抗肿瘤药物HDZ126016的制剂处方前研究

张建明，任筱青，王 科，沙先谊，方晓玲＊

（1.复旦大学药学院药剂学教研室，上海201203；2.上海交通大学医学院附属上海精神卫生中心药剂科，上海201108）

［本文编辑］阳凌燕

恶性肿瘤是威胁人类健康的严重疾病。随着环境污染的日益严重和人类生存环境的恶化，癌症对人类的威胁正在加剧，抗肿瘤药物的研究意义重大。索拉菲尼（sorafenib）是一种多激酶抑制剂，能够通过抑制血管内皮生长因子受体而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞的生长。虽然索拉菲尼能显著延长晚期肝癌病人生存期［1］，但是研究表明其对大鼠和兔具有致突变性和生殖毒性。因此，基于索拉菲尼结构改造的新药创制成为当前的研究热点。HDZ126016是对索拉菲尼进行结构改造而合成的一个新型蛋白激酶抑制剂类抗肿瘤药物。药效学研究表明，HDZ126016活性大于索拉菲尼，且毒副作用较低，开发前景广阔。考虑到片剂具有很多优点，从实际角度出发，将新化合物HDZ126016制成片剂有很大的可行性。本研究旨在对抗肿瘤药物HDZ126016进行处方前研究，为其制剂研究提供理论依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 LC－10AT 高效液相色谱仪，SPD－10A型紫外可见波长检测器（日本岛津株式会社）；XW－80A涡旋混合器（上海医科大学仪器厂）；BS 210型电子分析天平（德国赛多利斯天平公司）；DSHZ－300多用途水浴恒温振荡器（江苏太仓市实验设备厂）；TGL－16G台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；DL－360超声仪（浙江海天电子仪器厂）；Eppendorf离心管（广州雷得生物技术有限公司）。

1.2 试药 HDZ126016原料（山东医药工业研究院提供，纯度99.50%），HDZ126016对照品（复旦大学药学院药剂学教研室自制，纯度99.90%）；乙腈［色谱纯，沃凯（中国）公司］；甲醇、正辛醇、二甲基亚砜（DMSO）、浓盐酸、磷酸二氢钾、枸橼酸、磷酸氢二钠、十二烷基硫酸钠（SDS）、聚山梨酯80（吐温80）均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；实验用水为双蒸水；其他试剂均为市售分析纯。

2 方法和结果

2.1 药物HDZ126016体外分析方法的建立

2.1.1 溶液配制 精密称取HDZ126016对照品适量，加乙腈溶解，在 DL－360超声仪中超声10min，确保样品完全溶解，得到HDZ126016储备液；再用流动相稀释至所需浓度，得到HDZ126016溶液。

2.1.2 色谱条件色谱柱：XtimateTM C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流动相为乙腈－10mmol／L磷酸二氢钾（用三乙胺调节pH至7.5）＝60∶40；流速：1.0ml／min；柱温：40℃；进样量：20μl；检测波长：250nm。在该条件下，药品色谱行为良好（见图1）。

图1 HDZ126016的HPLC谱图Figure 1 HPLC photograms of HDZ126016

2.1.3 标准曲线的制备 精密称取 HDZ126016对照品50mg，用乙腈配制成浓度为500μg／ml的标准储备液，再用流动相稀释成浓度为0.05、0.1、0.5、1、5和10μg／ml的标准溶液，于2.1.2项下色谱条件测定，记录色谱图，重复3次。将HDZ126016色谱峰面积（A）对浓度（c）按最小二乘法进行线性回归，得线性方程：A＝83 686c＋2 713.7，r＝0.999 9（n＝3）。结果表明，HDZ126016在0.05～10μg／ml浓度范围内，色谱峰面积（A）与浓度（c）呈良好的线性关系。

2.1.4 精密度实验 分别配制低、中、高（0.1、5、10μg／ml）3种浓度的 HDZ126016对照品溶液，分别连续进样3次，记录色谱图，计算峰面积的RSD值分别为4.5%、0.51%、0.81%（n＝3），表明精密度符合分析要求。

2.1.5 回收率实验 分别精密称取 HDZ126016原料药约2mg于10ml量瓶中，分别精密加入HDZ126016对照品2、3、4mg，各3份，以乙腈稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各1ml分别置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得低、中、高浓度的供试品溶液，取20μl进样，记录色谱图。另精密称取HDZ126016对照品适量，以2.1.1项下方法制备成浓度为5μg／ml的溶液为对照品溶液，取20μl进样，记录色谱图，外标法以峰面积计算各样品的检出量，计算回收率。结果HDZ126016低、中、高3种浓度的平均回收率分别为100.4%、99.77%、99.94%，RSD 分 别 为0.96%、1.08%、0.91%（n＝3）。可见该方法的准确性满足含量测定的要求。

2.1.6 稳定性实验 精密称取HDZ126016原料药5mg置10ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液1ml至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度约为5μg／ml的供试品溶液，并于0、1、2、4、6、8、10、12、24h分别按含量检测方法进样测定，记录色谱图，计算RSD为0.46%（n＝9）。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.2 HDZ126016基本理化性质的研究

2.2.1 性状考察 将HDZ126016原料药粉末平铺于表面皿中，肉眼观察它的基本性状，进行性状评价，并进行溶解度实验。结果表明，HDZ126016为白色粉末状，无臭，味微苦。HDZ126016在乙腈和DMSO中易溶，在甲醇中微溶，在水中难溶。

