抗瓜氨酸化蛋白/肽抗体及类风湿因子在类风湿关节炎早期诊断中的应用

王 毅 白 雪 张 凯 韩伟桐 白人骁

2009年10 月美国风湿病学会（ACR）联合欧洲抗风湿病联盟（EULAR）公布了新的类风湿关节炎（RA）分类标准ACR/EULAR 2010，增加了抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPA）并要求重视其与类风湿因子（RF）在RA诊断中的作用[1]。对于病程在1年以内的RA患者，2010年分类标准和1987年分类标准的敏感性分别为91.0%和62.9%，特异性均为92.9%[2]。本研究旨在评价抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体及抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体及RF在RA中的诊断价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2010年4月—2011年3月于我院就诊的早期RA患者30例，男11例，女19例，平均年龄（43.61±13.45）岁，病程（6.51±2.53）个月，无典型的放射学RA骨侵蚀，诊断符合ACR/EULAR 2010分类标准[1]，所有患者均记录病史、病程，检查触痛关节数（T28）、肿胀关节数（SW28），确诊前均未进行改善病情的抗风湿药物（disease modifying anti⁃rheumatic drugs，DMARDs）治疗。排除标准：严重糖尿病、高血压及心脑血管疾病者；有感染、肝肾疾病、肿瘤及其他慢性疾病者；吸烟者。同期收集骨性关节炎（OA）和强直性脊柱炎（AS）患者（OA和AS组）各16例，男13例，女19例，平均年龄（43.51±14.63）岁。同期选择健康体检者（对照组）30例，男10例，女20例，平均年龄（44.61±12.11）岁。各组间年龄（F=2.01）、性别（χ2=0.35）差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 主要仪器与试剂 抗CCP3抗体及抗MCV抗体检测使用美国DYNEX-MRXⅡ型酶标仪。抗CCP3抗体试剂盒购自上海荣盛生物药业有限公司。抗MCV抗体试剂盒购自ORGENTEC公司。RF及CRP检测使用BECKMAN COUL⁃TER生产的全自动蛋白分析仪及其配套试剂。ESR检测使用天津市赛科希德科技公司的EHK-40红细胞沉降压积仪。

1.3 方法 所有研究对象均于清晨空腹采集静脉血，用于抗CCP3抗体、抗MCV抗体、RF及CRP的检测。3.8%枸橼酸钠抗凝血用于红细胞沉降率（ESR）检测。抗CCP3抗体、抗MCV抗体检测采用间接酶联免疫吸附测定法（ELISA）法。以抗CCP3抗体＞12 RU/mL、抗MCV抗体≥20 U/mL、RF≥30 IU/mL为阳性的参考标准。采用平行试验分析抗体联合检测的价值，包括敏感性、特异性及准确度等。患者疾病活动评分（DAS28）：以28个关节计分，检查双侧近端指间关节、掌指关节、腕关节、肘关节、肩关节及膝关节，得出关节触痛或被动活动时T28，检查28个关节肿胀与否，得出SW28。DAS28=[0.56×+0.28×+0.70×Ln(ESR)]×1.08+0.16。DAS28范围从0～10分，得分越高提示病情活动性越高。RA患者治疗3个月后观察DAS28、CRP、ESR及3种抗体的水平变化。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0统计学软件进行分析，正态分布的计量资料以±s表示，2组比较采用t检验，否则以中位数 M（P25，P75）表示，2组比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料的比较采用χ2检验，多组比较采用行×列表的χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组中3种抗体阳性率比较 RA组3种抗体阳性率均高于对照组、OA和AS组，差异有统计学意义（P<0.01）。对照组与OA和AS组3种抗体阳性率比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 3种抗体对RA诊断的性能评价 抗MCV抗体对RA诊断的敏感性为76.67%、特异性为96.77%，抗CCP3抗体对RA诊断的敏感性为66.67%、特异性为95.16%，见表2。

