瑶药葫芦钻不同提取部位体外抗肿瘤实验研究

黄琳芸 郭力城 余胜民 陈少锋 杨东爱 廖安妮

（广西民族医药研究院，广西 南宁 530001）

葫芦钻为天南星科植物石柑子Pothos chinensis(Raf.)Merr.的全草，性微温，味苦辛，无毒，入心、胃二经，具有清热，解毒，祛风湿的功效。是瑶族传统治癌“打药”【1】。前期对葫芦钻进行抗肿瘤实验研究结果表明，葫芦钻提取物具有抗肿瘤作用【2】。为阐明葫芦钻的抗肿瘤作用机制，本实验对葫芦钻不同提取部位在体外进行了抗肿瘤活性研究。现报道如下。

1 实验材料

1.1 受试样品：葫芦钻不同提取部位的制备：葫芦钻全草粉碎，75%乙醇回流提取3次，回收乙醇至无醇味（乙醇总提物）后加水混悬，水液分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物。回收溶剂，提取物干燥至干，均用含有DMSO的培养基溶解，配成浓度为400μg·mL-1溶液，置于-20℃冰箱密闭避光保存。临用前用不含血清和抗生素的RPMI1640液稀释至所需浓度，DMSO最终浓度小于0.01%。

1.2 肿瘤细胞株：人胃癌细胞株SGC7901购自上海细胞生物研究所细胞库。

1.3 试剂：MTT为美国Sigma公司产品 ；FBS（胎牛血清）为杭州四季青生物工程材料有限公司产品，批号090306；RPMI1640培养基为GIBCO分装，LOT.NO 1397535；DMSO(二甲基亚砜)购自天津汇英化学试剂有限公司，批号：20030526。

1.4 细胞培养：肿瘤细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基在37℃，10%CO2条件下培养，取对数生长期细胞用于实验。

1.5 实验仪器：Thermo Forma型CO2培养箱，美国产；Thermo Forma型酶标仪；LEICA倒置显微镜，德国产；Corning型96孔板，美国产；Millpore超纯水仪，美国产；HV-50全自动高压灭菌器，日本产；DLE560型超净工作台，荷兰产；BP211d型万分之一克电子天平，德国赛多利斯产；磁力搅拌器，意大利IKA产。

2 实验方法

2.1 RPMI1640完全培养液的配置：含RPMI1640培养基、3%谷氨酰胺、卡那霉素 750μg·mL-1、10%FBS（临用前加）。

2.2 体外抗肿瘤实验（MTT法）：取对数生长期细胞用0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化后，用培养液稀释。在96孔培养板中每孔加入200μL(含有5000个/ml肿瘤细胞)10%FBS的RPMI1640培养液，置37℃，10%CO2培养箱中培养24h后，弃去旧培养液。实验组分别加入新的培养液190μL∕孔，然后加入不同浓度的葫芦钻各提取物，10μL∕孔，使终浓度分别为 12.5、25、50、100μg·mL-1，对照组则加入200μL∕孔新的培养液。每组 3平行孔，置37℃，10%CO2培养箱中培养4d后，弃去上清液，每孔加入200μL新鲜配制的含0.2mg·mL-1MTT的无血清培养液，37℃继续培养4h，弃上清液，加入200μL∕孔DMSO，振荡混匀后，在酶标仪上以试验波长为570nm，参比波长为450 nm测定OD值，按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：肿瘤细胞生长抑制率（%）=（1-实验组平均OD值∕对照组平均OD值）×100%[3]。

3 实验结果

MTT法测定葫芦钻不同提取部位对SGC7901肿瘤细胞株生长的抑制。结果见表1。

结果显示，葫芦钻的乙酸乙酯部位和正丁醇部位对SGC7901肿瘤细胞株有一定的抑制作用，并与浓度呈正相关作用。

表1 葫芦钻不同提取部位对SGC7901肿瘤细胞的抑制作用（%）

4 讨论

本实验通过采用MTT法研究葫芦钻不同提取部位体外抗肿瘤作用。结果显示葫芦钻的乙酸乙酯和正丁醇部位对SGC7901体外培养细胞有一定的抑制作用，其抑制率随着药物浓度增加而相应增高。石油醚部位的细胞毒作用不明显，可能石油醚部位通常为去除鞣质、叶绿素等干扰成分。提示葫芦钻提取物乙酸乙酯和正丁醇部位在体外对肿瘤细胞生长具有抑制作用。

近年来，从天然植物中寻找新的抗肿瘤药物已成为新药研究的主要发展方向之一。本研究为揭示葫芦钻抗肿瘤作用及其物质基础，实现药材可持续开发利用提供实验依据。

[1]戴斌，丘翠嫦，李钊东，等.瑶医用药品种调查报告[J].中草药，1997，28（12）：746～749.

[2]黄琳芸，余胜民，钟鸣，等.瑶药葫芦钻提取物抗肿瘤作用的实验研究[J].时珍国医国药，2007,18（7）：1590.

[3]张均田.现代药理实验方法（上册）［M］.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998，818.