脂上，加水洗脱;收集洗脱液，减压浓缩。大孔树脂吸附是一类有机高聚物吸附剂，吸附作用是通过表面吸附、表面电性或形成氢键等来实现的，目前已较广泛应用于中药新药的开发和中成药的生产中，主要用于分离和提纯过程。

1.12 超声波提取法

曹渊等[10]以金银花中绿原酸的含量为指标，考察了水蒸气蒸馏法、超声波提取法和醇提法提取金银花中绿原酸优劣，确定超声法为最佳提取方法。通过正交试验，以溶剂浓度、预浸时间、超声时间和pH 4个因素对超声法的提取工艺进行优选。结果最佳提取工艺条件为乙醇浓度为60%，pH=1，预浸12 h，超声提取2次，每次45 min;此条件下绿原酸提取率可达5.62%;影响程度大小依次为pH＞预浸时间＞超声时间＞溶剂浓度。结果表明，超声波提取工艺简单，提取条件温和，提取率高，可应用于绿原酸的大规模产业化提取。

1.13 微波提取法[11]

精密称取金银花药材，加水适量，采用正交试验设计方法优选金银花微波提取工艺，考察提取时间、提取温度、提取次数的影响。分别进行提取后，过滤，测定提取率，选择最佳提取工艺。

1.14 减压内部沸腾法

减压内部沸腾法是用少量低沸点解吸剂润湿被提取物料粉末，使其中的有效成分充分解吸，然后加入一定温度的热提取溶剂并迅速减压，使渗透到植物组织内部的解吸剂首先沸腾，强化提取过程。郝瑞然等[12]用减压内部沸腾法提取金银花中绿原酸，在70℃下提取绿原酸的得率为9.0%，浸膏中绿原酸含量为18.5%，提取2次共需时间8 min。与传统方法相比，提取温度减少30℃，提取速度仍然快11.5倍，杂质提出量减少12%。因此，与传统的提取方法及两步法相比，减压内部沸腾法具有提取温度低、浸膏中绿原酸含量高、杂质含量小等优点。

1.15 超临界CO2流体萃取分离提取法

目前，国外超临界流体技术已在蛋白质药物的提纯、调制药物的多晶体、制备药物包合物、药物微粉包衣等多方面展开研究。国内超临界流体技术是从药用植物中分离有效成分的先进技术手段之一。阳元娥[13]对超声强化超临界CO2萃取葵粕绿原酸工艺进行研究，考察了萃取温度、压力、时间、流体流量和超声功率对超声超临界CO2萃取绿原酸的影响。结果表明，超声波的加入可以缩短超临界CO2萃取时间、降低CO2流量和提高萃取率。由于该工艺全过程不用有机溶剂，因此萃取物绝无残留的溶剂物质，从而防止了提取过程中有害物对人体的伤害和对环境的污染，是最干净的提取方法。

2 药物制剂

2.1 注射制剂

注射液:应用于临床的有双黄连注射液、银黄注射液、金银花注射液、清开灵注射液等，临床广泛应用于解热、抗炎、抗病毒。研究证实，金银花有明显的解热、抗炎作用，动物试验研究中给大鼠注射给药时，能明显抑制由蛋清、角叉菜胶等所致大鼠脚爪水肿，并能明显抑制大鼠巴豆油性肉芽囊的炎性渗出和炎性增生[14]。金银花又有一定抗病毒作用，能抑制流感病毒、肠道ECHOⅡ，疱疹病毒的致细胞病变，抑制病毒在肺内繁殖，缓解流感病毒性肺炎;抑制流感杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌及肺炎球菌、金黄色葡萄球菌的繁殖生长，降低金黄色葡萄球菌所致小鼠的死亡率[15]。金银花注射液肌内注射治疗急性扁桃体炎，能使体温较快下降，局部红肿渗出消失。

粉针剂:双黄连粉针对急性感染性疾病，如感冒、流感、急性上呼吸道感染、肺炎、急性菌痢、钩端螺旋体病、急性皮肤感染等作用良好。

2.2 口服制剂

金银花口服制剂，包括汤剂、流浸膏、合剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂等，具有疗效确切、使用安全、无耐药性等优点。多种重要温病方剂均以金银花为主药。随着现代药理学研究的进展，金银花以其清热解毒之功，广泛用于多种急性感染性疾病，如感冒、流感、急性上呼吸道感染、肺炎、急性菌痢、钩端螺旋体病、急性皮肤感染等。常用制剂、方剂有，银翘散用于温热病初起，清营汤，治热邪入营;银翘马勃散，治咽喉肿痛;银楂芩连汤等，治热毒血痢;五味消毒饮，治疗热毒痈疮;双黄连胶囊，清热解毒、清宣风热等。其他口服制剂如双黄连口服液、金银花胶囊、金银花片、银黄散、银翘解毒片、复方双花片、三花鼻康胶囊、复方金银花颗粒等。

2.3 气雾剂

中药气雾剂特别是经呼吸道吸入的气雾剂，为中药的临床使用提供了科学的新型给药途径。它提高了局部药物浓度，克服了全身用药时血药浓度达到一定值才能对局部感染或其他疾病发挥作用的缺点。肖辛垣等[16]应用咽喉康雾化吸入剂，以超声雾化吸入法治疗54例慢性咽炎患者，总有效率达92.59%，明显优于对照组的76.19%。由于采用雾化吸入使药液直接作用于咽部黏膜，而药物经黏膜吸收可以避免首过效应，提高了生物利用度，迅速发挥疗效，同时给药方法简便，患者易于接受。

