十精丸改善卵巢功能及美容作用的研究

陈丽娟，李伟，王加志，张丽宏，赵晶，马伟

(1．黑龙江中医药大学佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007;2．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

皮肤是雌激素的敏感靶器官。雌激素通过与皮肤细胞上的雌激素受体(estrogen receptor，ER)结合而发挥生理作用。随着年龄增长，女性最早从30岁后即会出现雌激素水平下降的趋势，加之各种因素的干扰，使皮肤出现自然老化和光老化，表现为皮脂分泌量减少，表皮干燥，皮肤胶原和水份含量下降，弹性降低，特别是绝经后雌激素的低水平，更加重了这种情况。从系统性雌激素疗法首次应用以来，人们即发现雌激素除了治疗多种妇科疾病外，对皮肤功能还有明显的改善作用，特别表现在抗皮肤老化和改善更年期综合征上。但雌激素替代疗法所带来的负作用如增加子宫内膜癌、乳腺癌的发病率等［1］，使其使用的安全性受到了限制。而用中医药来维护卵巢内分泌功能，调整雌激素水平，对延缓皮肤衰老、维护皮肤健美状态则有着无可比拟的优势。

十精丸出自明代《普济方·诸虚门》，有“温肾滋肾，益精填髓，养心益智、平肝明目……乌须发，悦容颜”的作用［2］，是中医养生美容保健的传统名方。

1 实验材料

1．1 实验动物

14～16月龄wistar雌性大鼠40只，体质量(280±20)g，购于上海斯莱克实验动物中心。

1．2 实验药物

十精丸方组:枸杞子、熟地黄、桂心、杭菊花、山茱萸、菟丝子、肉苁蓉、川椒、柏子仁、白茯苓各等份。购于黑龙江中医药大学佳木斯学院附属医院中药局。

尼尔雌醇:北京四环制药有限公司生产，批号20100401。

2 实验方法

2．1 自然衰老模型建立

14～16月龄Wistar雌性大鼠，适应性饲养1周后随机分成4组，每组10只，即模型组、十精丸高、低剂量组、阳性对照组。

2．2 药物制备

十精丸(各等份，200g/剂)，加水浸泡1h，文火煎煮2h，每煎取汁200ml，共2次，将两煎混合后浓缩至50ml，为高剂量组(含生药4.0g/ml);浓缩至100ml，为中药低剂量组(含生药2.0g/ml)。置4℃冰箱保存，灌胃给药，实验周期6周。

2．3 标本制备

2．3．1 血清制备 于最后一次给药后，禁食水12h，乙醚吸入麻醉后，摘取眼球采血3ml，以3000r/min离心15min，吸取血清0.5ml于eppenelorf管中。

2．3．2 形态学取材和光镜检查

于大鼠背部正中，剪取1cm×1cm皮肤，去除脂肪，生理盐水清洗后，以4%甲醛固定待检;摘取卵巢，去除脂肪，以4%多聚甲醛固定待检。将经4%多聚甲醛固定24h以上的各组大鼠皮肤、卵巢标本，经酒精梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，常规切片(5um)，HE染色，供光学显微镜观察。

2．4 统计学处理

3 实验结果

3．1 大鼠血清雌二醇(E2)含量测定结果 见表1。

表1 各组大鼠血清中E2含量测定结果(±s)

表1 各组大鼠血清中E2含量测定结果(±s)

注:与空白组比较，※P＜0．01，◆P＜0.05;与阳性对照组比较，★P ＜0.01，●P＞0.05。

组别 n剂量 E2(pg/ml)模型组10 13．156 ±4．880阳性对照组 10 0．15mg/100g25．791 ±13．920※十精丸低剂量组 10 2．0g/ml18．630 ±2．650◆▲★十精丸高剂量组 10 4．0g/ml21．877 ±3．780※▲●

各给药组E2含量明显高于空白对照组，十精丸高剂量组与空白对照组相比差异极显著(P＜0.01)，有统计学意义;低剂量组与空白对照组相比，差异较为显著(P＜0.05)。结果表明，十精丸对受试大鼠血清E2水平有不同程度地提高，提示十精丸具有提高生殖内分泌功能、改善卵巢状态的作用。

3．2 组织形态学结果

3．2．1 不同给药组大鼠皮肤组织形态学观察(光镜200×)见图1～图4。

图1 十精丸高剂量组(光镜200×)

