HPLC法测定蒙药材小秦艽花中龙胆苦苷的含量

2012-11-29李海欧唐传禹宋宏春

中国民族医药杂志 2012年2期

李海欧唐传禹宋宏春

（1.内蒙古医学院，内蒙古呼和浩特 010000;2.内蒙古食品药品检验所，内蒙古呼和浩特 010000）

小秦艽花原植物载于十八世纪蒙医伊希巴拉珠尔著《认药白晶鉴》。称：“（邦占）生于沼泽地，叶小，椭圆状，茎细。据花色分为白、蓝、黑三种。”十九世纪蒙药学家占布拉道尔吉著《无误蒙药鉴》载：“初秋时节生于潮湿草滩，性状同上（白花龙胆）但叶小，花淡蓝色。”文献报道[3]，药材中含有主要有效成分龙胆苦苷，为了考察本药材的质量，故对其有效成分龙胆苦苷建立了含量测定。经方法学考察和对2批样品的测定结果表明，本法操作简单，重复性好；龙胆苦苷化学性质稳定，可作为本药材的质量控制指标。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：高效液相色谱仪为岛津LC-20A；二极管阵列检测器；色谱数据工作站为LC-solution。

1.2 试剂试药：龙胆苦苷对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110770-200611；小秦艽花：分别采集于内蒙古大青山蜈蚣坝、内蒙古呼和浩特市和林格尔县南天门，经内蒙古食品药品检验所标本馆周凯主任、内蒙古食品药品检验所蒙药室康双龙主任鉴定均为正品。甲醇为色谱纯，其他均为分析纯试剂。水为纯化水。

2 方法学考察

2.1 色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Allitima，Apollo 5μm 4.6mm×250mm）的硅胶柱；流动相：甲醇-水（25∶75）；流速：1.0mL·min-1；检测波长270nm，理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于5000。

2.2 供试品溶液的制备：供试品溶液的制备取本品粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备：取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.4 专属性考察：精密吸取甲醇空白溶剂，龙胆苦苷对照品溶液，供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪。龙胆苦苷对照品色谱峰峰纯度好，紫外光谱最大吸收为274nm；供试品溶液中龙胆苦苷色谱峰保留时间与龙胆苦苷对照品一致，峰纯度及分离度好，紫外光谱与龙胆苦苷对照品一致，在274nm处有最大吸收。甲醇空白溶剂无吸收。表明该含量测定方法专属性好，空白溶剂无干扰。结果见图4。（见图A B C）

2.5 线性关系考察：按2.3对照品溶液制备方法，精密称取龙胆苦苷对照品2.363mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（浓度为：94.52μg·mL-1）。精密吸取对照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积值，与进样量做线性回归。结果表明龙胆苦苷在189.04～945.20ng范围内呈良好的线性关系。线性回归方程为y=1280.416x-278.950；r=1.000。

2.6 稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在放置 0、4、8、12、18、24(h)，注入液相色谱仪，记录峰面积值，结果表明龙胆苦苷在24h内的面积积分值基本稳定不变。RSD为0.24(%)。

2.7 重复性试验：取同一批样品按供试品溶液制备方法制备6份样品溶液，分别注入液相色谱仪测定峰面积，计算含量，结果平均含量为0.0973%,RSD为0.44%。

2.8 精密度试验：取同一批样品，分别注入液相色谱仪测定峰面积，RSD=0.20%，结果显示精密度试验良好。

2.9 回收率试验：取同一批已知含量的样品6份，每份取0.75g（正常量的一半），精密称定，分别精密加入龙胆苦苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，摇匀，滤过，取续滤液，分别注入液相色谱仪测定含量，计算回收率，结果见表1。