在园儿童携带EV71和CoxA16的调查研究

何 玥 曾斤日 魏煌忠 丁 华 朱淑娥 於艳霞 梁 鸿 朱惠君

1.广东省深圳市宝安区沙井人民医院检验科，广东深圳 518104；2.广东省深圳市宝安区沙井预防保健所，广东深圳 518104

手足口病（hand,foot,and mouth disease,HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，好发于5 岁以下的婴幼儿，全年散发，但秋冬发病率明显低于春夏季。 其主要传染源为病人和病毒携带者。 目前，国内尚缺乏手足口病防治的基本易感人群流行期和非流行期病原体隐性感染率方面的资料。

手足口病在国内外流行资料表明：手足口病的病原体主要是肠道病毒属的柯萨奇病毒（coxsackre virus）A 组、B 组以及肠道病毒71 型 （EV71） 等引起手足口病， 最常见的是CoxA16 和EV71。在众多重症手足口病病例中，由EV71 引发的比例最高[1-2]。同时手足口病重症患儿与普通患儿在肠道病毒株流行分布特征和EV71 阳性率均存在显著性差异[2]。也有专家指出，如果某地的手足口病例中EV71 在所占比例升高，那么重症手足口病的趋势也随之增加。为进一步了解和防治3～5 岁幼儿手足口病，于2010年1月及2010年5月份我们分别开展了在园儿童非流行期和流行期携带CoxA16 和EV71 现况进行调查，结果如下。

1 对象与方法

1.1 调查对象

深圳某地在园儿童，中班和小班2～5 岁儿童，非流行期调查176 名，流行期调查216 名。

1.2 调查方法

1.21 抽样方案 按设计的调查表， 对辖区24 家幼儿园进行评价分级，依次为甲等、乙等、丙等。 按照分层随机整体抽样的原理，依照评价等级随机抽取3 所幼儿园的中班、 小班各一个班的在园儿童。

1.2.2 采样方法 参照卫生部手足口病预防控制指南（2009年版）的要求，根据人群的实际情况，采集咽后壁和两侧扁桃体拭子，0～4℃保存，2h 内送至实验室检测。

1.2.3 检测方法 采用实时荧光定量PCR， 检测咽拭样中的EV71和CoxA16。

1.2.4 分析方法 应用SPSS 13.0 统计包对计数资料进行检验，对计量资料进行t 检验，P<0.05 为有统计学差异。

1.3 试剂

采样管采用江苏康健病毒采样保存套装， 实时荧光PCR 试剂购自达安基因股份有限公司。

1.4 仪器

美国ABI 7500 型实时荧光定量PCR 仪。

2 结果

2.1 在园儿童手足口病非流行期与流行期病毒隐性感染率

我们在手足口病流行期和非流行期分别采集固定班级的三家幼儿园中班、小班在园儿童咽拭子。 及时送检，用罗氏提取液提取RNA，再用实时荧光PCR 仪进行扩增。 流行期在园儿童手足口病毒总感染率是3.4%，隐性感染CoxA16 和EV71 的分别为2.3%、1.1%； 非流行期手足口病毒总感染率为5.5%，CoxA16 和EV71 隐性感染率分别为3.2%、2.3%。 流行期与非流行期同一在园儿童群体手足口病病毒隐性感染总感染率有显著性差(P<0.05,=1.02)，两个不同时期隐性感染CoxA16 和EV71 隐性感染率也有显著性差异（P<0.05, =0.33；P <0.05, =0.77）。

2.2 相同时期不同儿童病毒携带情况

对在园儿童咽拭子进行实时荧光定量PCR 检测，结果见表1。 非流行期手足口病毒总感染率为3.4%，CoxA16 和EV71 隐性感染率分别为2.3%、1.1%，均为外地户籍。同时不同年龄段、不同性别、不同病原体和不同管理水平幼儿园间无显著性差异；流行期手足口病毒总感染率为5.5%，CoxA16 和EV71 隐性感染率分别为3.2%、2.3%，均为外地户籍。经统计表明，不同年龄、不同性别、不同病原体、不同管理水平幼儿园间隐性感染率差异不显著。

