贵州苗药黑骨藤总黄酮的抗炎镇痛作用

冉启军，赵建峰

(1．遵义医学院附属医院，贵州 遵义 563099;2．遵义县人民医院检验科，贵州遵义 563000)

黑骨藤是贵州常用苗药，为萝藦科植物西南杠柳 Periploca forrestii Schltr的根或全株，性热，味苦，入冷经，具有祛风除湿、舒筋活血、止痛的功效，主治风湿麻木疼痛，跌打损伤、骨折、骨痛等，苗族药名为Uob mongb dleib蛙蟒虽(贵州黔南)、Ghab bas dlaib嘎八又赊(贵州黔东南)［1，2］。我们通过对黑骨藤的活性成分总黄酮抗炎、镇痛作用的试验研究，为苗药的临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 材料来源 黑骨藤总黄酮(PFS)来源于贵阳医学院生药室，用生理盐水稀释成高、中、低3个剂量组，稀释浓度分别为 5 mg/mL、2．5 mg/mL、1．25 mg/mL，SD 大鼠(♂)，体重(180～220)g;昆明种小鼠(♂、♀)，体重(18～22)g，洁净级，均购于贵阳医学院试验动物中心，动物合格证号SCXK(黔)2002－0001。

1．2 试剂与仪器 二甲苯与冰醋酸分析纯、阿司匹林(中国医药公司上海分公司、批号:840130)，GJ28402型热板测痛仪(UV2401)。阿司匹林配制成浓度为0．4 mg/mL的溶液。

1．3 试验方法

1．3．1 黑骨藤总黄酮对小鼠耳廓肿胀度试验方法昆明种小鼠50只(♂)，随机分为5组(3个试验组、生理盐水模型组与阿司匹林阳性组)，每组10只。根据小鼠体重，高、中、低组以及阿司匹林阳性均按照0．1 mL/10g比例连续灌喂7 d，即黑骨藤总黄酮每日用量为:高试验剂量组(0．5 mg/10g体重)、中试验剂量组(0．25 mg/10g体重)、低试验剂量组(0．125 mg/10g体重)，阿司匹林阳性组(0．04 mg/10g体重)，生理盐水模型组给予同体积的生理盐水。末次给药30 min后每只小鼠于其右耳前后两面涂抹二甲苯0．02 mL并与左耳对照，涂抹二甲苯20 min后处死小鼠，沿耳廓线剪下两耳，用8 mm直径的打孔器在两耳片同一部位打下耳圆片并精确称其各自的质量，计算平均肿胀度和抑制率。肿胀度(mg)=右耳圆片的质量－左耳圆片的质量;抑制率(%)=(生理盐水模型组平均肿胀度－试验剂量组平均肿胀度)/生理盐水模型组平均肿胀度×100%。

1．3．2 黑骨藤总黄酮对角叉菜胶锈导的大鼠足跖肿胀模型试验方法 SD大鼠50只(♂)，随机分为5组，大鼠分组、给药方法同1．3．1，每组10只。根据大鼠体重，高、中、低组以及阿司匹林阳性组均按照1 mL/100g比例连续灌喂7 d，即黑骨藤总黄酮用量为:高试验剂量组(5．0 mg/100g体重)、中试验剂量组(2．5mg/100g体重)、低试验剂量组(1．25 mg/100g体重)，阿司匹林阳性组(0．4 mg/100g体重)，生理盐水模型组给予同体积的生理盐水。用游标卡尺测定大鼠右后肢足跖厚度，计算给药前平均足跖厚度，末次给药1 h后每只鼠右足皮下注射1%角叉菜胶0．1 mL致炎，分别测定记录注射后0．5 h、1 h、2 h、3 h、4 h 和 5 h 大鼠右后足跖厚度。肿胀度(mm)=致炎后足跖厚度－致炎前足跖厚度。

1．3．3 黑骨藤总黄酮对冰醋酸致小鼠扭体反应试验方法 小鼠分组、给药剂量与方法同1．3．1，末次给药30 min后，根据小鼠体重，采用0．6%冰醋酸经腹腔注射(0．1 mL/10g体重)，15 min后记录各鼠扭体次数，计算抑制率。扭体抑制率(%)=(生理盐水模型组平均扭体次数－试验剂量组平均扭体次数)/生理盐水模型组平均扭体次数×100%。

1．3．4 黑骨藤总黄酮对雌性小鼠热板镇痛试验方法 昆明种小鼠50只(♀)，小鼠分组、给药剂量与方法同 1．3．1，置于(55 ±0．5)℃热板上，记录自放置热板上至出现舔足反应时间，即为痛阈值，凡＜5s或＞30s及踊跃者均淘汰，合格小鼠再测1次痛阈值，取2次平均值作为各鼠阈值。痛阈值提高率(%)=(给药后平均痛阈值－给药前平均痛阈值)/给药前平均痛阈值×100%。

