红芪多糖对脾虚大鼠T淋巴细胞亚群的影响*

万生芳

(甘肃中医学院中西医结合系，甘肃兰州 730000)

中医学中脾是以消化系统为主的多系统多器官的综合功能单位。脾胃功能与机体正气的生成有着密切的关系。脾虚证是一种以腹泻、体质量下降、畏寒、倦怠等为主要表现的中医病证，比较集中地反映了机体消化吸收、代谢和免疫功能的低下状态。红芪是豆科植物多序岩黄芪(Hedysarum Polybotrys Hand．-Mazz)的干燥根，其色赤，故称红芪，主产于甘肃，效同黄芪，临床常将其代替黄芪使用［1］。课题组前期研究［2］表明：红芪多糖能够提高脾虚证大鼠胃黏膜的修复能力。为了进一步探讨红芪多糖对脾虚证大鼠机体的免疫调节作用是否有影响，课题组开展了以下研究工作。

1 材料与方法

1．1 动 物

Wistar大鼠，SPF级，雄性，鼠龄 80～100 d，体质量(200±10)g，由甘肃中医学院实验动物中心提供，合格证号为：SCXK(甘)2011-0001。

1．2 药品、试剂与仪器

红芪，选用甘肃宕昌GAP种植基地产红芪，经甘肃中医学院生药学教研室鉴定为多序岩黄芪(Hedysarum polybotrys．hand．-Mazz)的干燥根，等级优;大黄，选用甘肃陇南地区GAP种植基地产大黄，经甘肃中医学院生药学教研室鉴定为掌叶大黄(Rheum palmatum)的根，等级优。黄芪多糖，北京美迪克斯生物科技有限公司产品，批号HD006001;FITC异硫荧光素，甘肃恒兴生物科技有限公司产品，批号F7250-50;［PE］anti-rat CD3a/CD4a/CD8a，甘肃恒兴生物科技有限公司产品，批号85-12-0084-80。D-37520型电动高速离心机，产地德国;BECKMAN COULTER Ppics XL型流式细胞仪，产地美国。

1．3 药品的制备

红芪多糖的制备：将1000 g红芪饮片加入5000 mL水，浸泡1 h;煎煮30 min，趁热抽滤;再加入5000 mL水2次煎煮30 min，趁热抽滤;两次药液混合，冷却后加无水乙醇至含醇量600 g/L，静置24 h;抽滤，滤液用无水乙醇和乙醚依次冲洗沉淀，沉淀物即为红芪多糖;60℃烘干备用。1000 g/L大黄水煎液的制备：大黄饮片500 g，加入2500 mL水，浸泡1 h;煎煮30 min，滤渣;2次煎煮;两次药液混合，明火直滚至800 mL;将药液置于60℃水浴锅内，浓缩至500 mL，即为1000 g/L大黄水煎液(每mL含生药1g)。

1．4 动物分组与脾虚证模型的建立

将60只大鼠随机分出10只作为空白对照组正常饲养，其余50只参照文献［3-4］采用苦寒泻下法制备脾虚证模型。用1000 g/L大黄水煎液按75 μL/g体质量每天灌胃，1 d 2次，连续42 d。密切观察大鼠表现。若有食欲不振(食量减少)，消瘦(体质量下降)，大便稀溏，肛门污秽，倦怠乏力(悬空拉尾抵抗力减弱)，毛发不荣，萎靡嗜睡，眯眼等症状，则提示造大鼠脾虚模成功。将造模成功的50只大鼠随机分模型对照组，黄芪多糖高、中剂量组，红芪多糖高、中剂量组共5组，每组10只。

1．5 用药方法

参考黄芪多糖注射液临床滴注用量，将黄芪多糖液配制为10 g/L、5 g/L，按高、中剂量对黄芪多糖高、中剂量组大鼠分别进行灌胃;将红芪多糖液配制为10 g/L、5 g/L，按高、中剂量对红芪多糖高、中剂量组大鼠分别进行灌胃。均连续用药30 d。