图2 十精丸低剂量组(光镜200×)

图3 尼尔雌醇对照组(光镜200×)

图4 模型组(光镜下200×)

模型组:表皮角质层角化增厚，基底层有明显色素沉着，真皮层胶原纤维稀疏，呈玻璃样变，皮脂腺汗腺导管改变不显著。

十精丸组:以高剂量改变明显，表皮角质层变薄，基底层色素沉着明显减轻;真皮层变厚，胶原纤维致密丰富，皮脂腺腺管扩张，分泌旺盛。

阳性药对照组:表皮角质层较厚，基底层色素沉着明显，真皮胶元纤维细胞稍多，汗腺、皮脂腺变化不明显。

可见十精丸能促进皮肤真皮胶原纤维细胞增殖，减少基底层色素沉着，角化层变薄，从而改善皮肤衰老状态，具有延缓皮肤衰老的作用。

3．2．2 各组大鼠卵巢光镜观察结果(光镜200×)见图5～图8。

图5 十精丸高剂量(光镜200×)

图6 十精丸低剂量组(光镜200×)

图7 尼尔雌醇对照组(光镜200×)

图8 模型组(光镜200×)

模型组:成熟卵细胞1个，初级卵细胞2个，次级卵细胞3个;黄体6组，间质细胞少，有少量纤维细胞，说明卵巢功能降低。

十精丸组:以高剂量组有明显改善:成熟卵细胞多3个，初级卵细胞6个，次级卵细胞4个;黄体13组，间质细胞增生明显，卵巢功能活跃。

阳性药对照组:可见成熟卵细胞1个，初级卵细胞3个，次级卵细胞3个;黄体7组，间质细胞轻度增生。较空白对照组有所改善。

可见十精丸能改善卵巢功能，促进卵巢细胞增殖。

4 讨论

现代神经内分泌功能减退学说认为，随着年龄增加，激素分泌异常，机体靶组织对某些激素或活性物质的反应明显降低(如受体表达下调)，可造成机体内稳态严重破坏［3］。尤其对即将进入围绝经期的女性而言更是如此。雌激素能使女性产生并维持第二性征，具有生育能力。而且其受体存在于多处器官和组织中，如子宫、阴道、乳房、皮肤、大脑等，尤其对皮肤具有保护作用［4］，所以皮肤是雌激素作用的靶器官之一。若雌激素水平下降，女性就会表现出体表皮肤的外在衰老征象如皮肤松弛、皱纹增多、脂肪堆积等;所以，保养和调整卵巢的内分泌功能，保持血中雌激素水平的稳定即能延缓女性皮肤衰老，起到美容养颜作用。

补肝肾药物能改善神经内分泌免疫从而延缓衰老。中医补肾法正是通过调节垂体－性腺功能来改善内源性激素分泌而产生美容抗衰作用的［5］，可见中医补肝肾、益精血的治疗法则正是这一思想的集中体现。所以，通过探讨机体衰老机制与卵巢的分泌功能和形态变化的相关性，将中医药学相关理论及现代医学技术手段相结合，成为中医美容学学术研究的思路之一。十精丸能有效地改善皮肤和卵巢的衰老状态，具有恢复其年轻状态、延缓衰老的活性作用。其通过整体调节，多靶点作用，恢复卵巢分泌功能，提高机体雌激素水平，从而使与之相作用的靶组织受到保护，不仅保证更年期女性健康，还能达到美容驻颜的目的。

本研究通过对自然老龄大鼠的卵巢和皮肤形态学观察、血清雌二醇(E2)水平测定，初步探讨了补肾方药十精丸调整卵巢内分泌功能、延缓皮肤衰老的作用机制，为十精丸进一步的研究和应用奠定理论基础。

［1］ 廖慧娟．复方尼尔雌醇片预防去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究［J］．中国骨质疏松杂志，2003，9(1):57－59．

［2］ 明·朱木肃．普剂方［M］．北京:人民卫生出版社，1983．

［3］ 李卫．皮肤衰老及抗衰老研究进展［J］．中华医学美学美容杂志，2004，10(1):60－62．

［4］ 袁静，陈全珠，侯正明，等．养血调肝方对初老雌性大鼠神经内分泌免疫影响的实验研究［J］．中国实验方剂学杂志，2005，11(1):34－36．

［5］ 杨万章．补肾法作用机理的临床及实验研究近况［J］．浙江中医杂志，1994，39(2):84－87．