烧伤方对实验性烫伤大鼠的实验研究*

刘心亮 曾小粤 温志鹏 熊益群 王重阳 徐绍钢 穆桂萍

（广州中医药大学附属深圳医院，广东 深圳 518033）

烧伤作为一种常见的外伤，近年来其发生率逐渐上升［1-2］。烧伤治疗中存在创面疼痛、进行性坏死、易感染、瘢痕愈合四大难题。近年来，中药在治疗烧伤的作用日益受到人们的重视，我们通过动物实验探讨烧伤方在烫伤创面愈合、水肿抑制、中枢调控镇痛以及机体抗氧化防卫系统的作用。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠60只，雌雄各半，体质量（200±20）g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

1.2 药物与试剂 烧伤方由黄柏、苦参、苍术、防风、荆芥穗、雄黄、甘草等中药水煎提纯制成，含生药量450 g/L，冷藏备用（深圳市中医院制剂室制备）；京万红软膏，由天津达仁堂制药二厂生产。脑啡肽（ENK）试剂盒，由上海西唐生物科技有限公司提供；超氧化物歧化酶（SOD），由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 主要仪器 日本岛津UV-1700型紫外可见分光光度计；德国Hettich UNIVERSAL 32台式高速冷冻离心机；美国BIOTEK ELX800型酶标仪；日本岛津AUY120电子分析天平。

1.4 分组与造模 60只SD大鼠随机分3组：模型组、烧伤方组、京万红组，每组20只。全部大鼠在实验期间均正常饮水，普通饮食，于试验前24 h背部脱毛约2 cm2。各组用80℃恒温水通过一玻璃圆筒分别烫伤大鼠背部脱毛处皮肤，造成Ⅱ度烫伤模型。

1.5 给药方法 烧伤方组每日给大鼠烫伤部位外敷烧伤方4次，每次约2 mL，连续7 d；京万红组每日给大鼠烫伤部位外敷京万红软膏4次，连续7 d；模型组每日给大鼠烫伤部位外敷生理盐水4次，连续7 d。

1.6 标本采集与检测 末次给药后隔日每组10只大鼠抽取全血、处死留取烫伤组织以及尾侧亚核。（1）剩余的大鼠继续观察烫伤面成痂时间、创面愈合时间、创面修复情况。（2）留取烫伤部位皮肤8 mm×8 mm称质量。（3）取大鼠尾侧亚核，称质量，置于1 mL 100℃生理盐水中煮沸3 min，取出加入0.1 mol/L盐酸0.5mL进行匀浆，将匀浆液收集在1.5mL离心管中，加入0.1 mol/L的氢氧化钠0.5 mL，混匀，4℃ 12000 r/min离心30 min，取上清液测定ENK含量，检测方法严格按操作说明书进行。（4）全血离心后用血浆检测SOD，方法严格按操作说明书进行。

2 结 果

2.1 烧伤方对烫伤大鼠创面结痂、愈合时间的影响 见表1。烧伤方组及京万红组创面结痂时间及愈合时间均短于模型组（P＜0.05或0.01），且烧伤方组优于京万红组（P＜0.05）。

表1 各组大鼠创面结痂、愈合时间及皮肤质量比较（）

表1 各组大鼠创面结痂、愈合时间及皮肤质量比较（）

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与京万红组比较，△P＜0.05。下同。

组别 n 创面结痂时间（d） 创面愈合时间（d） 皮肤质量（mg）模型组 10 0.93±0.16 16.1±1.45 105.86±8.83烧伤方组 10 0.51±0.11**△ 11.5±1.22**△ 75.23±10.42**京万红组 10 0.72±0.14* 13.6±1.38* 84.75±9.35*

2.2 烧伤方对烫伤大鼠水肿的抑制作用 见表1。烧伤方组和京万红组抑制水肿作用明显，皮肤质量轻于模型组（P＜0.01），并且烧伤方组优于京万红组。

2.3 烧伤方对烫伤大鼠侧亚核组织中ENK含量的影响 见表2。烧伤方组和京万组侧亚核组织中ENK含量都明显升高（P＜0.05或0.01）；烧伤方组和京万组相比较，ENK含量未见明显差异（P＞0.05）。

