HPLC法测定番茄果脯中的安赛蜜、苯甲酸、糖精钠和山梨酸*

肖丽恒，吕任一，李 萍

(楚雄州质量技术监督综合检测中心，云南 楚雄 675000)

随着人民生活水平提高及食品工业快速发展，休闲食品的种类不断增加。番茄是一种营养丰富的食物，可进行深加工制成果脯而有利于保存。为了增加番茄果脯的保存时间及口感，厂家常在番茄果脯中添加过量的防腐剂和甜味剂。苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐由于对微生物有很好的抑制作用而且价格便宜，是比较常用的防腐剂。安赛蜜、糖精钠的甜度是蔗糖的很多倍，相对于蔗糖来说，甜度高、用量少，成本低，成为番茄果脯制作中普遍使用的甜味剂，但安赛蜜、糖精钠过量摄入会对人体产生危害。

防腐剂和甜味剂的测定方法主要有紫外光度法、色谱法［1］。其中，高效液相色谱法在按国标推荐的色谱条件应用时，色谱分离的时间太长［2，6］，不利于常规的实验室快速检测分析。别外，国标检测方法在测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠的高效液相色谱法中，检测样品只是液体的样品，而对其它样品的处理方法没有提及［2］。

仪器分析的样品前处理非常关键，番茄果脯中果胶和蛋白质等大分子物质会使样品溶液难过滤，样品的提取效率也不高。在样品前处理中，我们采用超声萃取并加入乙酸锌和亚铁氰化钾溶液的方法，能较好的沉淀番茄果脯中的果胶和蛋白质等，有过滤速度快、提取效率提高的优点，从而优化了样品前处理过程。在确保准确度的同时，加快了工作速度，提高了工作效率。并扩展了国标法样品测定范围。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱系统LC－20A(日本岛津公司)，配套二极管阵列检测器SPD－M20A及色谱管理软件LCsolution;输液泵LC－20AB;自动进样器SIL－20AC;色谱柱柱温箱CTO－20AC;去离子水纯化系统EasyDI8(美国Millipore公司);漩涡混合器QL－861;超声波清洗器AS20500AT分析天平:CPA225D型，精度为0.01mg，德国赛多利斯;料理机:九阳股份有限公司。

甲醇为色谱纯，乙酸铵、乙酸锌、亚铁氰化钾、氢氧化钠等试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。安赛蜜、苯甲酸、糖精钠、山梨酸标准品:≥99%，国家标准物质中心。

氢氧化钠溶液:(1.0mol/L):称取10g氢氧化钠，加水溶解定容至250mL。

乙酸铵溶液 (0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，使用时用抽滤器过0.45μm滤膜，并超声排气。

亚铁氰化钾溶液:精确称取53.0g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至500mL。

乙酸锌溶液:精确称取110.0g乙酸锌，加水溶解，并稀释至500mL。

1.2 色谱条件

色谱柱:ODS—Cl8型 (250mm×4.6mm，5μm);检测波长:230nm;流速:1.0mL/min;进样量:10μL;流动相A为甲醇，流动相B为乙酸铵缓冲液，混合比为15∶85;柱温:40℃。

1.3 溶液配制

1.3.1 标准贮备液的配制

用分析天平准确称取安赛蜜、苯甲酸、糖精钠、山梨酸标准品各50mg，置于50mL容量瓶中，加适量的水溶解并加水稀释至刻度，摇匀。配制成1.0mg/mL的标准贮备液。

1.3.2 标准溶液

用精密移液器取120uL、250uL、500uL、1000uL的标准贮备液至10mL容量瓶中，用流动相溶液定容至刻度，得12、25、50、100ug/mL的系列标准使用液。

1.4 样品准备和处理

准确称取处理好的样品5g(精确至0.01g)，置于50mL比色管中，加入1mon/L的氢氧化钠溶液1mL，加入适量的去离子水，漩涡混合1min，水浴超声波辅助提取10min，取出，加入2mL乙酸锌和2mL亚铁氰化钾溶液混匀，调节PH为中性，加去离子水定容到50ml，用慢速滤纸过滤，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤作为试液，供高效液相色谱仪测定。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理

番茄果脯提取采用三种方法，方法一:加入1mon/L的氢氧化钠溶液1mL调节PH值为中性，加水溶解，混匀震荡提取;方法二:在方法一的基础上采用超声萃取;方法三:在方法二超声萃取完之后，加入2mL乙酸锌和2mL亚铁氰化钾溶液，混匀。提取液用滤纸过滤，再用0.45μm微孔滤膜过滤后作为样液;方法一的提取时间较长，滤纸过滤的时间也较长，方法二采用超声萃取，萃取较快，滤纸过滤的时间还是比较长;原因是番茄果脯中含有一定量的蛋白质和一定量的胶体物质等，番茄果脯在提取时胶体溶液很难过滤。当萃取过程中加入2ml亚铁氰化钾溶液和2ml乙酸锌溶液，能够充分沉淀番茄果脯中的蛋白质和大分子物质［7］，破坏果胶物质的性质，沉淀后过滤效果非常好。此方法对样品处理快，检测准确度高。

2.2 测定方法的选择

在1.2色谱条件下，安赛蜜、苯甲酸、糖精钠、山梨酸标准样品色谱图如图1所示，安赛蜜、苯甲酸、糖精钠、山梨酸保留时间分别为5.705、8.206、9.340、11.271min，色谱分离达到较好的分离，表明实验结果良好。

图1 标准样品的色谱图

2.3 标准曲线、检出限、精密度和回收试验

在仪器检测条件调节好的状态下，自动进样器进12、25、50、100mg/L的系列标准溶液10uL，得到不同浓度标样的峰面积，以峰面积和质量浓度绘制标准曲线，并以基线噪声10倍峰面积作为样品的定量检出限 (RSN=10)，在不含防腐剂和人工合成甜味剂的番茄果脯样品中进行空白和加标回收试验。线性回归方程、相关系数、检出限、回收率和精密度见表1。

表1 样品添加回收、精密度、回归曲线和检出限的基本参数

3 结论

通过试验，在对番茄果脯中安赛蜜、苯甲酸、糖精钠、山梨酸测定的样品前处理过程中，采用用超声提取并加入乙酸锌和亚铁氰化钾的方法，有利于在前处理过滤时除去蛋白质、胶体等大分子物质，节省样品前处理的时间。扩展了国标法高效液相色谱测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠的样品测定范围，便于大批量的样品检测。

在优化样品前处理的同时对色谱条件进行了优化，使检测样品的时间适当，测试结果稳定且精确度较高，能够满足实际检测工作中的检测要求，在实际分析检测中具有较高参考价值。

［1］中华人民共和国卫生部.GB/T 5009.28—2003食品中糖精钠的测定 ［S］.北京:中国标准出版社，2003.

［2］中华人民共和国卫生部.GB/T 5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的测定［S］.北京:中国标准出版社，2003.

［3］翟永信.现代食品分析手册 ［M］.北京:北京大学出版社，1988:379—393.

［4］仲岳桐.高油脂食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠样品前处理的方法改进 ［J］.中国卫生检验杂志，2001，11(04):471.

［5］吕建民，卢建华.HPLC法测定牛乳及蜜饯中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的试样处理方法 ［J］.中国公共卫生，2002，18(05):612.

［6］宗万里，养元萍，鲁刚.高效液相色谱法测定山楂制品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠 ［J］.粮油食品科技，2011，11(06);35—36.

［7］陈俊，周路明.亚铁氰化钾－乙酸锌在HPLC测定酱油中防腐剂的应用 ［J］.中国调味品，2007(10):72—73.