Table 1 Comparison of positive rates of three kinds of antibodies between three groups表1 各组3种抗体阳性率比较 例（%）

Table 2 Rating of merit of anti-CCP3 antibody,anti-MCV antibody and RFin RA diagnosis表2 抗CCP3抗体、抗MCV抗体及RF对RA诊断的性能评价

2.3 抗CCP3抗体、抗MCV抗体及RF联合检测的结果 RF与抗MCV抗体、抗MCV抗体与抗CCP3联合检测的敏感性分别为83.33%，80.00%，见表3。

Table 3 Result analyze of anti-CCP3 antibody,anti-MCV antibody and RF in RA diagnosis表3 抗CCP3抗体、抗MCV抗体及RF联合检测的结果分析

2.4 RA患者治疗后各检测指标的变化 RA患者治疗后DAS28、ESR、CRP、抗MCV抗体及RF水平较治疗前降低，差异有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。抗CCP3抗体水平治疗前后差异无统计学意义（P>0.05），见表4。

Table 4 Changes of test index after treatment in RA patients表4 RA患者治疗后各检测指标的变化

3 讨论

RA为一种高致残性自身免疫性疾病，发病2年内即可出现不可逆的骨关节破坏，导致运动功能和生活质量下降。早期诊断、早期治疗是阻止RA病情发展和减少致残率的关键。在实验室诊断指标中ACPA因具有较好的敏感性和较高的特异性而得到公认[3]。近年来，抗CCP抗体的第二代、第三代检测试剂盒问世，其对RA诊断的敏感性均高于第一代抗CCP抗体[4]。抗MCV抗体为RA新的诊断指标，尚未在临床广泛应用。研究认为，抗MCV抗体在RA诊断中具有较高的敏感性和特异性[5]。本研究显示，抗MCV抗体与抗CCP3抗体对RA诊断均具有较高的特异性（96.77%，95.16%）。抗MCV抗体对RA诊断的敏感性优于抗CCP3抗体（76.67%，66.67%），可能原因是，CCP为人工合成，其分子比波形蛋白小20倍，仅有1～2个潜在抗原决定簇。MCV抗原具有45个可被瓜氨酸化的潜在抗原凹位。抗MCV抗体与抗CCP3抗体诊断的敏感性、特异性均高于RF，提高敏感性是提高早期诊断率的关键，本研究采用平行试验结果显示，RF与抗MCV抗体组合、抗MCV抗体与抗CCP3抗体组合，与单独使用比较，其诊断敏感性均有所提高。

DAS28是RA患者病情活动的一个综合性评估标准。ESR、CRP为最常用的反映RA疾病活动的指标。本研究显示，RA患者治疗3个月后，DAS28、ESR和CRP水平均较治疗前降低，表明患者治疗后疾病活动性下降，治疗有效。RF及抗MCV抗体水平治疗前后差异有统计学意义，抗CCP3抗体水平治疗前后差异无统计学意义，表明RF及抗MCV抗体也是评价疾病活动的重要指标[5-6]。有研究认为抗CCP3抗体不能作为判断疾病活动性指标[7]。Bang等[5]研究显示，抗MCV抗体与RA疾病的活动性呈正相关，而与抗CCP抗体无相关性。因此，抗MCV抗体对判断疾病活动性方面也可能优于抗CCP3抗体。

RA、OA及AS均属于风湿性疾病，为骨关节的炎症，3种疾病的鉴别除根据临床症状、影像学检查外，ACPA及RF的检测也是一种有用的方法。本研究显示，RA组3种抗体阳性率均高于对照组及OA和AS组，差异有统计学意义，而对照组与OA和AS组3种抗体阳性率差异均无统计学意义，提示3种抗体的检测均有助于鉴别RA与OA、AS。

综上所述，2种ACPA对RA早期诊断均具有较高的特异性，抗MCV抗体具有较高的敏感性，作为一种RA诊断的新指标，具有推广价值。

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