男性不育患者2 406例染色体异常分析

宋 革 王奇玲 刘兴章 唐运革

广东省计划生育专科医院(广州，510600)

导致男性不育的因素较复杂，主要涉及遗传因素、神经内分泌疾病、免疫因素、外伤及感染等方面。在各种影响人类精子发生的因素中，遗传因素是导致无精子症及少精子症的主要原因之一［1］。其中染色体异常最常见，其次是基因突变，约有3% ～15%的无精子症或少精子症患者存在Y染色体无精症因子(AZF)基因片段微缺失，其不同片段的微缺失将导致不同程度的精子发生障碍，严重者表现为特发性无精子症或少精子症［2］。本文对2008年3月～2010年3月在本院就诊的男性不育患者遗传学检查资料进行病因分析，以探讨遗传因素与男性不育及精子异常之间的关系。

1 资料与方法

1．1 样本来源

共收集男性不育患者2 406例，年龄22～49岁，排除梗阻性因素，女方妇科检查正常，不孕时间2～13年。患者均经临床和实验室检查。正常人群染色体异常发生率按照文献［3］作为对照。

1．2 方法

1．2．1 精液分析常规检查 非梗阻性无精子症、隐匿精子症、严重少弱畸精子症、少弱畸精子症按WHO实验室检验手册(第4版)精液分析诊断标准确定。常规检测，并将精液分析异常患者按少弱畸精子症、严重少弱畸精子症和无精子症进行分类。

1．2．2 核型分析 常规方法制备外周血染色体，进行G显带分析，必要时进行C显带联合分析，计数中期分裂象30个，嵌合型计数100例，分析3个分裂象。核型分析按人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN 2005)进行。

1．2．3 AZF微缺失分析 常规提取外周血样本的基因组DNA。AZF检测位点及PCR的条件按照文献［4，5］，即 AZFa区域 2个位点:sY86和 sY84;AZFb区域 4个位点:sY124、sY127、sY132和sY134;AZFc区域 6 个位点:sY152、sY239、sY242、sY254、sY255和sY157。根据需要增加位于 Yq12的sY160位点，用单纯PCR扩增。

2．结果

2．1 不育患者的染色体异常分析

精液分析2 406例男性不育患者中，非梗阻性无精子症1 992例，隐匿精子症216例，严重少弱畸精子症76例，少弱畸精子症122例。各组染色体异常情况见表1。

2．2 不育患者的核型异常分析

核型异常病症主要表现为47，XXY(克氏征)和嵌合体。见表2。

2．3 不育患者的基因异常分析

非梗阻性无精子症、隐匿精子症和严重少弱畸精子症各组AZF基因缺失异常者分别为96例(4.82%)、27 例(12．5%)、7 例(9．21%)，总 AZF基因缺失130例。

表1 各种精液分析异常组染色体异常及核型异常情况［例(%)］

3 讨论

本研究发现非梗阻性无精子症、严重少弱畸精子症组染色体异常率(26．46%、27．63%)与国内外报道(2．2% ～33%)［6］相似，染色体异常检出率(27．10%)高于国内报道的正常人群染色体异常发生率(0．47%)［3］。进一步分析，各组性染色体异常率(22．29%、15．74%、9.21%)与文献报道新生男婴性染色体异常发生率(0．1%)［7］比较显著增高。其中非梗阻性无精子症性染色体异常率略高于其他组，可能是由于其性染色体的异常造成了性腺发育异常，引起生精障碍，表现为非梗阻性无精子症［8，9］。核型检查也证明此观点。同时在少弱畸精子症组也发现了18．85%的常染色体异常，可能与本研究患者的来源有关。

通过细胞遗传学检查，在非梗阻性无精子症1 992例中发现异常核型328例，其中以克氏征患者最多，占异常核型的94．8%。隐匿精子症组发现克氏症7例，与国内外相关研究［8，9］结果相似。少弱畸精子症组和严重少弱畸精子症组均未发现克氏征患者。另一种异常核型嵌合体在非梗阻性无精子症组检测到18例。一般来说，嵌合型个体比纯合型个体症状要轻，异常细胞与正常细胞的比值越大，患者症状越重，反之比值越小，症状越轻，个别嵌合型个体可具有生精功能［10］。在少弱畸精子症组发现了2例嵌合体也验证了这一点。