表2 各组大鼠尾侧亚核组织ENK含量及血浆SOD含量比较（）

表2 各组大鼠尾侧亚核组织ENK含量及血浆SOD含量比较（）

组别 n ENK（mg/g） SOD（U/mL）模型组 10 1.18±0.32 148.02±11.48烧伤方组 10 2.03±0.47** 170.54±11.76**京万红组 10 1.95±0.41* 168.58±11.48*

2.4 烧伤方对实验性烫伤大鼠机体抗氧化防卫系统SOD的影响 见表2。烧伤方组和京万组SOD含量较模型组都升高（P＜0.05或0.01）；烧伤方组和京万组相比，SOD含量未见明显差异（P＞0.05）。

3 讨 论

烧伤，中医学又称为“火烧伤”、“烫火伤”、“烫火疮”、“汤泼火”等。其病因是火（热）毒，机体受热力突然袭击而致肌肤经络损伤，引起气滞血瘀，故可见肌肤红肿热痛；津液输布失常则出现渗出肿胀；热盛则出现肌肤腐烂溃疡等症。这与现代医学对烧伤和局部微循环的改变，即毛细血管扩张、充血、红细胞聚集、血流瘀滞的病理是一致的。根据烧伤的病理变化，我们应用具有清热解毒、燥湿止痛功效的烧伤方［3］外敷烧烫伤创面，疗效显著。药理研究证实，黄柏、苦参、雄黄、甘草有清热解毒功效［4］；黄柏、苦参、防风、苍术、雄黄有燥湿功效［4］；苦参、防风、荆芥穗具有抗炎、抑菌、镇痛、镇静作用［4］；调和诸药，尚可解雄黄之毒。

实验结果显示，烧伤方组在创面成痂时间、创面愈合时间均优于京万红组。我们认为烧伤方最有效的作用是减少烧伤创面液体渗出，其机理主要是使烧伤区及周围或深层组织的毛细管收缩，通透性降低。烧伤方还使创面成痂快，且痂皮易干燥、韧性较好，而干燥的痂一般不易发生感染［5］。药理研究证实，黄柏具有很广的抗菌范围，并使血小板不易破碎，外用还可促进皮下渗血的吸收［6］，黄柏、苦参、防风、雄黄可预防真菌感染［6］；苍术含萝卜素，维生素 B1等［6］；甘草有解毒作用，又可抗炎、抗过敏，对黏膜、溃疡面还有保护作用［6］；荆芥穗可促进创面愈合［6］。上药协同作用，能促进创面表皮增生、瘸下愈合及肉芽生长的功效，从而缩短疗程。

ENK与-β内啡肽、强啡肽等合称内源性阿片肽。ENK广泛存在于神经系统的各级水平和部位，有学者用放射免疫分析法测定人脑各部位ENK含量，发现在尾核、苍白球、中脑黑质和壳核中含量较高［7］。ENK涉及到许多生理活动的调节，如参与中枢神经系统痛觉信息调制和外周的传入神经末梢疼痛调节作用［8］。内源性ENK主要作用于δ受体参与构成内源性痛觉调制系统，发挥镇痛功能［9］，而受体主要位于中枢神经系统中和调控疼痛相关的解剖部位。因此，这些部位也是免疫反应性ENK水平最高的部位。中脑导水管周围灰质是内源性痛觉调制系统的重要结构，最新研究发现［10］，大鼠延髓背角ENK可能通过抑制含钙结合蛋白的伤害性感受神经元来调节烧伤部位疼痛信息的传递。大鼠脑室约200 ng的ENK即可产生明显的镇痛效应［11］。ENK-干扰素融合蛋白具有外周镇痛作用，ENK可以通过外周阿片类受体发挥镇痛作用。

SOD是体内催化歧化反应的一种抗氧化保护酶，对机体的氧化和抗氧化平衡起着重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（O2-）保护细胞免受损伤［12］。试验结果表明，与模型组比较，烧伤方组SOD升高（P＜0.05），说明烧伤方具有明显的抗氧化能力，使大鼠的细胞膜免受损伤，增强了清除和抑制氧自由基的能力。因此，烧伤方如能应用于临床上由超氧阴离子自由基过多引起的各种类型的烧伤患者，将有很大的应用前景。

烧伤方由中药组成，无副作用，成本较低，制备简单，能促进烧烫伤创面愈合、抑制水肿、对中枢调控发挥镇痛作用，能提高机体抗氧化防卫系统能力，值得临床推广。

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