2.4 凝胶剂

王小青[17]将金银花和连翘制成外用银花连翘水凝胶剂，开发成为具有抗菌、抗炎和抗病毒作用的免洗洗手液，作为保障手部卫生、预防甲型H1N1流感的有效武器，抑菌效果优异，抑菌率达100%。夏德洪[18]用双黄冰凝胶剂治疗带状疱疹，通过对抗病毒蛋白达到抗病毒的作用。在临床观察中，用药1疗程，停药随时间的推移，治愈率及显效率均稳步提高。临床观察109例，其中痊愈44例，有效56例，总有效率100%。张红梅等[19]用蒲公英、金银花、冰片制成蒲金凝胶剂，可用于热毒疮疡、乳痈肿痛、消痈散结及放射灼伤的皮肤修复的治疗。

2.5 含漱剂

周燕萍等[20]将替硝唑、金银花和氯化钠为主药制备含漱液，药物的局部浓度高，药效持久，广泛应用于口腔疾病，疗效确切。鼻咽癌放射治疗期间由于腮腺及小唾液腺位于放射治疗靶区内，被放射线损伤，引起功能抑制，唾液分泌减少，口腔酸度增加，口腔正常的自洁作用消失，细菌易繁殖，会出现口干、口腔黏膜水肿、咽痛等并发症。邓卓霞等[21]采用金银花等中草药配制成金银花含漱液，用于预防鼻咽癌放射治疗所致的口咽并发症，取得预期效果。

2.6 泡腾剂

抗感颗粒治疗感冒具有较好的疗效，但服用量较大，口感较差。中国中医科学院中药研究所将颗粒剂研制成泡腾片剂[22]，缩小了服用剂量，改善了口感，服用更方便。

2.7 滴眼剂

临床用于预防或治疗病毒性眼结膜炎的药物主要是抗生素类。吴森林等[23]制备的鱼腥草－金银花滴眼剂(HLD)是由金银花和鱼腥草按1∶1配伍，总生药含量为6.25 g/mL，用于防治病毒性眼结膜炎。试验结果证实，HLD完全抑制HSV21和ADV23，对宿主细胞CPE的最低抑制浓度分别为32 mg/mL。HLD具有一定的体外抗病毒作用和较强的体内抗病毒效果，具有开发为一种新型防治病毒性眼结膜炎新药的前景。刘利国等[24]进行的金银花滴眼液体内抑菌及抗病毒试验表明，其有抗Ⅳ型疱疹病毒作用，治疗结膜炎、角膜炎、角膜溃疡有效，特别是对急性结膜炎能快速奏效。

3 其他制剂

3.1 脂质体

脂质体系指将药物包封于类脂质双分子层，而制成的一种超微型球状药物载体制剂。中南大学实验室以金银花中绿原酸为抗病毒成分，进行抗病毒绿原酸脂质体研究，已完成绿原酸的提取与纯化，得到纯度高于90%的绿原酸。目前正在进行抗病毒绿原酸脂质体的制备，基本制备工艺已经建立。

3.2 纳米粒

孙庆顺等[25]利用免疫方法建立复发性口疮大鼠模型后，用纳米化的金银花和金银花水煎剂对其进行治疗，同时采用临床应用疗效肯定的左旋咪唑在作阳性对照。结果发现，金银花及纳米金银花都使降低的CD4T细胞数、CD4+/CD8+T细胞比得到回升，口腔溃疡的发生次数也明显减少。经比较，纳米金银花的治疗作用明显优于相同剂量的金银花水煎剂，其免疫调节作用与左旋咪唑相当。这说明当药物颗粒尺寸进入纳米量级时，纳米中药粒子可能呈现出新的物理、化学和生物学特性，从而提高纳米中药活性和生物学效应。

3.3 微球

毫微粒给药系统是近年来发展起来的新剂型，一定粒径的毫微粒具有靶向性。有学者以金银花提取液为药物，壳聚糖和海藻酸钠为载体，采用化学交联法制备了金银花壳聚糖海藻酸钠微球，提高了中药的治疗指数，半衰期延长，增强靶向疗效。

3.4 β－环糊精包合物

金银花为常用中药，金银花挥发油有重要的药理活性，具体外抑菌、抗菌抗病毒、平喘镇咳等[26]作用。目前，绝大多数中药挥发油包合物的研究只停留在制备工艺上，普遍存在稳定性差、水溶性小、配制水溶液浓度低等缺点。聂飒等[27]用2－羟丙基－β环糊精(HP－β－CD)对金银花挥发油进行包合，采用X射线衍射(XRD)，差热分析(DTA)，薄层色谱(TCL)，紫外光度(UV)分析方法研究该包合物表征。试验结果表明，XRD，DTA，UV有明显特征变化，直观地反映了包合的形成相关理化性质的不同;薄层色谱分析结果表明，包合后挥发油的主要成分未发生明显变化。为金银花挥发油包合物制剂学研究和质量控制提供了依据。

4 展望

绿原酸是传统中草药金银花的主要活性成分，具有广泛应用前景和巨大开发价值。目前，对绿原酸的研究有了一定基础，但在提取工艺和制剂研究方面还处于较低水平。金银花制剂品种较混乱，存在过多过杂的问题，需应用现代提取分离技术，提高分离效果并节约能源，对金银花的现有制剂进行现代化改良，进一步加大研究和开发力度，以提高其疗效。

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