新乌头碱、乌头碱与次乌头碱在附子不同炮制法中含量变化的实验研究

赵永堂

安徽省亳州市华佗中医院，安徽亳州 236800

附子是临床常用的急救类中药材，性味辛、甘、大热，有毒，功能为回阳救逆、补火助阳、散寒止痛，具有“回阳救逆第一品药”之称[1]，药物分类学中属于毛莨科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根加工品，临床上多用其炮制后的产品。因为附子的炮制方法有很多种，加工工艺也各有不同，形成了附子饮片质量参差不齐的现象，临床应用的安全性与有效性得不到保证。为了研究不同附子炮制方法对双酯型生物碱含量的影响，笔者应用建昌帮法、樟树帮法与《中国药典》2005年版方法炮制附子并进行比较，现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

色谱仪采用日本岛津生产的LC高效系列液相仪，分光计采用日立的T系列紫外可见光光度计，色谱数据参考浙江大学色谱数据库。

1.2 实验材料

附子原料购自安徽金种子中药材发展责任公司，经我院药剂科袁如柏（主管中药师）鉴定为毛莨科植物乌头的子根加工品；对照品为新乌头碱、乌头碱与次乌头碱，均为中国药品生物制品检定所购入，纯度均为分析纯级别。

2 方法与结果

2.1 附子3种炮制法的具体操作

2.1.1 中国药典法

附子洗净后置入胆巴水5 d后，大火烧煮浸液至透心，取出，清水漂洗，纵切片，厚度约为0.6 cm，再取水浸，附子调色成深茶色，上火蒸至出现油面以及光泽后，文火烘干或晒干。

2.1.2 建昌帮法

将盐附子浸泡于清水中直到附子中盐分完全去除，取出附子洗净，晾晒干后，将附子均匀地铺在细糠灰上，然后在附子上面铺一层干净的生姜薄片，片上面铺2张草纸，草纸上面再覆盖一层干净的细糠灰，覆盖少许稻草以及糠壳。最后在4个角同时燃烧，直至糠燃烧尽，灰变冷，取出附子，用锅再蒸10 h左右，晒至半干，纵向切薄片，自然晒干。

2.1.3 樟树帮法

把盐附子表面的粗皮用刀削净，顺序使用米泔水及清水漂洗，混入甘草、黑豆以及皂角，加水以小火慢煮，直至锅水中央清澈为准，随后去除辅料，晒干约八成，密封如缸2 d，同时保持缸内适当适度，按4分切片，加入薯粉活水搅匀，蒸4 h放凉，直至切片面出现结晶体，小火烤干。

2.2 各种溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取新乌头碱、乌头碱与次乌头碱适量，精准称取，与甲醇混合，调制浓度分别为16.0，25.6，32.0μg/mL，制成对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备和色谱标准

3种方法制备的附子分别磨粉，混入浓氨水，再加入乙醚密闭，经24 h后，由超声过滤15 min，再以乙醚洗涤，除去渣滓，将虑洗液混合，挥干，使用前以微孔膜滤过，孔膜尺寸为0.45μm。选择的色谱柱为XBP-C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动色谱相选择乙腈-磷酸钠，浓度为20 mmol/L，流速控制在1.0 mL/min，检测温度设置为35℃，波长为235 nm。

2.3 结果

2.3.1 各种样品中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量

各种样品中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量测定结果见表1。

表1 样品中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量结果（±s，μg/g）

表1 样品中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量结果（±s，μg/g）

样品 重量（g）新乌头碱 次乌头碱 乌头碱生附子盐附子煨附子黑顺附子黑顺片附子8 20 20 20 16 620.02±43.10 5.39±0.36 2.13±0.26 2.36±0.39 1.43±0.18 599.79±40.87 18.98±0.18 6.78±0.18 3.23±0.88 0 102.32±2.99 11.26±1.49 11.26±0.97 8.09±0.92 1.66±0.23

2.3.2 样品含量线性关系、精密稳定度和可重复性研究

2.3.2.1 线性关系考察 分别吸取对照品与甲醇混合液，其中对照品溶液分别为1、2、4、6、8、10 mL，按照样品进量对峰面积进行回归方程分析，其回归方程分别为：新乌头碱A=683.836X-218.28，r=0.999 9；乌头碱：A=816.632X-520，r=0.999 9；次乌头碱：A=653.136X-811.68，r=0.999 9。新乌头碱在0.031～0.320μg，乌头碱在0.0513～0.513μg，次乌头碱在0.064 2～0.643 0μg线性关系良好。

2.3.2.2 精密稳定度测定 精密稳定度采取统一浓度下的多次检测方法，以及24 h再次检验，记录图谱样本RSD，结果表明其精密稳定度良好。见表2。

表2 3种碱类精密稳定度测试

2.3.2.3 可重复性和样品回收率 取生附子样品0.1 g共5份，按照上面方法调配溶液，测定3种碱类质量分数及RSD；回收率测定依照前法取样品6份调配溶液，进行一次比对，测定RSD，取平均值。见表3。

表3 样品可重复性和样品回收率

3 讨论

众所周知，附子中含有较强毒性的双酯类乌头碱，在炮制过程中要保证这种毒性的充分分解，在本实验研究中笔者发现，火制法和水制法都能够分解双酯类乌头碱，其中，水制法在毒性分解的同时，容易造成附子中的一部分有效成分流失掉，而炮、煨等火制法能够防止有效成分的损失[2-3]。此次研究还表明，建昌帮煨制法保留的有效碱类含量最多。在实验加工过程中，适当加入了红糖及植物油等物质，进行色泽调配，从而使药典法黑顺片的回收率提高。

目前，《中国药典》2005年版一部中规定了附子中乌头碱含量的上限，而未规定双酯型生物碱的最低含量，这导致市面上中药附子饮片中的双酯型生物碱含量普遍很低，且不同厂家相差很大。具有最强毒性的生附子，而同时其强心和耐缺氧的功效也是最强的[4]，但许多附子经过炮制后，主要成分乌头碱则会分解，从而产生乌头原碱，虽然大大降低了对人体的毒性[5]，但同时强心功效也显著降低，值得临床注意。

有关研究指明，附子在炮制过程中有偏向过度的现象[6]，这在一定程度上会影响临床疗效。所以本文中的3种炮制方法的炮制品的在临床功效方面仍然值得更进一步的研究。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005：132.

[2]邓雅琼，刘荣华，邵峰.反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量[J].时珍国医国药，2009，20（5）：29-32.

[3]王兆基，关锡耀，徐树棋，等.毒性中药生川乌质量标准研究[J].中成药，2010，28（5）：651-655.

[4]杜贵友，方文贤.有毒中药现代研究与合理应用[M].北京：人民卫生出版社，2009：561.

[5]王瑞，刘芳，孙毅坤，等.不同附子炮制品中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的HPLC测定[J].药物分析杂志，2010，26（10）：1362-1365.

[6]陈彦琳，杜杰，梁焕，等.道地药材附子炮制加工规范化探讨[J].中国现代中药，2010，11（7）：43.