1．6 检测指标

于造模后第2天和用药30 d后，分别麻醉各组大鼠;采血5 mL，加入抗凝剂，晃动试管混匀，静置10 min;加入 PI染色液0．5 mL混匀;室温放置5 min;加2．5 mL洗液，3000 r/min 离心 10 min;弃上清;加入荧光标记的细胞因子抗体，混匀，室温暗处放置30 min。完成孵育后，立即进行流式细胞分析，测定T淋巴细胞亚群计数。

1．7 统计学方法

采用SPSS 16．0统计分析软件处理。组间百分率的比较采用Pearson卡方检验。以P＜0．05为差别有统计学意义。

2 结果

模型对照组中CD3+T、CD4+T细胞较空白对照组下降，差别有统计学意义(P＜0．05)。黄芪多糖、红芪多糖高剂量组与模型对照组对比，CD3+T细胞计数值均上升，差别有统计学意义(P＜0．05)。黄芪多糖高、中剂量组之间对比，红芪多糖高、中剂量组之间对比，CD3+T细胞含量差别均有统计学意义(P＜0．05)。模型对照组CD4+T/CD8+T比值较空白对照组下降，黄芪多糖高、中剂量及红芪多糖高、中剂量组CD4+T/CD8+T比值较模型对照组上升，但差别均无统计学意义(P＞0．05)。见表1。

表1 各组T细胞亚群计数对比 %

3 讨论

人体正气虚损是导致各类疾病产生的重要因素。脾胃为后天之根本，脾胃功能与机体正气的生成有着密切的关系。脾虚证患者机体细胞免疫功能下降，免疫调节失衡，以致机体抗病能力降低［5］。有研究证实：脾虚证大鼠胃黏膜的损伤指数明显高于正常对照组［6］。有学者研究表明：恶性肿瘤伴脾虚证患者免疫调节异常主要表现为T淋巴细胞为中心的细胞免疫功能低下［7］，脾虚证模型存在免疫功能的受损及T细胞亚群调节功能的紊乱［8］。本研究结果显示脾虚证大鼠血中CD3+T、CD4+T细胞计数下降，CD4+T/CD8+T比值下降，提示脾虚证大鼠机体处于免疫抑制状态，抗病能力低下;各药物组与模型对照组对比，CD3+T、CD4+T细胞值上升，CD4+T/CD8+T比值上升，提示红芪多糖在一定程度上能够改善脾虚证大鼠的免疫功能。

［1］中国医学科学院药物研究所．中药志［M］．北京：人民卫生出版社，1982：195．

［2］万生芳，张丽萍，张艳，等．红芪多糖对实验性脾虚大鼠胃黏膜中 TNF-α、COX-2表达的影响［J］．中医研究，2011，24(11)：13-17．

［3］周永生，樊雅莉，陈小野，等．脾气虚证动物模型规范化的初步研究［J］．实验动物科学与管理，2003，20(2)：1-5．

［4］陈奇．中药药理研究方法学［M］．3版．北京：人民卫生出版社，1996：1023．

［5］田佳鑫．三种脾虚泄泻证模型大鼠消化系统功能改变的比较［J］．中国临床康复，2006，10(39)：129-131．

［6］尹光耀．脾虚证胃病胃黏膜亚细胞结构及其微量元素、DNA研究的临床意义［J］．中国中西医结合脾胃杂志，1996，4(1)：10-15．

［7］黄明宜，申虹．恶性肿瘤脾虚证患者T淋巴细胞亚群分布与脾虚证的关系［J］．中国误诊学杂志，2002，2(8)：1148-1149．

［8］王洪海，谢鸣．复合病因造模法致脾虚证大鼠模型在免疫系统方面的变化［J］．中国实验方剂学杂志，2006，12(12)：41-45．