2.2.2 不同条件下油水分配系数的测定 分别配制0.1mol／L盐酸溶液和pH 值分别为4.0、5.0、6.8、7.4的磷酸盐缓冲液，分别加入适量的正辛醇，在37℃恒温水浴振荡24h，充分饱和。称取适量HDZ126016原料药溶于经蒸馏水饱和的正辛醇中，使其溶解，配制成2mg／ml的溶液。取2ml分别与10ml上述pH值的水溶液混合，37℃恒温水浴振荡48h后，分别取出水相和油相，稀释到适当浓度后，用2.1.2项方法测定HDZ126016的含量，按下列公式计算表观油水分配系数（P）［2，3］：P＝c正辛醇／c水，c正辛醇和c水分别表示正辛醇和水相中HDZ126016的浓度。HDZ126016的表观油水分配系数测定结果见表1，表明该药脂溶性较好。当pH值≤5.0时，HDZ126016的油水分配系数（logP）值随pH值增大而增大，当pH值＞5.0时，logP值随pH值增大而减小。

表1 不同pH条件下HDZ126016的油水分配系数Table 1 Oil／water partition coefficients of HDZ126016 under the condition of different pH values

2.2.3 不同溶剂中饱和溶解度的测定 分别取适量过量的HDZ126016对照品于已标记好的4支1.5ml离心管中，分别加入1ml水、0.1mol／L盐酸、乙醇和吐温80，涡旋10s，超声10min，放入水浴恒温振荡器中，于室温振荡平衡48h。48h后，将离心管从水浴中取出，20×g离心5min，取上清液用乙腈稀释至适宜浓度后，按2.1.2项方法检测HDZ126016的含量，分别计算HDZ126016在上述4种溶剂中的溶解度，结果分别为（3.19±0.29）×10－4、（8.84×10－3±0.50×10－4）、（38.01±0.30）和（27.20±0.23）mg／ml，表明 HDZ126016在水和0.1mol／L盐酸中溶解度极小。

2.3 体外溶出介质的确定 从2.2项的实验结果可知该化合物在水中的溶解度较低，故溶出介质的选择是口服给药制剂溶出实验的关键。配制0.1mol／L盐酸溶液，在溶液中分别加入0.1%吐温80、0.5%吐温80、0.1%SDS、0.5%SDS，再分别加入HDZ126016原料药，充分溶解使溶液达到饱和，在室温条件下振荡48h。按2.1.2项方法进样检测，测定HDZ126016在这4种溶出介质中的溶解度，分 别 为（8.80±0.03）、（10.63±0.07）、（441.35±4.23）、（979.24±8.69）μg／ml。结果表明，HDZ126016在含0.5%SDS的0.1mol／L盐酸溶液中溶解度最大，而且能够满足溶出测定时的漏槽条件，故选择此溶液为体外溶出实验的溶出介质。

3 讨 论

从HDZ126016在不同溶剂中的溶解度可以判断，HDZ126016与很多激酶抑制剂一样，是一种水难溶性药物。如果选择注射给药，则较难找到符合注射标准的溶剂系统。同时，在不同的pH条件下，HDZ126016的油水分配系数介于3～6，表明其亲脂性较好，提示该药的体内吸收情况可能较好。因此，可以考虑将HDZ126016制备成口服制剂。

难溶性药物的口服制剂研制是药剂学领域的一个热点。口服制剂在到达生物膜被吸收之前，都需要经过溶出过程。难溶性药物由于溶解度较小，因而其溶出速率也较小［4］。因此可以推断，在HDZ126016口服制剂发挥药效的过程中，溶出可能为限速步骤。为了增加HDZ126016的溶解性，作者在实验中将其进行研磨，粉末过100目筛，该法可以在一定程度上增大药物粉末的比表面积，以增加药物的溶解度，促进药物的溶出［4］。另外，为了保证溶出介质在溶出度实验中达到漏槽状态，本研究使用几种表面活性剂增加HDZ126016在0.1mol／L盐酸溶液中的溶解度。结果显示，该药在含0.5%SDS的0.1mol／L盐酸溶液中溶解度显著增加，0.5%SDS起到了较强的增溶作用，因此将含0.5%SDS的0.1mol／L盐酸溶液确定为体外溶出介质。

［1］丁 健.抗肿瘤药物的研究新进展［J］.中国新药杂志，2000，9（3）：149－154.Ding Jian.New research approaches in anti－tumor drug［J］.Chin New Drugs J，2000，9（3）：149－154.Chinese with abstract in English.

［2］方大树，胡思星，张 检，等.罗格列酮油水分配系数的测定［J］.中国药房，2010，21（5）：409－411.Fang DaShu，Hu SiXing，Zhang Jian，etal.Determination of oilwater partition coefficients of rosiglitazone［J］.China Pharmacy，2010，21（5）：409－411.Chinese with abstract in English.

［3］杨建宏，孙 磊，罗福国.头孢氨苄溶解度及表观油水分配系数测定［J］.中国抗生素杂志，2010，35（9）：S6－S8.Yang JianHong，Sun Lei，Luo FuGuo.Determination of equilibrium solubility of cefalexin in various medium and its apparent oil／water partition coefficient［J］.Chin J Antibiot，2010，35（9）：S6－S8.Chinese with title in English.

［4］江 波，印春华.提高难溶性药物口服生物利用度的方法［J］.中国医药工业杂志，2002，33（7）：358－361.Jiang Bo，Yin ChunHua.Measures of improving oral bioavailability of water－insoluble drugs［J］.Chin J Pharmaceuticals，2002，33（7）：358－361.Chinese with abstract in English.