消化道肿瘤体外化疗药物敏感性与临床特征的相关性

韩云国

山东省滨州市中心医院药剂科，山东滨州 251700

消化道肿瘤是临床常见的恶性肿瘤之一，近年来，随着我国经济发展及生活质量的提高，不合理饮食对消化道肿瘤发生有促进作用，因此，消化道肿瘤发病率呈明显上升趋势[1]。同时，由于很多人对疾病意识不足，对消化道肿瘤的预防很难达到令人满意的效果，临床上接受治疗的消化道肿瘤患者其疾病往往已发展到晚期[2]。众所周知，单纯手术治疗消化道肿瘤的疗效一般都无法达到期望目标，大量研究表明，术后辅助放、化疗可以提高术后生存率及生存时间，减少复发。本研究对我院近期收治的30例中晚期消化道肿瘤病例手术切除标本行多种常规化疗药物的敏感性测定，以确定消化道肿瘤体外化疗药物敏感性与临床特征的相关性，现总结报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2008年10月～2010年10月间于我院普通外科四病区住院并接受手术治疗的消化道肿瘤患者及其手术切除标本，共入选患者30例，其中，男18例，女12例；年龄25～85岁，平均68.5岁，多为老年人。术后病理Ⅰ期8例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例。所有患者均符合相关肿瘤诊断标准。

1.2 方法

1.2.1 化疗药物 本研究选用3种临床常用化疗药物：5-氟脲嘧啶（5-Fu，100 mg/L）、丝裂霉素（MMC，4 mg/L）、顺铂（DDP，4 mg/L）。

1.2.2 肿瘤细胞悬液制备 无菌条件下取新鲜手术切除的癌组织约1 cm3，用生理盐水冲洗或锐器剔除等物理方法初步去除其表面的血迹、脂肪、肠内容物等，放置入含有庆大霉素的RPMI 1640培养液转移至实验室。用含有庆大霉素的RPMI 1640培养液洗涤肿瘤组织3次，以进一步清除标本表面的血迹、脂肪，放置于无菌RPMI 1640培养液中，机械粉碎，加入0.5%Ⅳ型胶原酶3～5 mL，4℃消化12～16 h以去除纤维结缔组织，1 500 r/min离心10 min，弃上清，沉淀物中加入含有10%牛胎血清、青霉素及链霉素的RPMI 1640培养液，并吹打成细胞悬液，调整细胞浓度至1×106/mL。

1.2.3 药敏试验 试验设为3组，将3种临床常用化疗药物药液加入96孔板，将96孔板放置入37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养48 h后，取出向每孔内各加入5 mg/mL MTT溶液20μL后放回培养箱内继续培养4 h，然后向每孔内加入二甲亚砜100μL，于摇床上摇晃5 min后，于酶标仪上以570 nm检测光密度值（OD值）。

1.2.4 药物抑制率计算 抑制率＝（细胞对照组OD+空白对照组OD-试验组OD）/（细胞对照组OD+空白对照组OD）×100%，重复多次试验获得多组OD值，并求出其平均值以计算抑制率[3]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，采用单因素方差分析比较不同药物对肿瘤组织抑制率差异，采用χ2检验比较各药物抑制率的差异以及与临床分期等指标的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同药物对消化道肿瘤的敏感性情况

经过观察与分析，MMC最大抑制率为85.5%，最小抑制率为6.3%，平均抑制率为42.2%；5-Fu最大抑制率为81.2%，最小抑制率为4.4%，平均抑制率为35.6%；DDP最大抑制率为58.7%，最小抑制率为0，平均抑制率为31.2%。提示丝裂霉素体外化疗敏感性最强。见表1。

表1 不同药物对消化道肿瘤的敏感性情况（%）

2.2 肿瘤分期与化疗抑制率的关系

本文结果显示，各药物在不同肿瘤分期下不敏感例数较多，高度敏感例数较少，各药物敏感性与肿瘤分期无相关性（P＞0.05）。见表2。

表2 不同化疗药物敏感性与肿瘤分期的关系（例）

3 讨论

恶性肿瘤是严重威胁人类生命的疾病之一，其转移及复发是治疗失败的主要原因，手术切除联合术后辅助化疗已经成为大多数恶性肿瘤的治疗原则[4]。近年研究表明，术前辅助放、化疗可以在术前对肿瘤进行降级及降期，创造手术切除的机会[5]。近年消化道肿瘤的辅助化疗药物及相应给药方案得到了长足的发展，从最初的5-Fu、DDP到后来的氟脲嘧啶甲氨酸盐、卡铂、草酸铂等无论从疗效还是副作用方面都取得了很大的改进，但是由于恶性肿瘤存在异质性，即不同部位肿瘤的不同病理类型及相同类型肿瘤的不同分期与分级，其对化疗药物的敏感性可能存在不同。

体外化疗药物敏感性试验是为了选择敏感性高的药物而诞生并发展的试验方法，本文所采用的四唑盐染色法，基本原理为活细胞特别是增生期细胞的线粒体中琥珀酸脱氢酶通过能量代谢，能将MTT还原成蓝紫色的不溶于水的甲脂，而死细胞或红细胞无此能力，其形成量与细胞活力及活细胞的量成正比。因此，可通过酶标仪测定吸光度判断甲脂的量，再利用比色法间接反映肿瘤细胞活力及数量的变化，从而研究化疗药物对肿瘤细胞的抑制及杀伤作用[6]。

本试验采用作用机制不同的3种化疗药，其中，5-Fu与内源性甲酰四氢叶酸及脱氧胸苷酸合成酶形成不易解离的三联复合物，阻止脱氧尿苷酸甲基化为脱氧胸苷酸，从而影响肿瘤DNA合成，临床上曾应用其治疗胃肠道来源的恶性肿瘤。丝裂霉素C具有烷化作用，能与肿瘤细胞DNA双链交叉，连结或使DNA降解，抑制其复制，发挥抗肿瘤作用，临床上应用于膀胱癌[7]。DDP通过铂离子与DNA链上的碱基形成交叉联结，从而破坏DNA的结构和功能，导致细胞的死亡，临床曾将其应用于胃肠道来源的恶性肿瘤，现已为草酸铂替代[8]。本试验发现，不同药物对消化道肿瘤的抑制率有明显差异，敏感率排序为MMC>5-Fu>DDP，这与临床常规用药有一定的差异，类似研究也有相同发现。本研究结果显示，MMC最大抑制率为85.5%，最小抑制率为6.3%，平均抑制率为42.2%；5-Fu最大抑制率为81.2%，最小抑制率为4.4%，平均抑制率为35.6%；DDP最大抑制率为58.7%，最小抑制率为0，平均抑制率为31.2%。本研究结果还显示，各药物在相应浓度下敏感性与肿瘤分期无相关性（P＞0.05）。有报道称，依据MTT法试验结果化疗的患者较经验性用药的患者，在有效率、3年生存率、复发或转移率等方面存在优势。

总之，体外肿瘤药敏试验可以判定各化疗药对肿瘤组织的敏感性，为临床标准化化疗用药及个体化化疗提供依据，其作用机制独特，对消化道肿瘤的辅助化疗有一定帮助。

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[8]Folkesson J，Birgisson H，Pahalman I，et al.Swedish Rectal Cancer Trial：long lasting benefits from radiotherapy on survival and local recurrence rate[J].J Clin Oncol，2005，23（24）：5644-5650.