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十精丸改善卵巢功能及美容作用的研究

2012-12-17陈丽娟李伟王加志张丽宏赵晶马伟

中医药信息 2012年2期
关键词:卵细胞光镜低剂量

陈丽娟,李伟,王加志,张丽宏,赵晶,马伟

(1.黑龙江中医药大学佳木斯学院,黑龙江 佳木斯 154007;2.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)

皮肤是雌激素的敏感靶器官。雌激素通过与皮肤细胞上的雌激素受体(estrogen receptor,ER)结合而发挥生理作用。随着年龄增长,女性最早从30岁后即会出现雌激素水平下降的趋势,加之各种因素的干扰,使皮肤出现自然老化和光老化,表现为皮脂分泌量减少,表皮干燥,皮肤胶原和水份含量下降,弹性降低,特别是绝经后雌激素的低水平,更加重了这种情况。从系统性雌激素疗法首次应用以来,人们即发现雌激素除了治疗多种妇科疾病外,对皮肤功能还有明显的改善作用,特别表现在抗皮肤老化和改善更年期综合征上。但雌激素替代疗法所带来的负作用如增加子宫内膜癌、乳腺癌的发病率等[1],使其使用的安全性受到了限制。而用中医药来维护卵巢内分泌功能,调整雌激素水平,对延缓皮肤衰老、维护皮肤健美状态则有着无可比拟的优势。

十精丸出自明代《普济方·诸虚门》,有“温肾滋肾,益精填髓,养心益智、平肝明目……乌须发,悦容颜”的作用[2],是中医养生美容保健的传统名方。

1 实验材料

1.1 实验动物

14~16月龄wistar雌性大鼠40只,体质量(280±20)g,购于上海斯莱克实验动物中心。

1.2 实验药物

十精丸方组:枸杞子、熟地黄、桂心、杭菊花、山茱萸、菟丝子、肉苁蓉、川椒、柏子仁、白茯苓各等份。购于黑龙江中医药大学佳木斯学院附属医院中药局。

尼尔雌醇:北京四环制药有限公司生产,批号20100401。

2 实验方法

2.1 自然衰老模型建立

14~16月龄Wistar雌性大鼠,适应性饲养1周后随机分成4组,每组10只,即模型组、十精丸高、低剂量组、阳性对照组。

2.2 药物制备

十精丸(各等份,200g/剂),加水浸泡1h,文火煎煮2h,每煎取汁200ml,共2次,将两煎混合后浓缩至50ml,为高剂量组(含生药4.0g/ml);浓缩至100ml,为中药低剂量组(含生药2.0g/ml)。置4℃冰箱保存,灌胃给药,实验周期6周。

2.3 标本制备

2.3.1 血清制备 于最后一次给药后,禁食水12h,乙醚吸入麻醉后,摘取眼球采血3ml,以3000r/min离心15min,吸取血清0.5ml于eppenelorf管中。

2.3.2 形态学取材和光镜检查

于大鼠背部正中,剪取1cm×1cm皮肤,去除脂肪,生理盐水清洗后,以4%甲醛固定待检;摘取卵巢,去除脂肪,以4%多聚甲醛固定待检。将经4%多聚甲醛固定24h以上的各组大鼠皮肤、卵巢标本,经酒精梯度脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,常规切片(5um),HE染色,供光学显微镜观察。

2.4 统计学处理

3 实验结果

3.1 大鼠血清雌二醇(E2)含量测定结果 见表1。

表1 各组大鼠血清中E2含量测定结果(±s)

表1 各组大鼠血清中E2含量测定结果(±s)

注:与空白组比较,※P<0.01,◆P<0.05;与阳性对照组比较,★P <0.01,●P>0.05。

组别 n剂量 E2(pg/ml)模型组10 13.156 ±4.880阳性对照组 10 0.15mg/100g25.791 ±13.920※十精丸低剂量组 10 2.0g/ml18.630 ±2.650◆▲★十精丸高剂量组 10 4.0g/ml21.877 ±3.780※▲●

各给药组E2含量明显高于空白对照组,十精丸高剂量组与空白对照组相比差异极显著(P<0.01),有统计学意义;低剂量组与空白对照组相比,差异较为显著(P<0.05)。结果表明,十精丸对受试大鼠血清E2水平有不同程度地提高,提示十精丸具有提高生殖内分泌功能、改善卵巢状态的作用。

3.2 组织形态学结果

3.2.1 不同给药组大鼠皮肤组织形态学观察(光镜200×)见图1~图4。

图1 十精丸高剂量组(光镜200×)