1．4 统计学方法 数据采用SPSS 18．0软件分析，计量资料以均数±标准差(珋x±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2．1 黑骨藤总黄酮对小鼠耳廓肿胀程度的影响 从黑骨藤总黄酮抑制小鼠耳廓肿胀度结果分析，黑骨藤总黄酮高、中、低剂量组均有控制二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用［3］，其抑制率分别为55．94%、50．60%和37．35%，与生理盐水模型组比较差异有统计学意义(P均＜0．01)，与阿司匹林阳性组比较均无统计学差异(P均＞0．05)，(见表1)。

表1 黑骨藤总黄酮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用的影响(n=10，d=7)

2．2 黑骨藤总黄酮对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响 以大鼠足跖肿胀程度进行评价，角叉菜胶能明显诱导大鼠足跖肿胀［4］，3 h达峰值;黑骨藤总黄酮高、中、低剂量(5 mg/mL、2．5 mg/mL、1．25 mg/mL)组对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀均有不同程度的抑制作用，与模型组比较均有显著性差异(P均＜0．01)，(见表2)。

表2 黑骨藤总黄酮对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀与时间变化关系(n=10，d=7)

2．3 黑骨藤总黄酮对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响 黑骨藤总黄酮能够有效抑制冰醋酸刺激腹腔粘膜引起的疼痛反应，减少扭体次数［5］，与模型组比较，扭体次数下降显著(P＜0．01或 P＜0．05)，(见表3)。

表3 黑骨藤总黄酮对冰醋酸所致小鼠扭体反应的抑制作用(n=10，d=7)

2．4 黑骨藤总黄酮对雌性小鼠热板法镇痛试验的影响 连续给药7d后，阿司匹林阳性组、黑骨藤高、中低剂量组均能显著提高小鼠痛阈值［6］，与模型组比较黑骨藤高、中、低剂量组痛阈值提高率分别为 42．91%、37．66% 和 19．98%，差异有统计学意义(P ＜0．01或P ＜0．05)，(见表4)。

表4 黑骨藤总黄酮对小鼠热板镇痛作用(n=10，d=7)

3 讨论

炎症是肌体组织细胞对损伤所发生的一种以防御为主的组织反应，其病理变化为局部组织、细胞的变质(炎症局部组织所发生的变性和坏死)、渗出(炎症局部组织血管内的液体和细胞成分通过血管壁进入组织间质、体腔、粘膜以及体表的反应)和增生(炎症局部的巨噬细胞、内皮细胞和纤维母细胞增生)3种情况。一般炎症以充血、变质和渗出为主，表现为红、肿、热、痛和功能障碍。

黑骨藤是贵州常用苗药，为萝藦科植物西南杠柳Periploca forrestii schltr的根或全株，是贵州苗族地区传统习惯用药。民间发现黑骨藤具有消肿止痛、舒筋活络之作用，多用于治疗腰腿痛、风湿痛与跌打损伤等疾病。

二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶诱导大鼠足跖肿胀模型是急性非特异性炎症反应，所导致的炎症改变包括血管扩张、毛细血管通透性增加和渗出改变等。试验结果表明黑骨藤总黄酮对急性非特异性炎症有显著抑制作用，并呈剂量依赖效应。角叉菜胶诱导大鼠足跖肿胀同时也是一种免疫性炎症反应，试验表明黑骨藤总黄酮对免疫性炎症也有明显抑制作用;由于炎症发生时，渗出物的压迫和炎症介质的作用会引起疼痛，醋酸致小鼠扭体反应试验和雌性小鼠热板法镇痛试验表明，黑骨藤总黄酮有明显的镇痛作用，其机理为黑骨藤总黄酮显著提高了小鼠痛阈。综上所述，黑骨藤总黄酮具有抗炎、镇痛作用。

本研究结果显示，黑骨藤总黄酮对急性非特异性炎症抗炎与镇痛作用显著，且不含激素，无西药副作用，值得进一步研究。

［1］汪毅．中国苗族药物彩色图集［M］．贵阳:贵州科技出版社，2002:665．

［2］国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草·苗药卷［M］．贵阳:贵州科技术出版社，2005:526－627．

［3］徐叔云．药理试验方法学［M］．北京:人民卫生出版社，2001:911．

［4］李仪奎．中药药理试验方法学［M］．上海:上海科技出版社，1991:298－299．

［5］马越鸣，闫晶超，王天明，等．泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应［J］．中国药理学通报，2006，22(11):1393－1398．

［6］陈奇．中药药理研究方法学［M］．北京:人民卫生出版社，1996．378