有研究认为，位于Yq11．2的AZF区域上有些基因或基因家族与精子发生相关，它的缺失将导致无精子或严重的少精子表型。文献报道，男性原发无精子症和少精子症患者中约有3% ～15% 存在Y染色体AZF区域微缺失，提示这可能是男性原发不育的一个重要遗传学病因［11］。在无精症、少精症患者中，AZF基因区微缺失主要发生在AZFc基因区，占Y染色体微缺失的60% 以上。目前，AZF基因区特定位点的缺失与表型的对应关系还不十分清楚，一般认为，AZFa基因区多个大片段缺失表现为唯支持细胞综合征，AZFb基因区缺失表现为生精阻滞，而 AZFc 基因区缺失可有多种表现［12，13］，不同部位的微缺失可导致男子不同程度的精子发生障碍。本研究显示非梗阻性无精子症、隐匿精子症和严重少弱畸精子症各组AZF基因缺失异常率(4．82%、12．5%、9．21%)显著高于正常人群(0．05%)［14］，其中隐匿精子症最高，严重少弱畸精子症其次。目前尚没有足够的证据说明AZF基因区微缺失与精子密度及精子活率高低相关，其在少精子症发病过程中的分子机制，还需进一步深入研究。然而在患者面临辅助生殖技术选择的过程中，临床上应对男性不育症患者进行常规细胞遗传学检查和AZF检测，以尽量减少因染色体异常遗传给下一代带来的风险。

综上所述，遗传学因素是导致男性不育的重要原因，其中染色体异常及Y染色体AZF微缺失引起的无精子症和少精子症最常见，在进行男性不育的病因学分析以及临床诊断和治疗时，遗传因素应予以高度重视。仅从Y染色体的形态改变判断其是否与男性不育相关还不够可靠，但仅进行AZF检测而不进行核型分析尚不能发现性染色体嵌合体的存在。因此将这两项技术对比检测，用于诊断男性不育可能更为全面且有意义。

1 Dada R，Gupta NP，Kucheria K．Molecular screening forY qmicrodeletion in men with id iopathic oligozoospermia and azoospermia［J］．J Biosc，2003，28(2):163 －168．

2 Kleiman SE，Yogev L，Paz G，et al．The prognost ic value of thesite and ex ten t ofY ch rom osom em icrodelet ions on sperm atogenesis［J］．Harefuah，2002，141(2):178 －180，222，221．

3 夏家辉，李麓云．染色体病〔M〕．北京:科学出版社，1989:264．

4 Kirsch S，W eiss B，De RosaM，et al．FISH deletionm app ing defines a single locat ion for the Y － chrom osom e statu re gene，GCY［J］．J Med Genet，2000，37(8):593 －599．

5 Cui YX．An infertile male with apparent 45，X turned out to have 45，X，d er(Y)t(Y;13)(q11．2;q12)，－ 13［J］．Clinicopathologic and Cytogenomics Studies，2007，88(6):1676 －1611．

6 化爱玲，郑梅玲，丁琰．SRY基因诊断在临床中的应用［J］．中国优生与遗传杂志，1999，7(3):34．

7 Egozcue S，Blanco J，Vendrell JM，et al．Human male infertility:chromosome anomalies，meiotic disorders，abnormal spermatozoa and recurrent abortion［J］．Hum Reprod Update，2000，6:93 －105．

8 Bhasin S．Approach to the infertile man［J］．J Clin Endocrinol M －etab，2007，92(6):1995 －2004．

9 李克秋，李光，王春兰，等．1823例无精子患者的染色体畸变类型及生殖激素水平［J］．中国优生与遗传杂志，2006，14(6):35－38．

10 Tiepolo L，Zuffardi O．Localization of factors controlling spermatogenes is in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm［J］．Hum Genet，1976，34(2):119－124．

11 贾味存，魏莎莉．人类Y染色体微缺失与精子生成障碍的研究进展［J］．国际遗传学杂志，2006，29(4):273－276．

12 Krausz C，Quintana Murci L，McElreavey K．Prognostic value of Y deletion analysis［J］．Hum Reprod，2000，15(7):1431 －1434．

13 Foresta C，Ferlin A，Garolla A，et al．High frequency of well defined Y chromosome deletions inidiopathic Sertoli cell only syndrome［J］．Hum Reprod，1998，13(2):302 －307．

14 Gardner RJM，Sutherland GR．Chromosome Abnormalities and Genetic Counseling．Sex chromosome translocations［M］．Oxford:Oxford University Press，1996:95 －114．