3 讨论

手足口病的传染性强，传播途径多，传播方式多为通过密切接触。 大量病毒存在于患者和健康者咽部、粪便和泡疹液中，通过飞沫、唾液、粪便、污染的水和食物等经呼吸道和消化道传染。检测手足口病病原体的方法主要分为血清抗体测定、 核酸检测和病毒培养。 从传染病防控角度来看，核酸检测检测是手足口病最有效率的防治手段之一。

表1 深圳市某地手足口病流行期和非流行期在园儿童携带EV71 和CoxA16 情况

手足口病病原体检材中，常见的有咽拭子、疱疹液、粪便。在各类样品中，粪便检材最为常见，但在感染初期，咽拭子检材的病毒核酸检出率最高[3]。王敬军等人提出咽拭子标本在手足口病疫情的监测中具有方便、快捷的优点，且检出率较高[4]。本调查认为在评价集体在园儿童病毒隐性感染率时， 在采集手足口病标本过程中，咽拭子是比较理想的检测样和采样方式。

手足口病常年均可发生，夏秋季多见，尤其是5～8月为感染高峰期。但不同地方出现流行高峰会有不同。据历年传染病资料显示：手足口病在深圳是每年3～4月份开始增多，到5～6月会达高峰期或称易流行期；冬春季较少发生，称头年12月到次年2月份为非流行期。 我们分别于1月和5月集中采样，检测结果可表明深圳某地当年手足口病在流行期与非流行期，在园儿童CoxA16 和EV71 隐性感染率差异均不显著。

不同年龄人群均可感染手足口病，但常在婴幼儿造成暴发，好发于5 岁以下小儿，且3 岁以下发病率最高[5]。 手足口病易发生托幼机构集体感染，我们调查的对象为2-5 岁在园儿童，其在流行期和非流行隐性感染手足口病病毒差异显著（P<0.05, =1.02）。

手足口病是自限性疾病，预后良好，但也可出现严重并发症，病情进展快，治疗不及时可引起死亡，已严重影响婴幼儿健康。 迄今尚无特异而高效的抗手足口病病毒药物和公认的有效疫苗[6]。 因此加强监测，做好预防控制工作尤为重要，具体措施如下：①加强监测，提高监测敏感性；②做好疫情报告，及时发现患者，采取预防措施，防止扩散；③加强医疗机构的预检分诊，预防医源性传播；④加强托幼机构的晨检，发现病例及时隔离治疗，加强儿童餐饮具、玩具、文具、被褥等用品及活动场所的消毒，培养并监督儿童养成良好卫生习惯，加强营养，合理锻炼，增强免疫力；⑤加强对群众预防知识的宣传教育工作。

[1] Chen SC,Chang HL,Yan TR,et al.An eight-year study of epidemiologic features of enterovirus 71 infection in Taiwan[J].Am J Trop,Med Hyg,77(1):188-191.

[2] 吴亦栋,尚世强,陈志敏,等.手足口病病原体流行特征分析及临床意义[J].中华儿科杂志,2010,48(7):535-539.

[3] 王敬军,王丽,田小平,等.5676 例手足口病病例分析[J].中华疾病控制杂志,2008,12(6):567-569.

[4] 汪照国,刘晓琳,于萍,等.咽拭子标本对手足口病疫情监测的应用研究[J].预防医学论坛,2008,14(8):761-763.

[5] Lum Lc,Wong KT,Lam SK,et al.Fatal enterouirus 71 encephalomyelitis[J].J Pediatr,1998,133(6):795-798.

[6] 万朝敏,徐爱丽.手足口病的研究进展[J].中华妇幼临床医学杂志,2009,5(2):106-107.