正交设计优选延胡索中延胡索乙素及原阿片碱的最佳提取工艺

敖志远

（阜新蒙药有限责任公司，辽宁 阜新 123000）

延胡索为罂粟科植物CorydaLis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎,其味辛、苦，温,归肝、脾经,具有活血、利气、止痛之功效，用于胸胁、脘腹疼痛、经闭通经、产后瘀阻、跌扑肿痛等[1]。延胡索的主要活性成分为生物碱，其具有强烈的生理活性，可扩张冠状动脉，具有一定的中枢镇静作用，故急需建立一种简单可行，稳定性高的提取延胡索中生物碱的方法，为进一步研究其活性成分提供理论依据。在本试验过程中，我们以不同浓度的乙醇为提取溶剂，不同提取时间，不同提取次数和溶剂用量为因素，用L9（34）正交设计，以延胡索乙素含量，原阿片碱含量，提取液的得膏率为指标，选择最佳的提取工艺。

1 仪器与试药

HSS型电子恒温水浴锅：上海博讯实业有限公司医疗设备厂；

RE－52AA型旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；

SHZ－DⅢ型循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限责任公司；

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪（配有DAD、自动进样器）、ChemStation工作站（Agilent科技有限公司）；

HS6150型超声波清洗器（天津恒奥科技发展有限公司）；CP225D电子分析天平（德国Sartorius,十万分之一）；

延胡索药材（由辽宁省本溪三药有限公司提供），经辽宁中医药大学中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为罂粟科植物CorydaLis yanHusuo W.T.Wang的干燥根；

延胡索乙素（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号 110726-201011）；

原阿片碱（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号 110853-200402）；

甲醇（色谱纯，购于天津市科密欧化学试剂开发中心）；

其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交实验法优选延胡索提取工艺：选用L9（34）因素水平表，结合成分性质及生产实际选择乙醇浓度，乙醇用量，提取时间，提取次数为因素，各因素水平见表1[2-4]。根据正交安排9种提取工艺，见表2。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent TC－C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-磷酸盐溶液（64：36）流速：1 mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：283 nm。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成0.104 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。

精密称取原阿片碱对照品适量，加甲醇制成0.094 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备

等量称取9份样品各100g，以表3的9种工艺组合进行乙醇回流提取，备用。

2.5 验证和补充试验：为了判定A1B2C3D1结果是否最佳，对上述因素和水平有待于验证；由于溶剂用量影响显著，又以6倍量提取最好，因为又增加了4倍和12倍提取试验，结果见表4。量）×0.4；原阿片碱评分（Y）=（原阿片碱含量/最大原阿片碱含量）×0.4；干膏收率评分(M)=（干膏收率/最大干膏收率）×0.2；综合评分（Z）=X+Y+M

表2 延胡索提取条件正交试验表

表3 方差分析

方差分析：由直观分析表3和方差分析表4，可知A因素对延胡索提取工艺有显著性影响，各因素作用主次为A＞B＞C＞D，A因素中以A1最大，B，C，D因素均无显著性影响，综合考虑工艺成本最终确定最佳工艺为A1B2C3D2，即最佳提取工艺为:6倍量70%乙醇提取2次，2h。

表4 验证补充试验

表4 结果表明，正交试验优选条件A1B2C3D2经验证结果，比正交表内9份样品提取效果都好，增加溶剂用量可以提高提取效果，减少溶剂用量即降低提取效果，综合考虑工艺成本最终仍确定最佳提取工艺为A1B2C3D2，即最佳提取工艺为:6倍量70%乙醇提取2次，2h。

3 讨论

3.1 延胡索为临床常用药,其主要活性成分为生物碱,延胡索中生物碱具有镇痛、镇静、抗溃疡作用、抑制胃分泌、解痉及增加冠脉血流量,抗心律失常等作用。延胡索生物碱含量较低,其在酸水或乙醇中有较好的溶解性能。为充分提高生物碱的利用率,采用乙醇回流提取,进行正交试验法优选提取工艺,为延胡索的临床合理应用及其进一步研究开发打下良好的基础[5－7]。

3.2 应用多指标正交设计法试验进行工艺优选时，首先要解决指标间量纲不一致和指标间的矛盾问题。针对指标间的重要性差异给出各指标权重系数，然后进行综合评分分析。故本试验将指标的权重系数设为延胡索乙素含量为0.4、原阿片碱含量为0.4 ，出膏率为0.2。综合评分后，数据间具有显著性差异，综合考虑工艺成本最终确定最佳工艺为6倍量70%乙醇提取2次，每次2小时。对该提取方法进行方法学分析，结果均表明该方法稳定可行。可为延胡索的进一步开发提供理论依据。

3.3 本试验亦考察了2010版药典所用含量测定方法及乙腈－水系统，发现该法易出现拖尾现象。且流动相配制复杂，故本试验选取甲醇－磷酸盐溶液（64：36）为流动相，流动相现配现用，条件稳定，峰形佳，分离度好，理论塔板数达到要求。经过方法学试验表明该工艺稳定可行，并且延胡索中2种生物碱得率较高，从而有利于提高对延胡索的综合利用。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：人民卫生出版社，2010：94.

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[3]张志国，欧阳荣，黄晓霞,等.正交设计优选抗瘤升白片的提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2002，8（2）：1-3.

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