图2 十精丸低剂量组(光镜200×)

图3 尼尔雌醇对照组(光镜200×)

图4 模型组(光镜下200×)

模型组:表皮角质层角化增厚,基底层有明显色素沉着,真皮层胶原纤维稀疏,呈玻璃样变,皮脂腺汗腺导管改变不显著。

十精丸组:以高剂量改变明显,表皮角质层变薄,基底层色素沉着明显减轻;真皮层变厚,胶原纤维致密丰富,皮脂腺腺管扩张,分泌旺盛。

阳性药对照组:表皮角质层较厚,基底层色素沉着明显,真皮胶元纤维细胞稍多,汗腺、皮脂腺变化不明显。

可见十精丸能促进皮肤真皮胶原纤维细胞增殖,减少基底层色素沉着,角化层变薄,从而改善皮肤衰老状态,具有延缓皮肤衰老的作用。

3.2.2 各组大鼠卵巢光镜观察结果(光镜200×)见图5~图8。

图5 十精丸高剂量(光镜200×)

图6 十精丸低剂量组(光镜200×)

图7 尼尔雌醇对照组(光镜200×)

图8 模型组(光镜200×)

模型组:成熟卵细胞1个,初级卵细胞2个,次级卵细胞3个;黄体6组,间质细胞少,有少量纤维细胞,说明卵巢功能降低。

十精丸组:以高剂量组有明显改善:成熟卵细胞多3个,初级卵细胞6个,次级卵细胞4个;黄体13组,间质细胞增生明显,卵巢功能活跃。

阳性药对照组:可见成熟卵细胞1个,初级卵细胞3个,次级卵细胞3个;黄体7组,间质细胞轻度增生。较空白对照组有所改善。

可见十精丸能改善卵巢功能,促进卵巢细胞增殖。

4 讨论

现代神经内分泌功能减退学说认为,随着年龄增加,激素分泌异常,机体靶组织对某些激素或活性物质的反应明显降低(如受体表达下调),可造成机体内稳态严重破坏[3]。尤其对即将进入围绝经期的女性而言更是如此。雌激素能使女性产生并维持第二性征,具有生育能力。而且其受体存在于多处器官和组织中,如子宫、阴道、乳房、皮肤、大脑等,尤其对皮肤具有保护作用[4],所以皮肤是雌激素作用的靶器官之一。若雌激素水平下降,女性就会表现出体表皮肤的外在衰老征象如皮肤松弛、皱纹增多、脂肪堆积等;所以,保养和调整卵巢的内分泌功能,保持血中雌激素水平的稳定即能延缓女性皮肤衰老,起到美容养颜作用。

补肝肾药物能改善神经内分泌免疫从而延缓衰老。中医补肾法正是通过调节垂体-性腺功能来改善内源性激素分泌而产生美容抗衰作用的[5],可见中医补肝肾、益精血的治疗法则正是这一思想的集中体现。所以,通过探讨机体衰老机制与卵巢的分泌功能和形态变化的相关性,将中医药学相关理论及现代医学技术手段相结合,成为中医美容学学术研究的思路之一。十精丸能有效地改善皮肤和卵巢的衰老状态,具有恢复其年轻状态、延缓衰老的活性作用。其通过整体调节,多靶点作用,恢复卵巢分泌功能,提高机体雌激素水平,从而使与之相作用的靶组织受到保护,不仅保证更年期女性健康,还能达到美容驻颜的目的。

本研究通过对自然老龄大鼠的卵巢和皮肤形态学观察、血清雌二醇(E2)水平测定,初步探讨了补肾方药十精丸调整卵巢内分泌功能、延缓皮肤衰老的作用机制,为十精丸进一步的研究和应用奠定理论基础。

[1] 廖慧娟.复方尼尔雌醇片预防去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究[J].中国骨质疏松杂志,2003,9(1):57-59.

[2] 明·朱木肃.普剂方[M].北京:人民卫生出版社,1983.

[3] 李卫.皮肤衰老及抗衰老研究进展[J].中华医学美学美容杂志,2004,10(1):60-62.

[4] 袁静,陈全珠,侯正明,等.养血调肝方对初老雌性大鼠神经内分泌免疫影响的实验研究[J].中国实验方剂学杂志,2005,11(1):34-36.

[5] 杨万章.补肾法作用机理的临床及实验研究近况[J].浙江中医杂志,1994,39(2):84-87.

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